Штамм бактерий VIвRIо сноLеRае еLтоR - источник умеренного фага х1 серотипа 1х гетероиммунной категории Советский патент 1990 года по МПК C12N1/20 C12N7/00 

1

(21)4420914/30-13

(22)04.05.88

(46) 23.03.90.Бюл. № 1 1

(71)Всесоюзный научно-исследовательский противочумный институт Микроб и Научно-исследовательский противочумный институт Кавказа и Закавказья

(72)Н.М.Остроумова, Г0М.Грижебо.вс- кий, В,П.Мороз, Т.Б.Караваева,

А.Ф.Брюханов и Г.И0Коровкина

(53)576.8.093.1 (088,8)

(54)ШТАММ БАКТЕРИЙ VIBRIO CHOLRAE ELTOR - ИСТОЧНИК УМЕРЕННОГО ФАГА XI СЬРОТИПА IX ГЕТЕРОИММУННОЙ КАТЕГОРИИ

057) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при внутривидовой диагностике возбудителей холеры. Новый лизогенный штамм Vibrio cholerae eltor выделен из воды и депонирован под номером КМ № 23 (6901). Штамм выращивают в бульоне, затем отбирают фильтрат бульонной культуры, который инкубируют с индикаторным штаммом, Из негативных колоний выделяют лизо- генные по фагу 6901 клоны индикаторного штамма. Умеренный фаг 6901 относится к III морфологической групт пе (по классификации Тихоненко), по серологическим свойствам он принадлежит к XI серотипу холерных фагов IX иммунной категории. Использование фага новой иммунной категории позволяет расширить спектр типируемых вибрионов и тем самым повысить точность эпидемических исследований при холере.

(Л

Изобретение относится к области медицинской микробиологии и может быть использовано при внутривидовой диагностике возбудителей холеры. Новый лизогенный штамм VIBRIO CHOLERAE ELTOR выделен из воды и депонирован под номером КМ N23 /6901/. Штамм выращивают в бульоне, затем отбирают фильтрат бульонной культуры, который инкубируют с индикаторным штаммом. Из негативных колоний выделяют лизогенные по фагу 6901 клоны индикаторного штамма. Умеренный фаг 6901 относится к III морфологической группе /по Тихоненко/, по серологическим свойствам он принадлежит к XI серотипу классификаций холерных фагов IX иммунной категории. Использование фага новой иммунной категории позволит расширить спектр типируемых вибрионов и тем самым повысить точность эпидемических исследований при холере.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при внутривидовой диагностике возбудителей холеры.

Аналогов штамма не выявлено.

Новый лизогенный неэпидемический штамм Vibrio cholerae eltor 6901 выделен из воды открытого водоема и депонирован в коллекции Всесоюзного научно-исследовательского противочумного института Микроб под номером КМ № 23 (6901).

Культурально-морфологические признаки. Подвижные, слегка изогнутые палочки 1,2-2,7 мкм в длину и 0,2- 0,4 мкм в ширину с одним полярно расположенным жгутиком, спор и капсул не образуют, грамотрицательны.

На твердых питательных средах (агар Мартена, агар Хоттингера рН 7,6 +0,2) образует через 18 ч выращивания при (37±U°C круглые, диаметром (4,0±0,3) мм полупрозрачные колонии с голубоватым оттенком, ровным краем, слегка уплотненным центром. На жидких питательных средах (бульон Мартена, 1%-ная пептонная вода, бульон Хоттингера (рН 7,8+0,2} через 6 ч выращивания при (37±1) С образует равномерную муть и нежную пленку на поверхности.

сл

Сл

4

00 СЛ

Физиолого-биохимические свойства, Тест на оксидазу положителен, разлагает до кислоты без газа манноэу, глюкозу, сахарозу, маннит, не разлагает арабиноэу, инозит, лактозу, фер ментирует и окисляет глюкозу Б среде Хью-Лейфсоза, ферментирует крахмал и желатину, не образует дигидролазу аргинина, образует декарбоксилазы лизина и орнитина0 Не растет при повышенной (7-10%) концентрации хлорида натрия. Гемолизирует эритроциты барана по Грейгу, агглютинирует куриные эритроциты. Не чувствителен к полимиксину.

Серологические свойства. Агглютинируется до титра холерными сыворо ками 0 и Огава, не агглютинируется холерными сыворотками РО и Инаба.

Главным отличительным признаком штамма КМ № 23 (6401) является способность спонтанно продуцировать умеренный фаг 6901 ранее неизвестной IX гетероиммунной категории, который лизирует культуры холерных вибрионов лизогенные по фагам I-V, VIT и VITT категорий,не лизирует культуры гш- зогенные по фагу VI иммунной категории, при лизогенизации чувствительной культуры холерных вибрионо создает у нее иммунитет (резистент- ность только к фагам своей иммунной категории и не создает иммунитета к фагам I-VIII иммунных категории Вследствие этого и может быть использован для получения специфической тест-культуры, применяемый при прямом фаготипировании холерных вибрионов биоварианта эльтор различной эпидемической значимости,

Умеренный фаг 6901 по электронно- микроскопической структуре относится к III морфологической группе по классификации А.С.Тихоненко, По серологическим свойствам он принадлежит к XI серотипу холерных фагов. На газоне индикаторного штамма V.chn- lerae eltor 570 образует типичные колонии с прозрачным центром, окруI

5

0

5

0

ъ

0

женным узкой зоной неполного лизиса (3,0±0,5) мм в диаметре.

Размножают штамм КМ № 23 (690 О на бульоне и агаре Мартена рН 7,6i ±0,2, хранят в лиофилизированном состоянии.

И р и м е р0 Птамм КМ № 23 (6901) выращивают на питательном бульоне в течение 18 ч при 37°С. Полученную культуральную жидкость фильтруют через бактериологический фильтр Ф-5„ мл фильтрата смешивают с 0,2 мл бульонной культуры трехчасового роста индикаторного штамма V.cholerae eltor 570 и 5,0 мл 0,7%-ного агара Мартена, перемешивают и выливают на 2%-ную агаровую пластинку в чашке Петри,дают застыть и инкубируют 18 ч при 37 С. При просмотре чашек отбирают одну типичную негативную колонию фага о Уколом платиновой иглы в центр негативной колонии забирают фагорезис ентные вибрионы и переносят в проб рку с I,0 мл бульона, из которого готовят десятикратные разведения в булюне. Из каждого разведения высевают на агаровые пластинки в чашках Петри по 0,1 мл и распределяют шпателем по поверхности агара. Через 18 ч инкубирования при 37 С на поверхности агара обнаруживают изолированные колонии лизогенных по фагу 6901 клонов штамма 5700

Лизогенный клон 570/6901 применяют в качестве тест-культуры в системе других тест-культур, несутцих умеренные Лаги других восьми гетероиммун- ных категорий, для определения типа иммунитета умеренных фагов вибрионов эльтор различной эпидемической значимости. Применение новой тест-культуры позволяет повысить точность эпидемических исследований при холере„

Ф

ормула изобретения Штамм бактерий Vibrio cholerae

eltor KM ff 23(6901) - источник умеренного фага XI серотипа IX гетеро- HMMVHHOU категорни0