Питательная среда для выращивания энтомопатогенных бактерий Советский патент 1984 года по МПК C12N1/20 

00

о л

Изобретение относится к микробиоогической промышленности-, в частноси к питательным средам для выращиваия микроорганизмов - продуцентов бактериальных препаратов.

Известна питательная среда, предтавляющая собой мочильную жидкость, полученную при переработке льносолоы Г1 3 .

Однако эта питательная среда не пригодна для выращивайия энтомопатогенных бактерий, поскольку в качестве источника углерода она содержит в основном органические ннзкомолекулярныё кислоты (до 4000-500-0 мг/л) . Наиболее близкой к предлагаемой по технической сущности и достигаемому эффекту является питательная среда для выращивания энтомопатогеннык бактерий 2, включающая кукурузную муку в качестве -источника углерода, источники азота и минеральных солейи воду. Среда в качестве источника азота и минеральных вещёств содержит активный ил (в сухом . или жидком виде) при следующем соотношении компонентов:

Кукурузная мука, г 10-15 Сухой активный ил,г 10-30 Вода водопроводная, млДо 1000 или . кукурузная мука, г 10-15 жидкий активный ил,мл 250-750 Вода водопроводная,мл До 1000 Сухой (жидкий) активный ил, получемый на заводах кормовых дрожжей, по своим питательным свойствам обладает ценными качествами: содержит 50% сырого протеина, витамины и минеральные элементы. , Питательные среды, содержащие активный ил заводов кормовых , приготавливают следующим образом.Отвешивают и высыпают в реактор нужное количество сухого ила или кукурузной муки (либо других продуктов или субпродуктов, содержащих полисахариды) , в ту же емкость заливают по расчету водопроводную воду с температурой 30-40°С, перемешивают, устанавливают рН 7,8-8,0 при помощи 30%-ного раствора едкой щелочи. Кипятят 15 мин, перемешивают, при этом проверяют значение рН, которое должно составлять 7,5-8,0, Полученную среду стерилизуют при или пропускают через установку непрерывной стерилизации.

После стерилизации рН среды должно быть в пределах 6,8-7,2. Полученную среду для ферментации с целью производства биомассы засевают жидкой посевной культурой (инокулятом) в количестве 3-4% по отношению к ферментационной среде.

Однако известная питательная среда содержит парафины 1,9-2,9%, токсические и -дурнопахнущие продукты, образующиеся при кислотном гидролизе древесины, а азот доминирует в основном в виде микробной биомассы и является трудноусвояемым продуктом, что не позволяет получить высокий выход бактерий. Кроме того, среда достаточно дорогая.

О Целью изобретения является увеличение выхода бактерий, а также удешевление питательной среды.

Поставленная цель достигается тем, что питательная среда для выра5 щивания энтомопатогенных бактерий, включающая кукурузную муку 6 качестве источника углерода, источники азота и минеральньте соли и воду, содержит в качестве источника азота и минеральных солей отжимную жидкость отход переработки льна при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Кукурузная мука 0,5-1,0

Отжимная жидкость отход переработки

льна3-4(по сухому весу)

Водопроводная вода Остальное

Сущность изобретения заключается

следующем.

Отжимная жидкость содержит (сухое вещество) при следующем соотношении омпонентов, вес.%:

Сырой протеин 20-40

Минеральный остаток

(из них 30-40%) 8-20,0 Пектиновые вещества 2-3 Лигнин10-12

Целлюлоза14-25

Полисахариды3-4

Отжим из вымоченного льна получают в производственных условиях от 1-й пары вальцов отжимно-промывной машины, создающей Д авление на вымоченную льносолому (тресту) в пределах 40-80 кг/см поширине слоя. Получаемый под высоким давлением вальцов экстракт льна содержит белковые и пектиновые вещества стебля льна, которые не переходят свободно в мочильную жидкость при биологической мочке. При прохождении через вальцы отжимно-промывной машины ткани и клетки набухшей льносоломы разрываются и их содержимое переходит в отжимную жидкость, которая может служить для микроорганизмов в соста-. ве питательной среды источником азота и углерода.

