МАКРОЦИКЛИЧЕСКИЙ ЛАКТОН, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, ОБЛАДАЮЩАЯ АНТИБИОТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ, И ИНСЕКТОАКАРИЦИДНАЯ КОМПОЗИЦИЯ Российский патент 1997 года по МПК C07D315/00 C07D493/22 A01N43/90 A61K31/71 A61K31/70 A61K31/365 

Изобретение относится к новым соединениям антибиотика.

В описании к патенту Великобритании N 2166436 рассмотрено получение антибиотиков S541, которые можно выделить из продуктов ферментации вида Streptomyces. Антибиотики S541 представляют собой группу родственных соединений, имеющих неполную формулу (I)

Итак, как представлено в данном описании, выявлена дополнительная группа соединений, обладающих антибиотической активностью, которые можно получить путем выделения их из культуры микроорганизмов рода Streptomyces. Новые соединения предлагаемого изобретения обладают антибиотической активностью и/или применяются как промежуточные продукты при получении других активных соединений и/или при выделении либо очистке соединений антибиотиков S541.

Соединения настоящего изобретения представляют собой 23-кетоны аналоги антибиотиков S541.

Таким образом, в одном варианте изобретения предлагаются, в частности соединения формулы (II)

где R¹ представляет собой метильную, этильную или изопропильную группу; OR⁴ представляет собой гидроксильную группу или замещенную гидроксильную группу, имеющую до 25 атомов углерода и ее соли.

В указанных соединениях формулы (II) R¹ является предпочтительно изопропильной группой.

Группа -OR⁴ в соединениях формулы (II) является предпочтительно гидроксильной группой.

Важными активными соединениями предлагаемого изобретения являются соединения формулы (II), в которых R¹ является метильной, этильной или, в частности изопропильной группой, R² и OR⁴ представляет собой гидроксильную группу.

Особенно важными активными соединениями предлагаемого изобретения являются соединения формулы (II), в которых R¹ является изопропильной группой, OR⁴ представляет гидроксильную группу.

Как указывалось, соединения предлагаемого изобретения могут применяться в качестве антибиотиков и/или как промежуточные соединения для получения других активных соединений и/или при выделении и очистке соединений антибиотиков S541.

В том случае, когда предлагаемые соединения приходится использовать как полупродукты, -OR⁴ могут быть защищенными гидроксильными группами. Ясно, что такая группа должна иметь минимальное количество дополнительных функциональных групп, чтобы избежать дополнительных реакционных цепей и должна быть такова, чтобы стало возможным избирательно восстанавливать из нее гидроксильную группу. Примеры защитных гидроксильных групп известны и описаны ("Защитные группы в органическом синтезе" "Protective Groupe in Organic Sinthesis" by Theodora W.Greene. Wiley-Interscience, New York, 1981; "Защитные группы в органической химии" -"Protective Groupe in Organic Chemistry" by J. F. W McOmie. Plenum Press, London, 1973).

Примеры OR⁴ защищенных гидроксильных групп включают феноксиацетокси, силилоксиацетокси, (например, триметил-силилоксиацетокси и трет-бутилдиметилсилилоксиацетокси), и силилокси, например, триметилсилилокси и трет-бутилдиметилсилилокси. Предлагаемые соединения, содержащие такие группы будут главным образом использоваться в качестве промежуточных соединений.

Заявленные соединения обладают антибиотической активностью, например, антигельминтной, например, против нематодов, в частности анти-эндопаразитарной и анти-эктопаразитарной активностью.

Эктопаразиты и эндопаразиты заражают людей и целый ряд животных, особенно имеют широкое распространение среди сельскохозяйственных животных, таких как свиней, овец, крупного рогатого скота, коз и домашней птицы, лошадей и домашних животных, например, собак и кошек. Паразитарная инфекция домашнего скота, приводящая к анемии, недостаточности питания и потери веса, является основной причиной экономических потерь во всем мире.

К представителям эндопаразитов, заражающих указанных животных и/или людей относятся Ancylostoma, Ascaridia, Ascamis, Aspicularis, Brugia, Bunostomum, Capillavia, Chabertia, Cooperia, Dictyocaulus, Pirofilaria, Dracunculus, Enterobius, Haemonchus, Hetevakis,Loa, Necator, Nеmatodirus, Nеmatospiroides, Heligomoroides, Nippostrongylus, Oesophagostomun, Onchocevca, Ostertagia, Oxyuvis, Pavascavis, Strongylus, Strongyloides, Syphacia, Toxascavis, Toxocava, Trichonema, Trichostrongylus, Trichinella, Trichuris, Uncinavia и Wuchaveria.

Примерами эктопаразитов, заражающих животных и/или людей, являются членистоногие эктопаразиты, например, жалящие насекомые, падальная муха, блоки, вши, клещи, сосущие насекомые, иксодовые клещи и другие двукрылые насекомые-вредители.

К примерам такого рода эктопаразитов, заражающих животных и/или людей, относятся Ambylomma, Boophilus, Chorioptes, Culliphore, Demodex, Demallenia, Dermatobia, Gastrophilus, Haematobia, Haematopinus, Haemophysalis, Hyalomma, Hyperderma, Ixodes, Linognathus, Lucilia, Melophagus, Oestrus, Otobius, Otodectes, Psorergates, Psoroptes, Rhipicephalus, Sarcoptes, Stomoxys и Tabanus.

Обнаружено, что предлагаемые соединения эффективно действуют как in vitro, так и in vivo против широкого ряда эндопаразитов и эктопаразитов. В частности обнаружено, что соединения настоящего изобретения активно действуют против нематодов, таких как Haemonchus contortus, Ostertagia circu mcincta, Jrichostronyglus colubiformis, Dictyocaulus viviparis, Cooperia oncophera, ostertagia ostertagi, Nematospiroides dubues и Nippostrongylus braziliensis, и паразитарных клещей, как например, Savcoptes sp. и Psoroptes sp. Таким образом, предлагаемые соединения находят применение при лечении животных и людей с эндопаразитарной и/или эктопаразитарной инфекциями.

Виды паразитов меняются в соответствии с хозяином (животным) и доминирующим местонахождением инфекции. Следовательно, например, возбудители Haemonchus contortus, Ostertagia circumcincta и Trichostrongylus colubiformis обычно поражают овец и преимущественно локализуются в желудке и тонкой кишке, в то время как Dictyocaulus vivipavus, Cooperia oncophora и Ostertagia ostertagi обычно поражают крупный рогатый скот и локализованы главным образом в легких, кишечнике или желудке, соответственно.

