Изобретение отиосится к способам определения содержания аминокислот в белках, в частности к колориметрическому способу определения содержания лизина в белках.
Известен способ определения содержания лизипа в белках из семяи растений, основанный на реакц11и с нипгидриновым реактивом, включающий отделение от белков свободных аминокислот. Однако этот способ сложен и недостаточно точен.
Для упрощения и повышения точности анализа нингидриповым реактивом обрабатывают выделеиную из белков, оставщихся после удаления свободных аминокислот, эпснаминогруппу лизина. Отделение свободных амннокислот осуществляют обработкой 80%-ным этиловым спиртом при нагревании до 80°С и частичным растворение.м и переосаждением белков сульфосалпциловой кислотой. Эисиамипогруппу лизипа выделяют путем частичного растворения белков в 4%-ном растворе углекислого натрия при температуре 80С.
Способ определения содержания лизина, например в муке из семян кукурузы, осуществляется следующим образом.
К 30 мг тонкоизмельчеииой муки, помен1;енной в центрифужную пробирку, добавляют 2мл смеси для извлечеиия белков (0.2% ХаОМ +0,2% метабисульфата натрпя+2,0% ) и настаивают 1 час при частом перемещпваПИИ. Затем в пробирку добавляют О.о мл 5%ной сульфосал пи1ловой кислоты для осаждеппя белков и центрпфугируют смесь 10 мин при 5000 . Верхнпй слой осторожно слнвают и отбрасывают. К осадку добавляют 1 мл 4%-ного раствора ХаоСОз, и пробирки помещают па 10 мин в водяную бапю при . После этого раствор подкисляют двумя каплями копцентрироваппой муравьиной кислоты, перемешивают п добавляют 2 мл нпнгндрпнового раствора, перемешивают и нагревают 30 мин па водяно11 бане прн 80°С.
Затем в пробирку добавляют 2 .i/.г воды и 5 мл н-бутапола. Содержимое эпергнчпо встряхивают п отстаивают в течеиие 10 мин. После этого 3.5 .мл верхнего окрашенного в красный пвет раствора отбирают в кювету элсктрофотоколориметра. добавляют туда 0.5 мл этилового спирта, перемешивают и измеряют экстинкцию при зеленом светофнльтре против контрольного раствора.
Предмет изобретения
1. Колориметрический способ оиределеиия содержания лпзша в белках. HaiipHMep из семян растеп;п к оспованньп на реакции с 1П1пг11ДрииоБым реактивом, включаюнии отделение от белков свободных ампнокис.ют, ог.шчоощипс. тем, что. с целью уирощения л иовышеиия точ3ности анализа, нннгидриновьш реактивом обрабатывают выделенную из белков, оставшихся после удаления свободных аминокислот, эпсиаминогруппу лизина. 2. Сиособ по и. 1, отличающийся тем, что от-5 деление свободных аминокислот осуществляют обработкой 80%-ным этиловым спиртом ири нагревании до 80°С. 4 3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что отделение свободных аминокислот осуществляют путем частичного растворения и переосаждекия белков сульфосалициловой кислотой. 4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что эпсиаминогруппу лизина выделяют путем частичного растворения белков в 4%-ном растворе углекислого натрия при 80°С.
