СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ Советский патент 1972 года по МПК C12N1/02 

Изобретение относится к области выделения микроорганизмов, в частности дрожжей из питательной среды, содержащей углеводородные фракции нефти.

Известны способы выделения микроорганизмов, предусматривающие введение в нитательную среду полярного растворителя, например ацетона и этанола, с последующим разделением образовавшихся фракций.

Недостатком известных способов является то, что они не обеспечивают эффективного разделения питательной среды на фракции и удовлетворительной очистки выделенных микроорганизмов.

С целью более эффективного разделения питательной среды на фракции по цредлагаемому способу в среду наряду с полярным растворителем дополнительно вводят диалкилкетон, содержащий четыре атома углерода.

Диалкилкетон выбирают из группы метилкетона и пропилэтилкетона, при этом диалкилкетон может быть добавлен до введения полярного растворителя или в виде смеси с этим растворителем.

Весовое соотношение диалкилкетона и полярного растворителя составляет 1-8, предпочтительно 1,5-5. Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. Жидкие стоки из ферментатора цодвергают предварительному разделению на водную фазу, половину которой возвращают в ферментатор, и эмульсию, содержащую остаточные углеводороды, дрожжи и воду с минеральными солями.

Полученную эмульсию обрабатывают при интенсивном перемещивании диалкилкетонами и полярным растворителем, вводимыми последовательно или в виде смеси. Обработку

эмульсии проводят при температуре 20-45°С, а более предпочтительно при температуре около 30°С. рН эмульсии доводят до 2-8. После премещивания эмульсию разделяют на три фракции - от большей плотности к

меньшей: нижняя часть (водная паста микроортанизмов); жидкий промежуточный слой, состоящий в основном из воды и полярного растворителя; жидкий слой, образованный в основном диалкилкетоном и остаточными углеР1з трех фракций сцеживают тяжелую водную пасту микроорганизмов, которую затем обрабатывают смесью из полярного растворителя и диалкилкетона или идентичной смеси, используемой для выделения дрожжей из питательной среды. Дрожжи, освобожденные таким образом от остаточных углеводородов и нобочных продуктов типа жирных кислот, могут быть выделены для обеспечения их длительного хранения без появления пригорклого вкуса. Две другие фракции также легко разделяют, например, отгонкой остаточпых углеводородов из более легкой фракции и воды из промежуточной фракции. Полярный растворитель и диалкилкетон используют для выделения и очистки микроорганизмов. Весовое соотношение между диалкилкетоном и нолярным растворителем зависит от количеств водной фазы и углеводородов, находящихся в подлежащей обработке эмульсии. В предпочтительном случае используют небольщой избыток диалкилкетоиа по отнощению к полярному растворителю. Это весовое соотнощение составляет от 1 до 8 или 1,5 до 5. Пример 1. Дрожжи вида Candida lipolytica непрерывно культивируют в ферментаторе на питательной среде, состоящей из газойля,-содержащего 11% линейных парафиновых углеводородов, и водной минеральной среды следующего состава, г: диаммонийфосфат2,2 хлористый калий1,2 сульфат магния0,9 проточная вода, содержащая олигоэлементы320 экстракт дрожжей0,08 дистиллированиая вода1000 Выращивание осуществляют при аэрировании, рН среды близким к 4,0 и температуре около 27°С. Из ферментатора культуральная среда, содержащая 90 вес. % воды с минеральными солями, 5% дрожжей и 5% остаточных углеводородов, поступает в декантатор. На 1 объем культуральной среды в декантатор вводят 2 объема жидкой смеси, состоящей из 4 об. ч. метилэтилкетона и 1 об. ч. ацетона. При этом происходит разделение культуральной среды на три фазы: нижняя - водная фаза дрожжей, средняя, состоящая в основном из ацетона и воды, верхняя, состоящая в основном из метилэтилкетона и остаточных углеводородов. Нижнюю (тяжелую водную фазу) отделяют, выделяют из нее дрожжи, при этом последние освобождены от остаточных углеводородоБ и побочпых продуктов типа жирных кислот. Дрожжи сущат и хранят. Пример 2. Выращивание осуществляют так же, как и в примере 1. В культуральную среду после заверщения выращивания вводят смесь, содержащую 1 ч. ацетона и 4 ч. изопропанола. Однако разделеиие суспензии иа фазы не нроисходит, а увеличивается лищь объем смеси, при этом необходимо смесь центрифугировать для отделения дрожжей. Выделенные таким образом дрожжи содержат 1,2% углеводородов. Изменение соотнощения между ацетоном и изопропанолом при повторении операции ие приводит к успеху. Пример 3. Для выделения дрожжей из культуральной среды используют в одном случае смесь, содержащую метилизобутилкетон и этанол, в другом - метилэтилкетои-f нропанол. Остальные условия соблюдаются такие же, как описаны в примере 1. В обоих случаях происходит разделение среды на три фазы. Выделенные дрожжи не содержат углеводородов и нобочных продуктов. Пример 4. Повторяют условия, описанные в примере 1, со следующими изменениями. Выращивание осуществляют на питательной среде, содержащей в качестве источника углерода депарафинизированные смазочные масла, содержащие 90% линейных парафинов. Водная минеральная среда используется без изменений. В декантатор ноступает культуральная среда, содержащая 90% воды, 9,5% дрожжей и 0,5% остаточных углеводородов. В декантатор вводят 5 объемов смеси, содержащей 1,5 вес. ч. метилэтилкетона и 1 вес. ч. ацетона, нри этом нроисходит расслоение образовавшейся смеси на три фазы. Выделенные дрожжи из более тяжелой фазы практически освобождены от углеводородов и побочных продуктов. П р и м е р 5. Повторяют условия, описанные в примере 4. Однако в декантатор вводят смесь, содержащую гексан и этанол (весовое соотнощение геюсан/этанол равно 1,5, а объемное-65/35), при этом не наблюдается разделение эмульсии на три фазы. Эмульсию подвергают центрифугированию, при этом получают дрожжи, содержащие около 0,2% остаточных углеводородов. Предмет и з о б р е т е н н я 1. Снособ выделения микроорганизмов, например дрожжей, из питательной среды, содержащей углеводородные фракции нефти, путем введения в нее полярного растворителя, например ацетона, этанола, с последующим разделением образовавшихся фракций, отличающийся тем, что, с целью более эффективного разделения питательной среды на фракцнн, в среду наряду с полярным растворителем донолнительно вводят диалкилкетон, со;|,ержащий 4 атома углерода.

2.Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве диалкилкетона используют метилэтилкетон, метилизобутилкетон, диэтилкетон и пропилэтилкетон.

3.Способ по пп. 1 и 2, отличающийся тем, что дналкилкетои вводят перед введением полярного растворителя, iianpHMep ацетона, спирта.

4.Способ по пп. 1 и 2, отличающийся тем, что дпалкилкетоп вводят в смеси с полярным растворителем, в количестве 1-10 объемов, предпочтительно 2-5 объемов смеси на 1 объем питательной среды.

5.Способ по пп. 1, 2 и 4, отличающийся тем, что весовое соотношение диалкплкетона и полярного растворителя составляет 1-8, предпочтительно 1,5-5.