Антибиотическая активность предлагаемых соединений может быть продемонстрирована, например, своей активностью in vitro против свободно живущих нематодов, например, Caenorhabiditis elegans.

Кроме того, заявленные соединения имеют применение в качестве противогрибковых веществ, например, против таких штаммов Candida, как например, Candida albicans и Candida glabvata, и против дрожжей, таких как Sacchavomyces covls bergensis.

Соединения изобретения, кроме того, имеют применение в борьбе с вредителями-насекомыми, клещами и нематодами в сельском хозяйстве, садоводстве, лесоводстве, здравоохранении и при хранении продуктов. Ими можно успешно обрабатывать вредителей почвы и сельскохозяйственных культур, включая хлебные злаки (например, пшеницу, ячмень, маис, рис), овощи (например, сою), фрукты (например, яблоки, виноград и цитрусовые), наряду с корнеплодами (например, сахарную свеклу, картофель). Характерными примерами таких вредителей являются фруктовые клещи и тля, например, Aphisfalue, Aulacorthum circumflexum, Myzuspersical, Nephotettix cincticeps, Nilpawata lugens, Panonychus ulmi, Phorodonhumuli, Phyllocoptruta oleivora, Tetramychus urticae и представители рода Trialeuroides нематоды, например, представители рода Aphelencoides, Olobodera, Heterodera, Meloidogyne и Panagrellus чешуйчатые, например, Heliothis, Plutella и Spodpotira долгоносик-каландрина, как например, Anthonomus grandis и Sitophilus granarius хрущаки мучные, например, Tribolium castoneum мухи, например Musca domestica муравьи Рихтера; моли-минеры/узкокрылые, например Pear psylla; трипсы табачные, таракановые, например Blatella germanica и Periplaneta americana, москитные, например, Aedes aegypti.

В соответствии с изобретением предложены соединения формулы (I), как указывалось выше, которые могут быть использованы в качестве антибиотиков. В частности, их можно использовать при лечении животных и людей, пораженных эндопаразитарной, эктопаразитарной и/или грибковой инфекциями, и в качестве пестицидов для борьбы с вредителями-насекомыми, клещами и нематодами, в сельском хозяйстве, садоводстве или лесном хозяйстве. Их можно применять, кроме того, обычно в качестве пестицидов в других обстоятельствах, например, в хранилищах, зданиях или других общественных местах либо в местах локализации сельскохозяйственных вредителей. По существу предлагаемые соединения могут быть применены либо к хозяину (животному или человеку, либо к культурным растениям или другой растительности), либо к самим вредителям или месту их расположения.

Заявленные соединения могут быть сформированы для приема в любой удобной форме при использовании в ветеринарии или практической медицине. Таким образом, изобретение содержит в пределах своего объема фармацевтические композиции, содержащие соединение согласно заявленному изобретению, пригодное для применения в ветеринарии или терапии. Подобные композиции могут быть представлены при использовании в традиционной форме с помощью одного или нескольких подходящих носителей или наполнителей. Предлагаемые композиции содержат составы в форме, особенно пригодной для парентерального (в том числе введение внутрь молочной железы), орального, ректального, местного применения в виде имплантанта, для применения при глазных, ушных или заболеваниях мочеполовой системы, подходящими способами и агентами для приготовления состава соединений изобретения, пригодного для использования в ветеринарии или терапии, являются способы, которые описаны в патенте Южной Африки N 85/7049 для соединений антибиотиков S541.

Заявленные соединения можно применять в комбинации с другими фармацевтически активными ингредиентами.

Суммарная суточная доза предлагаемых соединений, применяемая как в ветеринарии, так и в терапии, будет соответственно в интервале 1-2000 мг/кг массы тела, предпочтительно 50-1000 мг/кг, причем указанные дозировки можно принимать в дробных дозах, например, 1-4 раза в день.

Заявленные соединения можно составлять в любой удобной форме, пригодной для земледелия или садоводства. Таким образом, изобретение включает в пределах своего объема составы, содержащие соединение, предназначенное для применения в земледелии или садоводстве. Такие рецептуры включают сухие или жидкие формы, например, дусты, включая пылевидные субстраты или концентраты, порошки, в том числе растворимые или смачиваемые, гранулы, включая микрогранулы и диспергируемые гранулы, таблетки, текучие вещества, эмульсии, например, разбавленные эмульсии или эмульгируемые концентраты, пропиточные составы, например, составы для пропитки корней и семян, протравливатели семян, семенные гранулы, масляные концентраты, масляные растворы, инъекции, например, инъекции в ствол, растворы или опрыскивания, дымы и туманы.

Подходящие способы и агенты для составления рецептуры предлагаемых соединений для применения в садоводстве или земледелии включают те, которые раскрыты в патенте Южной Африки N 85/7049 для антибиотиков S541.

При составлении рецептуры концентрация активного вещества обычно составляет от 0,01 до 99,0 мас. и более, предпочтительно от 0,01-40,0 мас.

Промышленные (товарные) продукты обычно приготовлены в виде концентрированных композиций, которые при использовании разбавляют до требуемой концентрации, например, от 0,001 до 0,0001 мас.

При использовании в ветеринарии или в садоводстве и земледелии и в случае, когда предлагаемые соединения являются продуктами, образуемыми посредством ферментации, желательно использовать весь бродильный бульон в качестве источника активных соединений. Кроме того, может быть пригодным использование обезвоженного бульона (содержащего мицелий) или мицелия, отделенного из бульона и пастеризованного, или более предпочтительно высушенного. При желании, указанный бульон или мицелий могут быть сформированы в композиции, как указывалось выше, включающие традиционные инертные носители, наполнители или разбавители.

Антибиотические соединения предлагаемого изобретения могут вводиться и применяться в комбинации с другими активными ингредиентами.

В частности предлагаемые соединения антибиотика могут использоваться вместе с соединениями антибиотиков S541 или с другими антибиотическими соединениями изобретения. Это может возникнуть, например, в случае, когда неочищенные продукты брожения взаимодействуют согласно способу изобретения без предшествующего или последующего отделений; указанное может быть предпочтительным, например, при использовании соединений в земледелии, где важно обеспечить (сохранить) низкую себестоимость продукции.

