ШТАММ НЕСОВЕРШЕННОГО ГИПЕРПАРАЗИТАРНОГО ГРИБА GEIOCLADIUM FIMBRIATUM OILMAN ЕТ ABBOT № 78А ВНИИФ Советский патент 1969 года по МПК A01N63/04 

Изобретение относится к штаммам микроорганизмов, продуцирующих биологически активные вещества, которые могут быть использованы для борьбы с вредителями растительного и животного происхождения, в частности, с различными фитопатогенными грибами.

Ранее описанные в научной литературе или хранящиеся в коллекциях штаммы этого вида, например щтамм Gliocladium fimbriatum G. et Abb. ИНМИ, ранее не были известны как продуценты биологически активных веществ.

Предлагаемый штамм является продуцентом биологически активных веществ, способных оказывать угнетающее действие на ряд микроорганизмов, таких как Botrytis cinerea, Fusarinm oxysporum, Erysiphe cicheracearum, Pucinia graminis, Phytophthora infestans и ряд других.

Описываемый штамм был выделен методом отсева сиор на агар Чапека с колоний, обнаруженных иа фитофторных тканях клубней картофеля, в Московской области, осенью 1966 г., т. е. иредставляет из себя гиперпаразитарную форму известного сапрофитного почвенного гриба Gliocladium fimbriatum G. et Abb., относящегося к несовершенным грибам (Fungiimperfecti) порядку Moniliales (Hyphales), роду Gliocladium Corda. Синонимами видового названия гриба являются Муrothesium verrucoria (Alb. et Sehw). Ditmar ex Pr. и Metarrliizium glutinosum Pope.

Наличие биологически активных веществ у описываемого изолята было установлено воздействием культуральной жидкости на прорастающие конидии и . мицелий фитопатогенных грибов. При этом зооспоры Ph. infestans, например, полностью инактивируются в течение 5-6 сек пребывания в культуральной жидкости, разбавленной 1 : 3, или в случае воздействия такой жидкости на неироросшие зоосиорангии не выходят. Мицелий Erysiphe cichoracearum invivo лизируется в течение суток. Конидии Botrytis cinerea и Fus, oxisporum прорастают, но дают уродливые ростки.

Панесеиие капли суспензии G1. fimbriatum в центр колонии Fusurium oxysporumi, растущей на агаризованной среде Чапека в чашке Петри, показывает, что по мере роста фузариума его колонии постепенно обрастают глиокладиумом, показывая тем самым способность последнего функционировать гиперпаразитарно, с деструктивным воздействием на хозяина.

Культуры описываемого штамма, выращенные на среде Чапека, не утрачивают способности воздействовать на подвижные зооспоры возбудителя фитофтороза картофеля (Phytophthora infestans) при хранении этих культур в течение 12 месяцев при 5 С°. Рассев моиоспоровых культур (200 посевов) показал идентичность морфологии колоний, что свидетельствует о стабильности штамма. Испытание различных сред для глубинного выраш,ивания, в состав которых входили различные источникн углерода-р минеральный комнлекс (KHsPOi -0,2%; 0,2э/о; MgSO.t 0,2%; FeSOi, 0,1%; CuSOa 0,1о/„ „ MnSO,; 0,1%), показало, что ири температуре 22° С на средах, содержащих вышеназванный комплекс и сахарозу (5%)-|-соевую муку (1,5%) или маннит (5и/о) + пептон (1%), рост гриба отсутствует. На средах, содержандих глюкозу (5%)+пентон (lo/o) или глюкозу (5%)+NHiN03 (5о/о) + кукурузный экстракт (1%), гриб не образовывает конидий в течение свыше двух недель. На среде, содержаш,ей минеральный комплекс и сахарозу (5%)+соевую муку (1,5%), наблюдался интенснвный распад мицелия гриба на оидии, без образования истинных конидий. На среде, содержащей, помимо минерального комнлекса, крахмал (5%)+NH4NO3 (5%)-f кукурузный экстракт, конидии образовывались в количестве 17,5 млн. в 1 мл культуры, а на среде с крахмалом (5%) и неитоном (1%) - в количестве 25 млн. в 1 мл. Носледняя среда признана оптимальной для глубинного выра-щивания. Описываемый штамм имеет следующие технолого-биологические показатели: рост на стандартной среде Чапека (с агаром н без агара) хороший, мицелий, шерстистый зеленый, в период роста с белой пушистой окантовкой. Спороношение интенсивное. Конндни в воде ири температуре 18-22° С прорастают в течение 1-2 час и через сутки начинают формировать новое поколение спор. Полное созревание культур на питательной среде при температуре 22° С - на 5-6 сутки. Культуральная жидкость окрашена в желто-зеленый цвет. Биологически активные вещества выделяются без дополнительных воздействий экстрагирующими веществами. Колонии, выращенные на агаре Чапека, при хранении в течеипе 6 месяцев в воздушно-сухом состоянии при температуре 5° С и новых нересевах иа этой же среде сохраняют морфологические показатели и сиособность выделять биологпческп-активные вещества. Нри нанесении на ткани растеиий культуральной жидкости или суспензии спор гриба патологических явленир не наблюдается. Семена огурцов прорастают в суспензии спор гриба и дают нормально развивающиеся растения. Предлагаемый штамм гриба Gliocladiuni linibriatuin может быть иенользован в качестве биологического средства защиты растений от фитопатогенных грибов путем нанесения водной суснензни его сиор на иоверхность колоний этих грибов, а также в качестве исходного штамма для отработки нромышленных штаммов-продуцентов веществ, биологически активных иротив возбудителей болезней растений, например фитофторы картофеля, фузариоза картофеля, серой гнили, мучнистой росы и аскохитоза огурцов и ряда других. Предмет изобретения Штамм несовершенного пшерпаразитарного гриба Giiocladium fimbriatum Oilman et Abbot N 78A ВНИИФ, нродуцирующий биологически активные вещества против возбудителей болезней растений, например, грибов Phylophthora infestans P. В., Botrytis einerea Pers., Fusarium oxysporum Schlecht, Puccinia graminis, Erysiphe eichoracearum P.C. и ряда других, обладающих нижеперечислеииыми свойствами: Морфология. На агаре Чапека при температуре 22-24° С, на восьмые сутки колонии округлые, компактные, зеленоватые, ворсистые. Конидиеносцы 15-60 мк длины и 3-4 мк ширииы, вверху кистьевидно разветвленные, с компактными хорошо развитыми веточками 15-25 мк длины и нальчатовндными или бутылковидиыми стеригмами 8-16 мк длины. Конидии одиоклеточиые, яйцевидные или почти шаровидные, с гладкой оболочкой, 2,5-4 мк, собраны на концах веточек в шаровидиые слизистые головки. Культуральные ирнзнаки. На агаре Чапека при 22°С начало роста мицелия наблюдается на вторые сутки, иоявление зрелых конидий отмечается на 3-4 сутки, прекращение роста на 15-17 сутки. К этому времени диаметр колоний достигает 4-5 см. Номимо агара Чапека, гриб хорошо растет и сиорулирует на стерилизованном зерне овса и при глубинном выращивании в среде, содержащей 55/0 крахмала; 1% иеитона; 0,2% 0,2% KsSO.; 0,2% MgSOj; 0,1% eso.,; 0,01% CuSOj и 0,1% MnSO или близой к ней по составу, образуя при этом до 5-103 спор в 1 см среды.