'СОЮЗНАЯ Советский патент 1973 года по МПК C12Q1/70 

1

Изобретение относится к медицние, точнее к изысканию лекарственных препаратов, а именно к способам первичного отбора противовирусных антибиотиков.

По известному способу отбора еротивовирусных антибиотиков по действию на систему фаг-ипдикаторпая культура в качестве бактериальпого теста применяют кишечную палочку, в качестве системы фаг - индикаторная культура используют ализогенпую культуру и снецифический фаг, полученпый предварительным облучением лизогенной культуры ультрафиолетовым светом, оценку испытуемых антибиотических веществ проводят методом диффузии в агар.

Однако этот способ выявления антибиотиков с противовирусным действием осуществляется только на стадии готового препарата.

Цель изобретения - дифференцированное определение противовирусных антибиотиков в культуральпых жидкостях актиномнцетов-достигается Нутем использования лизогенной культуры Micrococcus lysodeikticus 53-40 в качестве источника фага и индикаторной культуры Micrococcus lysodeikticus 53-5 при соотнощенин титров культур 1-600 ± 200.

Отобранные методом диффузии в агар культуральные жидкости испытывают на ДНК- и РНК-содержащих тест-вирусах.

Пример. Фагоиндуцирующую и фагоипгибирующую активность в отнощении фага лизогенной культуры Micrococcus lysodeikticus 53-40 (№ 5) определяют у свежевыделенных

культур почвенных актиномнцетов, которые выращивают в ногруженных условиях, например, на среде с кукурузным экстрактом, глюкозой, крахмалом, неорганическими солями при 26-28° С в течение 4-6 дней с номощыо

метода диффузии в агар иа чашках Петри.

Первым слоем служит 1,5%-ный агар Хоттингера (бульон Хоттингера 70 мг-% аминного азота, NaCl 0,5%, рН 7,2-7,4), вторым - 0,75%-ный агар того же состава. Для заражения верхнего слоя 0,75%-ного агара используют 24-48-часовые клетки лизогенной и индикаторной культур в соотношении 1-600+ ±200. Фильтраты культуральных жидкостей вносят в количестве 0,3 мл в цилиндры, размещенные на поверхности агара. При наличии антифагового действия вокруг цилиндра образуются зоны усиленного роста тест-культуры, которые располагаются около цилиндра, если культура актиномицета не подавляет роста

тест-культур или за бактериостатической зоной.

При наличии индукции образуется большое количество негативных колоний, которые сливаясь часто образуют сплошную зону лизиса.

Эта зона расиолагается или же около цилиндpa, или после бактериостатической и антифаговой зоны.

Фильтраты культуральных жидкостей, индуцируюишх и не индуцирующих фаг испытывают затем в отношении ДНК-содержаи1.его вируса, нанример осиовакиины, и РНК-содержащего вируса, например вируса гриппа после предварительной ироверки на токсичность для 10-12-диевных куриных эмбрионов.

Гриппозную инфекцию получают введением в аллаитоисную полость 10-дневпых куриных эмбрионов алантоисной жидкости в объеме 0,2 мл (.100-1000 ИД 50). Антибиотик вводят однократно Б объеме 0,2 мл тем же способом. После 48 час инкубации при 37° С эмбрионы охлаждают при +4°, вскрывают и для исследоваиия отбирают аллаптоисную жидкость. Интенсивность развития вируса определяют титром .групповой реакции гемагглютипации (РГА)-вйрусом-1 % взвеси куриных эритроци-TOB: -f г.,- f. :j. v 1 j.;i ;

Для..выясн.еция количества инфицированных эмбрйонрй ставят качественную пробу на наличие гемагглютининов с аллантоиспой жидкостью каждого эмбриона. Титр групповой РГА в контроле обычно 1 : 640-2560, реже 1 : 320. Активность антибиотика оценивают индексом торможения гемагглютининов вируса (отношение титра PiFA в контроле к титру ВГА в опыте).

Двенадцатидневные куриные эмбрионы инфицируют вирусом осповакцины на хорионаллантоиспую оболочку в объеме 0,1 мл. Антибиотик вводят в объеме 0,2 мл также на хорионаллантоисную оболочку однократно.

После 48 час инкубации при 37° С эмбрионы вскрывают и подсчитывают специфические поражения на хорионаллаптоисных оболочках. Активность антибиотика оценивают по подавлению образования специфических поражений в опыте в %, принимая количество поражений в контроле за 100%.

Предмет изобретения

Способ первичного отбора противовирусных антибиотиков по действию на систему фаг-индикаторная культура с определением активности испытуемых веществ методом диффузии в агар, отличающийся тем, что, с целью дифференцированного определения антибиотиков в культуральных жидкостях актиномицетов, используют лизогенную культуру Micrococcus lysodeikticus 53-40 в качестве источника фага и индикаторную культуру Micrococcus lysodeikticus 53-5, при соотношении титров культур 1-600+200, и отобранные методом диффузии в агар культуральные жидкости испытывают на ДНК- и РНК- содержащих тест-вирусах.