Заявленные соединения формулы (II) можно получить следующим образом:
окисляют соответствующее соединение формулы (III)

где OR⁵ представляет собой гидроксильную группу;
OR⁵ представляет защищенную гидроксильную группу,
и получают соединение (II), где OR⁴ представляет собой OH-группу, причем реакцию ведут с помощью окислителя, способного превращать вторичную гидроксильную группу в оксогруппу в присутствии растворителя при температуре от -80 до +50^oC и необязательно:
1) удаляют защищающую группу в соответствующем соединении формулы (II), где OR⁴ защищенная гидроксигруппа;
2) обрабатывают кислоту основанием или превращают одну соль в другую посредством ионного обмена;
3) осуществляют реакцию соединения, в котором OR⁴ гидроксигруппа с гидроксилзамещающим реагентом с получением соединения, где OR⁴ - замещенная гидроксильная группа.

Подходящие окислительные агенты включают бензохиноны, действующие в присутствии воды, например, 2,3-дихлор-5,6-дициан-1,4-бензохинон или 2,3,5,6-тетрахлор-1,4-бензохинон; хром (VI), например, бихромат пиридина или триокись хрома в пиридине; марганцевый (IV) окислитель, например, двуокись марганца в дихлорметане; N-галосукцинимид, например, N-хлорсукцинимид или N-бромсукцинимид; диалкилсульфоксид, например, диметилсульфоксид, в присутствии такого активатора, как N,N'-дициклогексилкарбодиимида или ацилаглоида, например, оксалилхлорида, или комплекса (серный ангидрид - пиридин).

Подходящий растворитель может быть выбран из группы, состоящей из кетона, например, ацетона; простого эфира, например, диэтилового эфира, диоксана или тетрагидрофурана; углеводорода, например, гексана, галогензамещенного углеводорода, например хлороформа или метиленхлорида; или сложного эфира, например, этилацетата или замещенного амида, например, диметилформамида. В реакции можно также использовать комбинации указанных растворителей либо в чистом виде, либо с водой.

Реакцию можно проводить при температуре от -80^oC до +50^oC.

Согласно еще одному варианту изобретения предлагается способ получения соединений формулы (II), где R² и R³ вместе с атомом углерода, к которому они присоединяются, представляют группу >C=O, а OR⁴ является гидроксильной или метоксильной группой, включающей стадию культивирования микроорганизма вида Streptomyces, способного образовывать хотя бы одно из предлагаемых соединений и при желании выделять из него указанное соединение, а, кроме того, если необходимо, модифицировать группу OR⁴ способами, которые описаны выше.

Предпочтительными микроорганизмами, способными образовывать вышеуказанные вещества являются штаммы нового вида рода Streptomyces которые называются Streptomyces thermoarchaensis. Образец указанного микроорганизма, который является почвенной культурой, помещен на хранение (10.09.84 г.) в постоянную коллекцию Национального собрания промышленных и морских бактерий Torrh Research Station, Aberdeen, United Kingdom с присвоением ему регистрационного номера NCJB 12015. Мутанты штамма Streptomyces thermoarchaensis NCJYB 12015 могут также быть преимущественно использованы, и в постоянную коллекцию культур Национального собрания промышленных и морских бактерий сданы в депозитарное хранение (26.06.85 г.) четыре штамма мутантов, которым были присвоены регистрационные номера NCJB 12111, NCJB 12112, NCJB 12113 и NCJB 12114.

Получение предлагаемых соединений посредством ферментации подходящего вида Streptomyces может быть достигнуто общепринятыми методами, например путем выращивания микроорганизма Streptomyces в присутствии способных к ассимиляции источников углерода, азота и минеральных солей. Способные к ассимиляции источники углерода могут быть при наличии азота и минералов либо простых, либо комплексных питательных веществ. Источники углерода обычно включают глюкозу, мальтозу, крахмал, глицерин, кормовую патоку, декстрин, лактозу, сахарозу, фруктозу, карбоксильные кислоты, аминокислоты, глицериды, спирты, алканы и растительные масла. Источники углерода обычно содержат 0,5-10,0 мас. сбраживаемой среды.

Источники азота обычно включают, бобовосоевую муку, настойку пшеницы, растворы перегонки, дрожжевые экстракты, муку из семян хлопка, пептоны, муку из земляного ореха, солодовый экстракт, черную патоку, казеин, смеси аминокислот, аммоний (газообразный или раствор), соли аммония и нитраты. Кроме того, можно использовать мочевину и другие амиды. Источники азота обычно содержат 0,1-10,0 мас. сбраживаемой среды.

Питательные минеральные соли, которые могут быть включены в культуральную среду, содержат обычно применяемые соли, имеющие способность отдавать ионы натрия, калия, аммония, железа, магния, цинка, никеля, кобальта, марганца, ванадия, хрома, кальция, меди, молибдена, бора, фосфата, сульфата, хлорида и карбоната.

Культивирование Streptomyces стрептомицеты обычно проводится при температуре в интервале 20-50^oC, предпочтительно 25-40^oC, более предпочтительно около 34^oC, причем желательно сопровождать ее аэрацией и взбалтыванием, например, встряхиванием или интенсивным перемешиванием. Среда может быть первоначально инокулирована небольшим количеством спорулированных взвесей микроорганизмов, но для избежания задержки роста можно приготовить растительный посевной материал микроорганизма путем инокуляции небольшого количества культуральной среды спорообразной формой указанного организма, при этом растительный инокулят, который получен, может быть перенесен в сбраживаемую среду, или, более предпочтительно, в одну или более стадий посева, где возникает дополнительный рост перед переносом в основную ферментационную среду.

Процесс ферментации обычно проводят при pH в интервале 5,5-8,5, предпочтительнее 5,5-7,5.

Ферментацию можно проводить в течение 2-10 дней, например около 5 дней.

В том случае, когда желательно отделить материал, содержащий соединения предлагаемого изобретения из всего бродильного бульона или выделить любое из отдельных соединений, указанное можно осуществлять посредством общепринятой методики выделения и отделения веществ. Предлагаемые соединения в основном содержатся в мицелиях клеток, но их также можно обнаружить в бродильном бульоне и, таким образом, техника выделения может также быть применена к бродильному бульону после очистки. Ясно, что методика выделения веществ может иметь широкое разнообразие.

