СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНТНЫХ Советский патент 1973 года по МПК G01N1/30 G01N21/64 

1

Изобретение относится к области медицины.

Известен способ приготовления иммунофлюоресцентных препаратов путем нанесения на исследуемый объект иммунофлюоресцентной сыворотки с последующим исследованием препарата в люминесцентном микроскопе.

Однако этот способ не дает возможности ретроспективно с использованием обычно приготовляемых и длительно сохраняемых постоянных гистологических препаратов выявлять специфические антигены и уточнять причины заболеваний или наблюдаемых изменений.

Целью предложенного способа является ретроспективное иммунологическое изучение препарата.

Это достигается тем, что используют объект постоянного длительно сохраняемого гистологического препарата, который обрабатывают органическим растворителем, проводят по спиртам нисходящей концентрации, обесцвечивают, промывают в проточной воде и буферном физиологическом растворе, с последующим нанесением иммунной сыворотки.

Пример. Постоянные гистологические препараты культур клеток почек макак резус, фиксированные спирт-формалином или по Буэну и окрашенные гематоксилином и эозином, с морфологическими изменениями или без них, опускают в ксилол (бензол, толуол)

на 15-30 мин (или больще) для растворения

бальзама и снимают покровное стекло.

Препараты проводят по спиртам нисходящей концентрации для постепенного обводнения: 100°, 96°, 70° (по 5-10 мин). Красители обесцвечивают в 70° спирте с добавлением не скольких капель соляной кислоты 3-5 мин. Затем препараты промывают сначала в проточной водопроводной воде 15-30 мин, а затем в двух порциях буферного физиологического раствора по 5-10 мин. Затем препараты помещают во влажную камеру и наносят несколько капель меченой изотноцианатом флюоресцеина иммунной сыворотки (при прямом методе флюоресцирующих антител). Используют меченые сыворотки к вирусу кори и обезьяньему вирусу 40. Возможно применение непрямого метода флюоресцирующих антител. Препараты выдерживают 20-30 мин

при 37°С. После этого препараты обильно промывают в двух-трех порциях буферного физиологического раствора, споласкивают дистиллированной водой, подсушивают или заключают в буферный раствор глицерина 1:9 и затем

просматривают в люминесцентном микроскопе.

Предмет изобретения

Способ приготовления иммунофлюоресцентных препаратов путем нанесения на исследуемый объект иммунофлюоресцентной сыворотки с последующим исследованием объекта в люминесцентном микроскопе, отличающийся тем, что, с целью ретроспективного иммунологичёского изучения препарата, объект посто-5 янного длительно сохраняемого гистологического препарата обрабатывают органическим растворителем, проводят по спиртам нисходящей концентрации, обесцвечивают, промывают в проточной воде и буферном физиологическом р астворе с последующим нанесением иммунной сыворотки.