Способ фиксации препарата глаза для гистологического исследования Советский патент 1993 года по МПК G01N33/48 G01N1/28 

(Л

С

Использование: в области медицины и может применяться для фиксации глазных гистологических препаратов, например склеры глазного яблока. Сущность изобретения: препарат глазного яблока обра- батывают 3-5%-ным раствором диметилфосфита, фиксацию проводят 3-5 ч. Затем объект помещают на 2 ч в 2-3%-ный водно-солевой раствор бишофита для смягчения фиксированного объекта. С препаратов, обработанных предложенным способом, получают качественные гистологические препараты за счет исключения ломкости и крошения, возникающих при нарезке. 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к фиксаторам для гистологических трепаратов. Может применяться для фиксации глазных гистологических препаратов, например склеры глазного яблока.

Цель изобретения - получение глазных препаратов более высокого качества за счет исключения ломкости и крошения, возникающих при нарезке.

Для выполнения поставленной цели для фиксации берут не более 1x1 см объект и помещают его вЗ 5%-ные водные растворы |диметилфосфита. Фиксацию проводят в течение 3-10 ч. Затем объект помещают в 2- 15% водно-солевой раствор бишофита на 2 часа, Объект заключают в парафин, готовят срезы искрашивают гистологическими красителями.

| Объект, помещенный в водно-солевой Ьаствор бишофита, находится в нем 2 ч и после этого становится более мягким и эластичным, при нарезке не крошится и не ломается.

Приготовление водно-солевого раствора бишофита проводили следующим образом: раствор бишофита, приготовленного фабричным способом в следующих соотношениях компонентов:

Хлорид магния 450-460 г/л твердого вещества солей

Бромид магния4-9 г/л Сульфат кальция 3-4 г/л Хлорид калия до 4-5 г/л Хлорид натрия до 4-5 г/л Вода до 100. мае. ч. Общая минерализация бишофита равна 450-460 г/л. По внешнему виду это прозрачная бесцветная или слегка желтоватая без запаха жидкость. Раствор бишофита утвержден начальником управления по внедрению новых лекарственных средств и медицинской техники МЗ СССР Э. Бабаян 18 марта 1985 года. Бишофит применяется

00 Ы 00 XI 00 Ь,

00

в качестве добавки в топливо при сжигании сернистых мазутов, для пропитки древесины, изготовления дефолиантов, в бальнеологических целях.

Приготовление водно-солевого раство- рэ бишофита проводили с расчетом на 100 г/л (5 растворов, см. табл. 1).

Закладка объекта проводилась на 0,5, 1, 2, 3, 4, 5 ч, исследовали свойства гистологи- ческих препаратов после закладки объекта вначале в раствор бишофита до закладки в водный раствор диметилфосфита. Затем исследовали свойства гистологических препаратов приготовленных: вначале закладывали в раствор диметилфосфита, затем в водно-солевой раствор бишофита.

Как показали исследования, оптимальным временем для закладки объекта в водно-солевой раствор бишофита было 2 ч, оптимальный раствор для закладки был 2-3, что соответствовало 2-3 г фабричного бишофита к 98-97 г дистиллированной воды (2-3% раствор водного бишофита). Глазные гистологические препараты, например пре- парат склеры глазного яблока, были высокого качества и легко проводилась нарезка после того, как объект 3-10 ч находился в 3-5% водном растворе диметилфосфита, хорошо зафиксированный, он несколько размягчался в 2-3% водцо-солевом раствора бишофита в течение 2ч. После этого кусочек склеры, заключенный в парафин, хорошо резался на микротоме, Далее проводили окраску гистологическими красите- лями. . .: -. ,

Пример. Кусочек склеры глазного яблока размером 1x1 см погружали в 20 мл 3%-ного водного раствора диметилфосфита. Фиксацию проводили в течение 10 часов. Затем склеру переносили, в 2% водно-солевой раствор бишофита на 2 ч. Проводили нарезку (при приготовлении их нет разрывов, склера не крошится, нет деформаций), Срезы окрашивали гематоксилин-эозином. Эластические волокна склеры хорошо сохранены., имеют обычную окраску.

П р и м е р 2. Кусочек склеры глазного яблока размером 1X1 см погружали в 20 мл 5%-ного водного раствора диметилфосфита на 3 ч. Затем склеру переносили в 3% водно-солевой раствор бишофита на 2ч. Затем готовили срезы (при приготовлении их нет разрывов, склера не крошится, легко.режит. ,

ся, без деформаций, артефактов). Срезы окрашивали гематоксилин-эозином. Эластические волокна склеры и собственное вещество хорошо сохранены, имеют обычную окраску.

При использовании 0,5%, 1% растворов водно-солевого бишофита наблюдалась недостаточная мягкость склеры для приготов- ления срезов, склера продолжала крошится, ломаться. При использовании 4% водно-солевого раствора бишофита склера сильно разволокнялась, менялась структура склеры. В связи с перечисленными недостатками использование растворов 0,5, 1 и 4% водно-солевого раствора бишофита представляется нецелесообразным. Кроме того, проводилось исследование на выявление оптимального времени закладки в раствор бишофита. Недостатками в режиме работы 0,5 и 1 ч были: недостаточная мягкость склеры, ломкость, При режиме работы 3, 4 и 5 ч наблюдалась деформация эластических волокон склеры, их разволокнение.

Наилучшие результаты получены при использовании вначале раствора диметилфосфита и далее водно-солевого раствора бишофита. В полученных микропрепаратах при таком способе фиксации склеры и режиме фиксации была сохранена эластическая структура склеры, нет разрывов, артефактов, деформаций.

При использовании в качестве фиксатора только одного водно-солевого раствора бишофита наблюдались недостатки: склера была набухшей-, плохо резалась, гистологические препараты недостаточно окрашивались, наблюдалась деформация эластических волокон склеры.

При использовании сначала водно-солевого раствора бишофита, затем водного раствора диметилфосфита также отмечались недостатки в полученных микропрепаратах; разрывы, дефекты, деформации эластических волокон склеры.

Формула изобретения Способ фиксации препарата глаза для гистологического исследования, включающий его обработку 3-5%-ным водным раствором диметилфосфита.о тличающийся тем, что, с целью повышения качества препарата, дополнительно препарат обрабатывают .2-3%-ным водно-солевым раствором бишофита в течение 2ч.