Предлагаемые соединения могут быть выделены и отделены посредством разнообразных методов фракционирования, например, элюированием, осаждением, фракционной кристаллизацией, экстракцией растворителем, которые можно комбинировать различными способами.

Выявлено, что экстракция растворителем и хроматография наиболее подходящи для выделения и отделения предлагаемых соединений.

После ферментации мицелий может быть собран традиционными методами, например, фильтрацией или центрифугированием. После этого, например, соединения могут быть экстрагированы из мицелия соответствующими органическими растворителями, такими как кетоны, например, ацетоном, метилэтилкетоном или метилизобутилкетоном; углеводородом, например, гексаном; галогензамещенным углеводородом, например, хлороформом, карбонтетрахлоридом, или метиленхлоридом; спиртами, например, метанолом или этанолом; или сложными эфирами, например, метилацетатом, или этилацетатом. Ясно, что если мицелий содержит значительное количество воды, предпочтительно использовать водорастворимые растворители.

Для достижения оптимального извлечения соединений обычно желательно проводить более одной экстракций. Предпочтительно первую экстракцию выполнять с использованием смешивающегося с водой растворителя, например, метанола или ацетона. Антибиотики можно извлечь как неочищенный экстракт путем удаления растворителя. Экстракты растворителя могут далее быть экстрагированы, если желательно, после уменьшения объема растворителя, например, выпариванием. На этой стадии предпочтительно использовать несмешивающийся с водой растворитель, например, гексан, хлороформ, метиленхлорид или этилацетат либо их смеси, при этом для достижения хорошего разделения соединений антибиотика вводится достаточное количество воды. При удалении водонерастворимой фазы получают продукт, содержащий одно или более соединений предлагаемого изобретения, возможно, вместе с соединениями антибиотика S541.

Очистку и/или отделение предлагаемых соединений можно осуществлять традиционными методами, например, хроматографией, включая высокоэффективную жидкостную хроматографию на соответствующей подложке, такой как двуокись кремния, нефункциональная макросетчатая адсорбционная смола, например, поперечно-сшитые полистирольные смолы, такие как смолы Amberlite XAD-2, XAD-4 или XAD-1180 (Rohm Haus Ltd) или смола S112 (Kusteel Ltd) или поперечно-сшитый декстран, смешивающийся с органическим растворителем, например, Sephadex LH20 (Pharmacia UK Ltd), или в случае высокоэффективной жидкостной хроматографии на подложках с обратной фазой, таких как углеводород, нанесенный на двуокись кремния, например, C₁₈ сшитая двуокись кремния. Подложка может быть в виде слоя с насадкой, заполняющей колонку. В случае использования нефункциональных макросетчатых смол, например, XAD-1180 или S112, для элюирования можно использовать смеси органических растворителей, например, ацетонитрила с водой.

Раствор указанных соединений в соответствующем растворителе обычно загружают в хроматографическую колонку из двуокиси кремния или Sephadex при желании после первого уменьшения объема растворителя. Колонку могут по выбору промыть, а затем вымыть растворителем подходящей полярности. В случае колонок из Sephadex и двуокиси кремния в качестве растворителей можно использовать спирты, например, метанол; углеводороды, например, гексан; ацетонитрил; галогензамещенные углеводороды, например, хлороформ или метиленхлорид; сложные эфиры, например, этилацетаты.

Элюирование и разделение/очистку заявленных соединений можно регулировать общепринятыми способами, например, тонкослойной хроматографией и высокоэффективной жидкостной хроматографией или используя свойства соединений, описываемых далее.

Предлагаемые соединения могут первоначально быть очищены хроматографией на двуокиси кремния, предпочтительно используя элюат, такой как хлороформ: этилацетат, при желании с последующей высокоэффективной жидкостной хроматографией. Полученный таким образом очищенный продукт может затем подвергнут хроматографии на сефадексовых колонках, предпочтительно с использованием элюата, например, ацетонитрила, а затем заявленные соединения могут быть выделены жидкостной хроматографией с высокой характеристикой.

Используя подходящие комбинации вышеуказанных методик, соединения формулы (II), как уточнено сейчас, выделены как твердые вещества в почти чистом виде. Ясно, что последовательность, при которой осуществляют вышеуказанные стадии очистки, выбор тех, которые используют, и степень достигаемой очистки могут очень отличаться. Указанные соединения могут применяться, однако как указывалось, при степени чистоты, соответствующей их предназначению. При использовании их в медицине желательно иметь степень чистоты хотя бы 90% предпочтительно более чем 95% Для ветеринарии и другого применения достаточна более низкая степень чистоты, например, 50% или ниже.

Изобретение далее представлено следующими препаратами и примерами. Все температуры приведены при 0^oC.

Соединения обозначены со ссылкой на источник "Факторы" (табл.1), которые представляют собой перечисленные далее соединения формулы

Факторы A, B, C, D, E, F можно получить способом, который описан в патенте Великобритании N 2166436.

Пример 1. 5-Ацетокси-23-кето Фактор A. Раствор оксалилхлорида (1,96 мл) в сухом дихлорметане (25 мл) при температуре -70^oС в атмосфере азота обработан по каплям раствором диметилсульфоксидом (3,19 мл) в сухом дихлорметане (15 мл) и затем по каплям раствором 5-ацетокси Фактора A (4,91 г) в сухом дихлорметане (30 мл). Полученный раствор тщательно перемешивают в течение 1,5 ч при температуре -70^oC прежде чем обработать по каплям раствором триэтиламина (12,6 мл) в сухом дихлорметане (40 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 1,25 ч без охлаждения и выливают в смесь (1:1) холодной воды и простого эфира. Водный слой экстрагируют простым эфиром. Соединившиеся органические слои промывают водой, соляным раствором, высушивают и выпаривают. Остаточную пену хроматографируют на двуокиси кремния, используя смесь дихлорметана с ацетоном (50:1) с получением названного соединения (3,4 г); δ (CDCl₃) содержит 3,33 (М; 1Н), 3,49 (м; 1Н), 3,70 (д 10; 1Н) и 5,52 (д.5; 1Н), м/з содержит 652, 634, 609, 591, 574, 482, 263, 235 и 151.

