ШТАММ В(ПАНАМА)90(4)Е ВИРУСА ГРИППА, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЖИВОЙ ИНТРАНАЗАЛЬНОЙ ГРИППОЗНОЙ ВАКЦИНЫ ДЛЯ ВЗРОСЛЫХ И ДЕТЕЙ Российский патент 1997 года по МПК C12N7/00 

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано в здравоохранении для профилактики эпидемического гриппа среди детей живой интраназальной гриппозной вакциной из штамма В/Панама/90/4/Е. Известный штамм В/Пекин/203/89, 11Р прототип утратил антигенную актуальность и вследствие этого не может вызывать защитную реакцию во время эпидемии гриппа В/Панама/45/90.[1,2]
Задачей, на решение которой направлено изобретение, является получение вакцинного штамма актуальной антигенной разновидности на основе эпидемического вируса В/Панама/45/90.

Вакцинный штамм В/Панама/90/4/Е получен методом генетической реассортации эпидемического вируса В/Панама/45/90 с холодоадаптированным штаммом В/СССР/69/Е донором аттенуации, с последующей селекцией в присутствии антисыворотки к вирусу В/Панама/45/90.

Методом сравнительного анализа электрофоретической подвижности фрагментов РНК родительских вирусов и реассортантных клонов в полиакриламидных гелях установлено, что вакцинный штамм В/Панама/90/4/Е унаследовал 6 генов, кодирующих внутренние белки PB1, PB2, PA, NR, M, NS, от донора аттенуации и 2 гена, кодирующих поверхностные белки HA (гемагглютинин) и NA (нейраминидазу) от эпидемического вируса. Штамм является температурочувствительным (разность титров при 32 и 37,5^oC 7,0 lg ЭИД 50/0,2 мл) и холодоадаптированным (разность титров при 32 и 25^oC 2,5 lg ЭИД 50/0,2 мл).

Таким образом, представленный вакцинный штамм В/Панама/90/4/Е характеризуется сочетанием полезных признаков, необходимых вакционному штамму: антигенной специфичностью поверхностных белков эпидемического вируса В/Панама/45/90, структурой генома, оптимальной для реассортантных вакционных штаммов, температурочувствительностью и холодоадаптированностью, что коррелирует с аттенуацией для человека, характерной для донора аттенуации.

Морфология штамма полиморфная типичная для вируса гриппа.

Инфекционная активность при репродукции в развивающихся куриных эмбрионах при 32^oC в течение 65 ч 9,5 lg ЭИД 50/0,2 мл.

Гемагглютинирующая активность 1 512.

Штамм проявляет генетическую стабильность биологических признаков после 5 пассажей на куриных эмбрионах (при использовании больших заражающих доз).

Штамм В/Панама/90/4/Е ареактогенен и иммуногенен для взрослого контингента.

Пример 1. При вакцинации 56 взрослых лиц интраназально вакциной в разведении 1 2 в объеме 0,5 мл средних температурных реакций не наблюдалось. Показатель реактогенности в группе вакцинированных и плацебо 0. При изучении в реакции РТГА сывороток крови серонегативных вакцинированных лиц был обнаружен 4-кратный и более прирост сывороточных антител к эпидемическому штамму В/Панама/45/90 в 46,7% случаев. Средние геометрические титры антител во вторых сыворотках составили 22,9.

Таким образом, вакцинный штамм В/Панама/90/4/Е по показателям реактогенности и иммуногенности соответствует требованиям, предъявляемым фармакопейной статьей ФС 42-299 ВС-89 к вакцинным штаммам для живой гриппозной вакцины для интраназального применения для взрослых.

Штамм ареактогенен при интраназальном введении детям 3 14 лет.

Пример 2. Группу из 103 детей в возрасте 3 14 лет вакцинировали интраназально в объеме 0,5 мл рекомбинантным штаммом В/Панама/90/4/Е с инфекционной активностью 8,5 lg ЭИД 50/0,2 мл. Группа детей того же возраста из 106 человек получила плацебо.

Сильные температурные реакции с повышением температуры свыше 38,5^oC не наблюдались. Средние реакции в диапазоне 37,6 38,5^oC наблюдались в 1,8% Показатель реактогенности составил 1,8% Слабые температурные реакции (до 37,5^oC) в 12,6% случаев.

В группе детей, получивших плацебо, средние температурные реакции не отмечались, а слабые наблюдались в 9,4% случаев.

Таким образом, вакцинный штамм А/47/Пекин/92/3 (H3N2) по показателям реактогенности соответствует требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам фармакопейной статьей ФС 42-298 ВС-89 на живую гриппозную вакцину для интраназального применения детям 3 14 лет.

Использование: вирусология. Сущность изобретения: получение вакцинного штамма для живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых людей и детей, соответствующего по антигенным свойствам актуальному вирусу В/Панама/45/90. Вакцинный штамм В/Панама/90/4/Е-реассортант, полученный путем скрещивания эпидемического вируса В/Панама 45/90 с холодоадаптированным температурочувствительным вирусом В/СССР/69Е - донором аттенуации, безвредным для взрослых и детей, свойства которого дают возможность гарантированно получать реассортантные вакцинные штаммы из вновь появляющихся эпидемических вирусов. Штамм В/Панама/90/4,Е активно размножается в развивающихся куриных эмбрионах при оптимальной температуре 32 - 34^oC, характеризуется температурочувствительностью и холодоадаптированностью. Реассортант унаследовал от эпидемического вируса два гена, кодирующих поверхностные белки (гемагглютинин и нейраминидазу) от эпидемического вируса и шесть генов, кодирующих негликозилированные белки от донора аттенуации. Штамм В/Панама/90/4/Е ареактогенен для взрослых и детей 3 - 15 лет при интраназальном введении и удовлетворяет показателям иммуногенности. Штамм депонирован в Государственном институте стандартизации и контроля им. Л.А. Тарасевича под N 105. Таким образом, вакцинный штамм В/Панама/90/4/Е по биологическим свойствам и показателям реактогенности соответствует требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам фармакопейной статьей ФС 42-298 ВС-89 и ФС 42-299 ВС-89 на живую гриппозную вакцину для интраназального применения детям 3 - 14 лет и живую гриппозную вакцину для интраназального применения для взрослых. 1 табл.

Штамм В(Панама)90(4)Е вируса гриппа ГКВ N 105 (Государственный институт стандартизации и контроля им. Л.А.Тарасевича), используемый для получения живой интраназальной гриппозной вакцины для взрослых и детей.