Количество отжимной жидкости в питательной среде регламентируется интересами производства препаратов на этой питательной среде. Эту величину удобно выражать через количество сухого вещества (в жидкой или высушенной отжимной жидкости). При содержании в питательной среде 1-2% отжимной жидкости (по сухому вещест- ву) в культуральной жидкости нарастание титра микробных тел не превышает 1,5-2,5 млрд/мл, что недостаточно. При увеличении концентрации отжимной жидкости до 6-7% (по сухому

Показатели

Ил БВК сухой 3 мае.% Кукурузная мука 1 мас.%

Вода водопроводная До 1000 мл

2,67+0,06/3,43+0,06

Примечание. Показатели накопления микроорганизмов при выращивании нц предлагаемой среде и на среде, принятой за прототип; в числителе для Bacillus thuringiensis var galleriae Jsak; в знаменателе - для Bacillus thuringiensic var dendro-r limus.

Кроме того, как показали исследования, данная питательная среда с

веществу) и выше затягивается процесс вегетативного деления клеток, зш едленно идет процесс спорообразования, время формирования свободных спор удлиняется до 4-5 сут и вюие. . Сравнение предлагаемой питательной среды с известной (прототип) представлено в табл. 1.

таблица 1

Предлагаемая среда

Прототип

Осадок отжимной жидкости

сухой 3 мае.%

Кукурузйая мука 0,5 мас.%

Вода водопроводная До 100%

3,01+0,18/3,26±0,16 6,55/6,95 6,70/6,80

7,

7,40/7,80

выращенными на ней микроорганизмами характеризуется высокой инсектицидностью, также лучше поедается насекомыми и гусеницами, что приводит к более высокой их гибели (например,

гусеницами овощной моли (galleria mellanella Z).

В табл. 2 приведены данные, показывающие влияние питательной среды на инсектицидность бактерий.

Т а б л и ц а 2

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ ЭНТОМОПАТОГЕННЫХ БАКТЕРИЙ,включающая кукурузную муку В качестве источника углерода, источники азота и минеральных солей и водопроводную ВОДУ, отличающаяся тем, что, с целью увеличения выхода бактерий, а также удешевления питательной среды, она содержит в качестве источника азота и минеральных солей отжим-т ную жидкость - отход переработки льна При следующем соотношении компонентов , мае.%: Кукурузная мука 0,5-1 Отжимная жидкость отход переработки 3-4(по сульна хому весу) Водопроводная вода Остальное

2 млн,

46,7 200 тыс.

ae 22,2

2 млн.

42,2

Vair dendrolimus

200 тыс.

31,1 Пример. Отвешивают и высыпают в варочный аппарат высушенную от- 65

82,2

97,8 77,8 100,0

57,8

88/7

51,1

53,3

88,9 жимную жидкость в количестве 3% и кукурузную муку,в ту же емкость заливают по расчету водопроводную воду d температурой 30-40С, перемешивают, устанавливают рН 7,8-8,2 при помоЩи 30%-ного растбора едкого натра. Кипятят 15-20 мин, перемешивают, проверяют рН, значение которого должно составить около 7,4-7,8. Полученную среду .стерилизуют при 121-128 с или пропускают чер4з установку непрерывной стерилизации. После стерилизации рН среды должен быть в пределах 6,6-7,2. Полученную среду для ферментадии с целью производства биомассы засевают жидкой посевной культурой (инокулятом) в количестве 4-5% по отношению к ферментационной среде. Используют культуру Bacillus thuringiensis var galleriae и var dendrolimus .

Результаты определения эффективности отжимной жидкости в сравнении со средой активного или производства белкрвовитаминного концентрата (БВК) приведены в табл. 3.

Таблица 3