Пример 2. 23-кето Фактор A. Соединение примера 1 (276 мг) в метаноле (5 мл) при температуре 0^oC обрабатывают по капле раствором 2N-натрий-гидроксида (0,42 мл) в метаноле (1,0 мл). Перед тем как вылить раствор в холодную воду, его выдерживают при температуре 5^oC в течение 5 ч. Смесь экстрагируют простым эфиром и этилацетатом. Соединившиеся органические слои промывают соляным раствором, высушивают и выпаривают с получением твердого вещества, которое очищают препаративной тонкослойной хроматографией, используя в качестве растворителя смесь дихлорметана с ацетоном (10:1) для получения названного соединения (140 мг); (CDCl₃) содержит 3,28 (м; 1Н), 3,48 (м; 1Н), 3,70 (д 10; 1Н) и 4,28 (тр; 1Н), м/з включает 592, 549, 482, 370, 263, 235 и 151.

Пример 2а. 23-кето Фактор A. 0,41 мл спорообразной суспензии Streptomyces thermoarchaensis NCJB 12015 в 10% -ном глицерине используют для инокуляции в 250 мл колбе Erlenmyer (Эрленмейера), содержащей 50 мл культуральной среды, состоящей из г/л D-глюкозы, 15,0 г/л глицерина, 15,0 gL^-1 соевого пептона, 3,0 г/л NaCl, 1,0 г/л CaCO₃, доведенной до метки дистиллированной водой. Перед помещением в автоклав pH доводят до 7,0 водным раствором NaOH.

Колбу инкубируют при температуре 28^oC в течение 2 дней на круговой качалке, работающей при скорости 250 об/мин с 50-мм в диаметре движением по орбите. Порции объемом в 4 мл используют затем для инокуляции каждой из четырех 2-литровых флаконов с широким горлышком, содержащая каждая по 200 мл одной и той же среды перед инкубированием в тех же самых условиях в течение 2 дней.

Содержимое указанных четырех флаконов далее используют для инокуляции 70-литрового ферментатора, содержащего 40 л той же культуральной среды с добавлением пропиленгликоля 2000 (0,06%). Полипропиленгликоль 2000 вводится, как необходимо, в течение всего процесса ферментации для регулирования пенообразованием. Ферментацию проводят при температуре 28^oС с энергичным перемешиванием и аэрацией, достаточной для поддержания уровня растворенного кислорода больше 30% насыщения. Через 24 ч процесса брожения 800-мл и 9-литровые порции переносят в 70-литровый ферментатор, содержащий 40 л культуральной среды, и 700-литровый ферментатор, содержащий 450 л культуральной среды соответственно. Оба из указанных ферментаторов содержат культуральную среду, состоящую из D-глюкозы 2,5 gL^-1, Malt декстрина (MD30E) 25,0 gL^-1, Arkasоy 50 12,5 gL^-1, Bect Malasses 1,5 gL^-1, K₂HPO₄ 0,125 gL^-1, CACO₃ (Ar) 1,25 gL^-1 и силикона 1520 (Dow Corning) 0,6 gL^-1, приведенную к норме дистиллированной водой. Перед стерилизацией pH доводят до 6,5 водным раствором H₂SO₄.

Указанные процессы ферментации выполняют при температуре 34^oC при энергичном размешивании и аэрации, достаточной для сохранения уровня растворенного кислорода больше чем 30% насыщения. При необходимости добавляют антивспениватели из полипропиленгликоля 2000. Через 24 ч pH в каждом из ферментаторов доводят до 7,2 путем введения водного раствора HSO₄. Продукты ферментации собирают и объединяют через 4 дня.

Мицелий (10 кг) из собранной жидкой среды (423 л) выбирают в центрифуге Sharples PS16AY. Мицелий интенсивно перемешивают в метаноле (50 л) в течение 40 мин и затем отфильтровывают. Остаток повторно суспендируют в метаноле (15 л) и вновь фильтруют. Соединившиеся фильтраты (55 л) затем смешивают с водой (27 л) и 60-80 петролейным эфиром (предел кипения 60-80^oC) (30 л) и перемешивают в течение 20 мин.

Полученные фазы отделяют в центрифуге Westfalia MEM 1256, а метанольную фазу (75 л) смешивают снова с водой (38 л) и 60-80 петролейным эфиром (30 л). Через 20 мин фазы вновь отделяют в центрифуге, причем в фазу петролейного эфира, чтобы разрушить полученную эмульсию, вводят ацетон (2,0 л). Метанольную фазу (110 л) смешивают с водой (38 л) и 60-80 петролейным эфиром (30 л) в третий раз, фазы отделяют как раньше. Ацетон (3 л) добавляют снова к петролейной эфирной фазе для разрушения полученной эмульсии.

Три фазы гексана объединяют (90 л) и концентрируют при низком давлении (температура выпарки 25^oС). Концентрат (9,8 л) высушивают сульфатом натрия (3 кг) и выпаривают до масла.

Полученное масло растворяют в дихлорметане (0,5 л) и фильтруют через Dicalite 478. Раствор (0,9 л) загружают в хроматографическую колонну (150 х 10 см) на двуокиси кремния (Merck) при загрузке 6 л/ч, промывают дихлорметаном (4 л) и элюируют смесью хлороформа с этилацетатом (3:1). Фракции, элюирующие между 14,6 и 33,3 л, концентрируют до твердого вещества и растворяют в смеси хлороформа с ацетоном (3:1).

Полученный раствор повторно хроматографируют на колонке двуокиси кремния с тем же самым растворителем. Фракции, элюирующие между 14,5 и 31,5 л, высушивают до твердого вещества и растворяют в смеси хлороформа с этилацетатом (3:1). Полученный раствор вновь хроматографируют на двуокиси кремния при тех же условиях, что и раньше, затем фракции элюирования между 14 и 31 л высушивают до твердого вещества.

Твердое вещество растворяют в 70%-ном ацетонитриле в воде (1,23 л) с достаточным количеством метанола, добавляемого для получения светлого раствора. Указанный раствор хроматографируют в 5-мл порциях на колонке Spherisorb CDS2. Содержимое колонны элюируют с помощью 70%-ного ацетонитрила при скорости течения, которая возрастает от 20 до 34 мл/мин через 24 мин. Фракции из каждой порции, которые элюированы между 12,4 и 16,0, были собраны вместе и разбавлены равным объемом воды. Полученный раствор затем загружают в колонку Montedison S112 на полистироле с сетчатой структурой (2 л). Колонку промывают 35% -ным раствором ацетонитрила и элюируют ацетоном. Фракции, элюирующие между 0,5 и 1,25 л, высушивают до твердого вещества.

