СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПЛЕКСА ФИЗИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ИЗ ДРОЖЖЕЙ Советский патент 1971 года по МПК C12P1/02 A01N63/02 C12N7/06 

Известен способ получения комплекса физиологически активных веществ, который включает операции освобождения дрожжевых клеток, концентрирования культуральной жидкости и центрифугиров-ания.

С целью получения комплекса, ингибирующего вирус табачной мозаижи и Х-вируса картофеля, концентрирование проводят в вакууме, целевой продукт осаждают органическим растворителем, обрабатывают рибонеуклеазой, фенолом, органическим растворителем и подвергают диализу.

Известно, что дрожжи, например Candida tropicalis, Candida arborea, продуцируют вещества, ингибирующие активность фитопатогенных вирусов - вирус табачной мозаики и Х-вирус картофеля.

Применение антивирусных веществ совместно с культур альной жидкостью затруднено в связи с необходимостью хранения и транспортировки, а также в связи с низкой концентрацией активного начала в нативных биомассах.

Предлагается способ получения комплекса физиологически активных веществ из дрожжей, предпочтительно из дрожжей Candida tro.picalis 3b и Candida arborea KAM-1, который, заключается в- следующем.

центрируют до 1/10 первоначального объема упариванием (t 45°C;) в вакууме, затем центрифугируют при 100000 g в течение 3- 4 час. Осадок отбрасывают, а из надосадочной жидкости вещества осаждакхт 80%-ным этанолом. Растворенный в воде (t ;45°C) осадок обрабатывают вначале рибонуклеазой (30 мкг/мл в 0,001 М NaCl, 2 час при 25°С), а затем фенолом (1 : 1,30 мин) или фенольнохлороформной смесью (9:1). Реакционную смесь центрифугируют при 3000 g в течение 45-50 мин, фенольную фазу отбрасывают, а водную диализируют через целофан против воды не менее 48 час. Из диализата иагибитор два-три раза переосаждают 80с/о-ным этанолом. После этого его окончательно осаждают безводным этанолом, промывают этанольно-эфирной смесью (1:1), эфиром и высушивают в вакууме.

В качестве исходного материала для получения ингибитора по предлагаемому способу наряду с культуральными жидкостями может использоваться также водный экстракт гомогенизированных клеток дрожжей, а также

дрожжевой экстракт.

Пример 1. Для выделения ингибитора были взяты культуральные жидкости дрожжей Candida tropicalis 3b и Candida arborea KAM-1, выращенных на солодовом сусле (7

Исходный вес сухих веществ этих культуральных жидкостей соответственно составлял 30 и 27 е. По предлагаемому способу из них получено 0,51 и 0,52 г соответственно очищенных препаратов, что составляет 1,7 и 1,9% сухого веса исходного продукта;. Воздуш.но сухие препараты имели вид белых порошков. Их влажность не -превышала 9,0- 9,4%. Препараты хорошо растворялись В воде и физиологическом растворе. Седиментационным анализом установлена высокая степень гомогенности полученных препаратов.

Пример 2. Получение вирусного инги1битора из гомогената клеток дрожжей Candide tropicalis 3b и Candide arborea KAM-1.

1,54 г дрожжевых клеток, предварительно отмытых от культуральной жидкости физиологическим раствором, растирали в присутствии абразивов и 1-2 мл дистиллированной воды. Из полученного гомогената экстрагировали водорастворимые вещества, которые служили исходным материалом для выделения ингибитора по предлагаемому способу. Из этого экстракта выделено 0,035 г очищенного ингибитора, т. е. 2,3% от веса взятой микробной массы. По внешнему виду и физическим свойствам эти препараты не отличались от препаратов, полученных аналоХимический состав антивирусиых препаратов, выделенных из дрожжей

гичным способом из культуральных жидкостей дрожжей.

Из 27,8 г дрожжевого экстракта по предлагаемому способу получено 1,25 г очищенного

препарата ингибитора, т. е. 4,50/0 от веса исходного продукта. Влажность воздуха сухого препарата 8,8%, цвет - белый или слабокоричневый. По други показателям этот препарат не отличается от препаратов, выделенных из культуральных жидкостей вышеуказанных видов дрожжей.

Полученные препараты в концентрации 0,001-0,1 % в опытах in vitro подавляют образование некрозов, вызванных Х-вирусом картофеля и вирусом табачной мозаики на листьях тест-растений Datura stramonium L. и Datura Metel Z. на 77,5-100%. Они обладают также высокой антивирусной активностью при системной инфекции, вызванной Х-вирусом картофеля в растениях табака при профилактическом применении. Антивирусная активность выделенных препаратов примерно в 50-1000 раз превышает антявирусную активность исходного материала.

В табл. 1 приведены сведения о химическом составе получаемых препаратов, а в табл. 2 и 3 результаты их испытаний.

Таблица i

Влияние препарата,

Титр Х-вируса а растениях (в некрозах на листьях Gomphrena (globosa) выделенного из дрожжевого экстракта, на накопление Х-вируса картофеля в растениях табака сорта Самсун 3073-1969 г. Таблица 2 Подавление инфекционности Х-вируса

Предмет изобретения

Способ получения комплекса физиологически активных веществ из дрожжей, включающий операции освобождения от дрожжевых клеток, концентрирования культуральной жидкости или дрожжевого экстракта и центрифугирования, отличающийся тем, что, с целью получения комплекса, ингибирующего вирус табачной мозаики и Х-вируса картофеля, концентрирование культуральной жидкости ИЛИ дрожжевого экстракта производят в вакууме, целевой продукт осаждают органическим растворр.телем, обрабатывают рибонуклеазоп, феюлом, органическим растворителем и подвергают диализу. картофеля исходным материалом и полученными из него препаратами Таблица 3 (опыты in vitro)