Твердое вещество растворяют в ацетонитриле (20 мл) и хроматографируют на колонке из Sephadex LH20 в том же растворителе. Фракции, элюирующие между 1,08 и 1,26, собирают и высушивают до твердого вещества.

Твердое вещество растворяют в 60%-ном ацетонитриле (10 мл) с достаточным количеством метанола, добавляемого для получения чистого раствора. Раствор хроматографируют в 2-мл порциях еще раз на колонке из Spherisorb ODS2 и элюируют с помощью 60%-ного ацетонитрила при 25 мл/мин. Фракции, элюирующие между 0,95 и 1,08 л, собирают вместе и высушивают до твердого вещества. Полученное твердое вещество повторно растворяют в хлороформе (5 мл) и хроматографируют на колонке из силикагеля Merck 60. Раствор элюируют хлороформом при 10 мл/мин и фракции, элюирующие между 400 мл и 790 мл, высушивают с получением названного соединения (33 мг) в виде твердого вещества, HNR-спектр соответствует содержащемуся 23-кето Фактору A. E.I-масс-спектроскопия дала ион молекулы при 610 и характеристические фрагменты при 592, 549, 498, 482, 370, 263 и 151.

Образец представлен, чтобы сравнить 23-кето Фактор A, полученный при высокоэффективной жидкостной хроматографии, с аналогичным кетоном, образуемым при химическом окислении фактора A.

Пример 4. Фактор A, 5-хлорацетат, 23-кетон. Раствор Фактора A, 5-хлорацетата (276 мг) и дихромата пиридина (602 мг) в сухом N,N-диметилформамиде (10 мл) перемешивают при температуре 20^oC в течение 48 ч и затем вливают в смесь этилацетата (50 мл) и 2N-хлористоводородной кислоты (25 мл). Органическую фазу промывают 2N-хлористоводородной кислотой и насыщенным бикарбонатом натрия, высушивают (сульфат магния) и выпаривают до сухости. Остаток очищают хроматографией на колонке Kieselgel 60 (25 г). Элюирование колонки смесью петролейный эфир:этилацетат (4:1) дает названное соединение (85 мг) в качестве бесцветной пены, [α]20D

+120^o (с 1,05, CHCl₃), λ_max(EtOH) 245 нм ( ε 26500), V_max(CHBr₃) 3480 (OH), 1760 (хлорацетат) и 1715 см^-1 (сложный эфир и кетон), d (CDCl₃) включает 5,5-5,7 (м, 2Н), 4,17 (с, 2Н), 3,72 (д, J 10 Гц, 1Н), 2,50 (с, 2Н) и 0,85 (д, J 7 Гц, 3Н), м/з 686 (M⁺, 35 Cl).

Пример 5. Фактор A, 5-метилкарбонат, 23-кетон (830 мг). [α]20D

+ 132^o (с 0,82, CHCl₃), λ_max (EtOH) 245 нм (E 29800), U_max (CHBr₃) 3560 и 3500 (OH), 1745 (карбонат) и 1710 см^-1 (сложный эфир), δ (CDCl₃) включает 5,40 (с, 1Н), 4,80 и 4,70 (AB q, J 14 Гц, 2Н), 4,28 (м, 1Н), и 0,79 (g, J 7 Гц, 3Н) из фактора A, 23-кетона (916 мг) и метилформиата (0,23 мл).

Пример 6. Фактор A, 5-бензилкарбонат, 23-кетон (57 мг). [α]20D

+ 99^° (с 0,4, CHCl₃), λ_max (EtOH) 245,5 нм (Et29600), δ (CHBr₃) 3600, 3550 и 3480 (OH), 1740 (карбонат) и 1715 см^-1 (сложный эфир и кетон), λEtOHmax (CDCl₃) включает 7,5-7,2 (м, 5Н), 5,57 (с, 1Н), 5,21 (с, 2Н), 3,70 (д, J 10 Гц, 1Н), 2,49 (с, 2Н) и 0,86 (д, J 6 Гц, 3Н), из фактора A, 23-кетона (92 мг) и бензилхлорформата (0,05 мл).

Пример 7. 5-ацетокси, 23-кето Фактор D (152 мг). Т. пл. 228-230^oС, (α)21D

+ 84^° ε_max (c 0,6, CHCl₃), 244,5 нм ( ν_max 31100), δ (CHBr₃) 3500 (OH), 1732 и 1714 см^-1 (сложный эфир и кетон), (CDCl₃) 0,86 (д, 6 Гц, 3Н), 0,98 (д, 6 Гц, 3Н), 1,00 (т, 7 Гц, 3Н), 1,49 (с, 3Н), 1,67 (с, 3Н), 1,74 (с, 3Н), 2,14 (с, 3Н), 3,33 (м, 1Н), 4,03 (д, 6 Гц, 1Н) и 5,5-5,6 (м, 2Н), м/з 638 (M⁺).

Из 5-ацетокси Фактора D (336 мг) аналогичным образом для соединения примера 1.

Пример 8. 23-кето Фактор D (59 мг). [α]21D

+ 84^° (с 0,4, CHCl₃) λEtOHmax 244,5 нм, ε_max 28000, ν_max (CHBr₃) 3550 и 3500 (OH) и 1712 см^-1 (сложный эфир и кетон), δ (CDCl₃) 0,86 (д, 6 Гц, 3Н), 0,98 (д, 7 Гц, 3Н), 1,00 (т, 7 Гц, 3Н), 1,50 (с, 3Н), 1,68 (с, 3Н), 1,86 (с, 3Н), 3,27 (м, 1Н), 3,73 (д, 10 Гц, 1Н), 3,95 (д, 6 Гц, 1Н) и 4,27 (т, 6 Гц, 1Н), из 5-ацетокси-23-кето Фактора D (96 мг), аналогичным образом для соединения примера 2.

Спектральные данные, характеризующие соединения 1-6. Методика масс-спектрального анализа, используемая для этих соединений, обычно давала ион M⁺, а не M+H. Спектр протонного магнитного резонанса этих аналогов довольно сложен. Вместо перечня всех характеристик представлены только те, которые показывают замещение на C(5). Кроме того, показаны два сигнала, относящихся к сложноэфирной карбонильной группе на спектре ЯМР ¹³C, которые свидетельствуют об очевидном присутствии этих двух сложноэфирных функциональностей. В совокупности все эти данные подтверждают структуру соединений (табл.2).

Новые примеры:
Пример 9. 23-кето Фактор B (160 мг) т. пл. 213-215^oС (размягчение около 209^oС), [α]22D

+ 122^° (с 0,36, CHCl₃), λEtOHmax 238,5 (26,400), 244,5 (28,700) и 282 нм (ε_max 400); ν_max (CHBr₃) 3450 (OH) и 1710 см^-1 (сложный эфир и кетон); δ (CDCl₃) включает 5,47 (к 6 Гц, 1Н), 4,02 (д 6 Гц, 1Н), 3,95 (д 6 Гц; 1Н), 3,73 (д 10 Гц, 1Н), 3,51 (с, 3Н), 3,31 (м, 1Н), 1,81 (с, 3Н), 1,69 (с, 3Н), 1,67 (д 6 Гц, 3Н), 1,50 (с, 3Н), 0,97 (д 6 Гц, 3Н) и 0,82 (д 7 Гц, 3Н), м/з 596 (M⁺), из фактора B (559 мг) в виде микрокристаллического твердого вещества после кристаллизации из эфира.

Пример 10. 5-Трет-бутилдиметилсилилоксиацетокси-23-кето Фактор A
(i) 5-трет-бутилдиметилсилилоксиацетокси Фактор A
Фактор A (2,144 г) в безводном эфире (25 мл) и пиридине (2,5 мл) при 0^oС в атмосфере азота обрабатывают, прикапывая т-бутилдиметилсилилоксиацетил хлорид (1,2 г) в эфире (10 мл). Смесь перемешивают в течение 90 мин при 0^oС перед тем как обработать путем прикапывания кислого хлорида (1,10 г) в эфире (10 мл). Смесь перемешивают при 0^oС в течение 60 мин и выливают в холодную воду и эфир. Водный слой промывают эфиром. Объединенные органические слои промывают водой и соляным раствором, сушат и выпаривают. Остаток очищают с помощью хроматографии на диоксиде кремния, используя в качестве элюента дихлорметан: ацетон (25: 1), получая названное соединение, d (CDCl₃) включает 0,09 (с; 6Н), 0,78 (д6; 3Н), 0,90 (с; 9Н), 0,93 (д6; 3Н), 0,97 (д6; 3Н), 1,03 (д6; 3Н), 1,51 (с; 3Н), 1,59 (с; 3Н), 1,74 (с; 3Н), 3,32 (м, 1Н), 3,52 (д10; 1Н), 3,64 (м; 1Н), 3,74 (д10; 1Н), 3,82 (м; 1Н), 4,32 (с; 2Н) и 5,57 (д5; 1Н), м/з включает 784, 766, 748, 595, 577, 484, 466, 354, 314, 297, 265, 247, 237, 219 и 151.

(ii) Соединение (i) (300 мг) в сухом диметилформамиде (5 мл) при 22^oС обрабатывают дихроматом пиридиния (ПДХ) (1,40 г) и перемешивают в течение 3,5 ч. Добавляют еще ПДХ (1,0 г) и продолжают перемешивание в течение 1 ч. Смесь выливают в воду со льдом и эфир. Водный слой промывают тщательно эфиром. Объединенные органические слои промывают водой и соляным раствором, сушат и выпаривают. Остаток очищают с помощью препаративной ТСХ на диоксиде кремния, используя в качестве элюента дихлорметан:ацетон (40:1), получая твердое вещество (150 мг), которое, как показано при помощи МС/ЖХВР, содержит названное соединение, м/з включает 782, 721, 592, 549, 370, 340, 263, 235 и 151.

Пример 11. Фактор A, 5-(2,2,2-трихлорэтил)карбонат, 23-кетон (65 мг) [α]22D

+ 98^° (с, 1,07, CHCl₃), λ_max (EtOH) 245,5 нм, ( ε 28,300), n_max (CHBr₃) 3300 до 3600 (OH), 1755 (карбонат) и 1710 см^-1 (сложный эфир и кетон), δ (CDCl₃) включает 5,61 (с, 1Н), 4,90 и 4,75 (ABk, J 12 Гц, 2Н), 3,72 (д, J 10 Гц, 1Н), 2,51 (с, 2Н) и 0,87 (д, J 7 Гц, 3Н), м/з 784 (M⁺, ³⁵Cl), из Фактора A, 5-(2,2,2-трихлорэтил)-карбоната (188 мг).

Пример 12. 23-кето Фактор A, 5-(4-хлорбензоат) (150 мг), который кристаллизуется при растирании в порошок с диизопропиловым эфиром, т.пл. 230-232^oC, [α]22D

+ 25^° (с 0,48, CHCl₃); λEtOHmax 245 (50,600) и 281,5 нм ( ε_max 1,100), ν_max (CHBr₃) 3480 (OH) и 1718 см^-1 (сложные эфиры и кетон), δ (CDCl₃) включает 8,00 (д, 8 Гц, 2Н), 7,40 (д, 8 Гц, 2Н) и 2,50 (с, 2Н), м/з= 748, 750 (M⁺, ³⁵Cl и ³⁷Cl), из Фактора A, 5-(4-хлорбензоат) (420 мг).

Следующие примеры являются примерами рецептур согласно данному изобретению. Термин "активный ингредиент", используемый в дальнейшем, означает соединение данного изобретения и может быть, например, соединением примера 2.

Многодозовая парентеральная инъекция, мас./об.

Активный ингредиент 4,0 (диапазон 0,1 7,5)
Бензиловый спирт 2,0
Глицерил триацетат 30,0
Пропиленгликоль До 100,0
Растворить активный ингредиент в бензиловом спирте и глицерил триацетате. Добавить пропиленгликоль и довести до объема. Стерилизовать продукт при помощи обычных фармацевтических способов, например, стерильной фильтрации или путем нагревания в автоклаве и упаковать асептически.

Аэрозольный опрыскиватель, мас./мас:
Активные ингредиент 0,1 (диапазон 0,01 2,0)
Трихлорэтан 29,9
Трихлорфторметан 35,0
Дихлордифторметан 35,0
Смешать активный ингредиент с трихлорэтаном и заполнить аэрозольный контейнер. Вытеснить свободное пространство над продуктом газообразным газом-вытеснителем и опрессовать вентиль в положение. Заполнить требуемый вес жидкого газа-носителя под давлением через вентиль. Установить приводы и предохранительные колпачки вентиля.

Таблетка
Способ изготовления влажная грануляция, мг:
Активный ингредиент 250
Стеарат магния 4,5
Рисовый крахмал 22,5
Крахмальный гликолат натрия 9,0
Лаурилсульфат натрия 4,5
Микрокристаллическая целлюлоза До веса ядра таблетки 450
Добавить достаточное количество 10% -ной пасты крахмала к активному ингредиенту, чтобы получить пригодную для грануляции влажную массу. Приготовить гранулы и высушить, используя поддон или сушилку с псевдо-ожиженным слоем. Просеять через сито, добавить оставшиеся ингредиенты и спрессовать в таблетки.

При необходимости покрыть пленкой зерна таблеток, используя гидроксипропилметил целлюлозу или другое аналогичное пленкообразующее вещество, используя либо водную, либо неводную систему растворителя. В пленкопокрывающий раствор могут быть включены пластификатор и подходящий пигмент.

Ветеринарная таблетка для использования для небольших/домашних животных
Способ изготовления сухая грануляция, мг:
Активный ингредиент 50,0
Стеарат магния 7,5
Микрокристаллическая целлюлоза До веса ядра таблетки 75,0
Смешать активный ингредиент со стеаратом магния и микрокристаллической целлюлозой. Сжать смесь в бруски. Разрушить бруски путем пропускания через роторный гранулятор для получения свободнотекущих гранул. Спрессовать в таблетки.

При необходимости зерна таблеток затем могут быть покрыты пленкой, как описано выше.

Ветеринарная интрамаммарная инъекция, мг/доза:
Активный ингредиент 150 мг (диапазон 0,05-1,0 г)
Полисорбат 60 3,0 мас./мас
Белый пчелиный воск 6,0 мас./мас до 3 г (до 3 или 15 г)
Арахисовое масло 91,0 мас./мас
Нагреть арахисовое масло, белый пчелиный воск и полисорбат 60 до 160^oC при перемешивании. Выдержать при 160^oC в течение 2 ч и затем охладить до комнатной температуры при перемешивании. Асептически добавить активный ингредиент к наполнителю и диспергировать, используя высокоскоростной смеситель. Измельчить путем пропускания через коллоидальную мельницу. Асептически заполнить продукт в стерильные пластмассовые шприцы.

Ветеринарное оральное орошение, мас./мас:
Активный ингредиент 0,35 (диапазон 0,01-2,0)
Полисорбат 85 5,0
Бензиловый спирт 3,0
Пропиленгликоль 30,0
Фосфатный буфер При pH 6,0-6,5
Вода До 100,0
Растворить активный ингредиент в Полисорбате 85, бензиловом спирте и полипропиленгликоле. Добавить пропорцию воды и довести pH до 6,0-6,5 фосфатным буфером при необходимости. Довести водой до конечного объема. Заполнить продукт в контейнер прибора для вливания лекарства в ротовую полость животного.

Ветеринарная оральная паста, мас./мас:
Активный ингредиент 7,5 (диапазон 1-30)
Сахарин 25,0
Полисорбат 85 3,0
Дистеарат алюминия 5,0
Фракционированное кокосовое масло До 100,0
Диспергировать дистеарат алюминия во фракционированном кокосовом масле и полисорбате 85 при нагревании. Охладить до комнатной температуры и диспергировать сахарин в масляном наполнителе. Диспергировать активный ингредиент в основе. Заполнить в пластмассовые шприцы.

Гранулы для ветеринарии для введения в корм, мас./мас:
Активный ингредиент 2,5 (диапазон 0,05-5,0)
Сульфат кальция, полугидрат До 100,0
Смешать активный ингредиент с сульфатом кальция. Изготовить гранулы, используя способ влажной грануляции. Высушить, используя поддон или сушилку с псевдоожиженным слоем. Заполнить в соответствующий контейнер.

Эмульгируемый концентрат, г:
Активный ингредиент 50
Анионный эмульгатор (например, фенил сульфонат CALX) 40
Неионный эмульгатор (например, Syperonic NP13) 60
Ароматический растворитель (например, Solvesso 100) До 1 л
Смешать все ингредиенты, перемешивая до растворения.

Гранулы, г:
(a) Активный ингредиент 50
Экстракционная канифоль 40
Гранулы природного гипса (20-60 меш) (например, Agsorb 100A) До 1 кг
(б) Активный ингредиент 50
Syperonic NP13 40
Гранулы природного гипса (20-60 меш) До 1 кг
Растворить все ингредиенты в летучем растворителе, например, метиленхлориде, добавить к гранулам, обрабатывая в смесителе. Высушить до удаления растворителя.

В табл. 3 дана оценка на инсектицидидную/акарицидную активность.

Соединения формулы (II):

и их соли, где R¹ представляет метильную, этильную или изопропильную группу; OR⁴ представляет собой гидроксильную группу или замещенную гидроксильную группу, содержащую до 25 атомов углерода. Указанные соединения используют как антибиотики против нематозов или для борьбы с cельскохозяйственными вредителями. 3 с. и 2 з.п. ф-лы, 3 табл.

1. Макроциклический лактон общей формулы

где R¹ метил, этил или изопропил;
OR⁴ OH, OCOR⁶, где R⁶ С₁ - С₄-алкил, возможно замещенный галоидом, три-С₁ С₄-алкилсилилилокси, фенилом или галоидфенилом, OCO₂R^6 a, где R^6 a С₁ - С₄-алкил, возможно замещенный фенилом или галоидом, OR⁷, где R⁷ С₁ С₄-алкил,
обладающие антибиотической активностью против нематодов и инсектицидной активностью. 2. Соединение по п.1, где R¹ изопропильная группа. 3. Соединение по п.1, где R¹ изопропильная группа и OR⁴ - гидроксил. 4. Фармацевтическая композиция, обладающая антибиотической активностью, включающая активный ингредиент и фармацевтически приемлемый носитель, отличающаяся тем, что в качестве активного ингредиента содержит соединение формулы I по п. 1, взятое в эффективном количестве. 5. Инсектоакарицидная композиция, включающая активный ингредиент - производное милбемицина и целевые добавки, отличающаяся тем, что в качестве производного милбемицина она содержит соединение формулы I, где R¹ - изопропил, OR⁴-ОН, ОСОR⁶, где R⁶ С₁ - С₄-алкил, замещенный одним или более атомами галогена или фенилом, С₃ С₆-циклоалкил, в эффективном количестве.