СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ АМИЛОЗЫ В ПОЛИСАХАРИДЕ Советский патент 1974 года по МПК C08B31/00 G01N33/02 

1

Изобретение относится к методам контроля -кралмалотродуктов и мюжет быть использовано в крахмало-шаточной промышленности при контроле процессов и продуктов фракционирования крахмала и в сельском хозяйстве при селекционных работах.

Известен способ колориметрического определения амилозы в полисахариде, включающий приготовление раствора йод-полисахаридного комплекса, содержащего нормированное соотношение поли-сахарида, йода и йодида (например, 1 мг полисахарида, 2 мг йода и 10 мг йодистого калия в 100 мл), при рН менее 11, измерение оптической плотности полученного раствора йод-полисахаридного комплекса при 560-650 нм, предпочтительно около 600 нм, и определение содержания амилозы по калибровочной кри1вой, построенной по данным для образцов полисахарида известного состава в идентичных условиях приготовления растворов йод-полисахаридных комплексов.

При этом в анализируемой иробе предварительно определяют содержание полисахарида.

Трудоемкость и продолжительность операций, связанных с определением содержания полисахарида в образце, превышают трудоемкость и продолжительность собственно определения амилозы по известному способу даже

при достаточно больших количествах образца и при высокой его чистоте (например, крахмал). При малых количествах сухого образца (например, в случае анализа единичных семян растений без ущерба для их жизнеспособности), или при низких концентрациях анализируемых растворов определение содержания полисахарида в образце значительно осложняется, а точность анализа снижается.

Цель изобретения - упростить известный способ за счет исключения операций, связанных с определением содержания полисахарида в анализируемой пробе.

Для этого дополнительно измеряют оптическую плотность раствора йод-полисахаридиого комплекса при длине волны 450-550 нм, предпочтительно около 500 нм, и затем содержание амилозы определяют по отношению оптической плотности при больщей длине

волны к оптической плотности при меньщей длине волны.

В 100 мл измеряемого раствора предпочтительно должно быть полисахарида 0,5-3мг, йода - не менее 5 мг при мольном соотношении йодид : йод не менее 20:1.

Предлагаемый способ заключается в том, что раствор полисахарида неустановленной концентрации, приготовленный произвольным способом, смешивают с йод-йодидным раствором, получая раствор йод-полисахаридного

колпотекса с нормированным содержанием йода и йодида. Измеряют оптические плотности нолученного раствора при 560-650 нм, предпочтительно около 600 нм, и при 450- 550 нм, предпочтительно около 500 нм, находят отношение указанных оптических плотностей и определяют содержание амилозы по калибровочной кривой, построенной по данным для полисахаридов известного состава в идентршных условиях приготовления растворов йод-полисахаридных комплексов.

При достаточном избытке йода и йодида в pacTiBope йод-оолксахар-идного ко1мплек са отношение оптических плотностей последнего, измеренных по отношению к стандартному раствору индентичного состава, но не содер.жащему полисахарида, при 560-650 и 450- 550 нм, предпочтительно около 600 и около 500 нм, в достаточно широком интервале не зави.сит от концентрации полисахарида, но изменяется с изменением состава полисахарида.

Измерение о.пт.ичеаких плотностей производят па спектрофотометрах или фотоколориметрах. Лучшие результаты обеспечивает использование фотоколориметров со светофильтрами, пропускающими в областях длин волн 560-650 и 450-550 нм, предпочтительно при максимумах пропускания около 580 и около 520 нм. Это связано с меньшей чувствительностью фотоколориметров к смешению максимумов свето:поглош.еиия растворов йод-полисахаридных комплексов с изменением степени полимеризации амилозы.

Предпочтительная длина кюветы составляет 20 AiM. Концентрацию полисахарида в измеряемо.м растворе регулируют при смешивании растворов полисахарида с йодом и йодидом так, чтобы обеспечить колориметрирование в диапазоне оптических плотностей 0,5-1. Измеряемый раствор подкисляют соляной кислотой до рН 1.

В связи с тем, что оптические характеристики йодных растворов претерпевают изменения во времени, отношение опт - ческих плотностей растворов йод-полисахаридных комплексов устанавливают как тангенс угла наклона линейной зависимости оптических плотностей, измеренных около 600 нм, от оптических плотностей, измеренных около 500 нм, графически. При этом колориметрирование проводят по отношению к дистиллированной воде, а измеряемый раствор непосредственно в кювете разбавляют стандартным раствором. Результаты, пол)ченные при пяти-семи рэ.збавлениях, используют при построении графика и усредн5 ют, соеди.няя полученные точки прямой.

Пример. Приблизительно 2-10 мг высокоамилозного кукурузного крахмала на кончике ножа вводят в пробирку и суспензируют в примерно 3 мл дистиллированной воды,при перемешивании добавляют около 3 мл 2н. NaOfi, полученный раствор I час выдерживают ;при комнатной температуре, после чего нейтрализуют 1 -н. НС1 по фе«олфтале;и«у. В мерную колбу на 50 мл вводят 5 мл 0,01 н. J2 В 1 н. KJ, 20-30 мл дистиллирова.н.ной воды, 5 мл 1 и. НС1 и ори перемешивании приливают нейтрализованный раствор высокоамилозного крахмала до достижения плотной сине-зеленой окраски. Колбу доводят до метки дистиллированной водой и полученный таКИМ образом измеряемый раствор перед колориметрированием 10 мин выдерживают при комнатной температуре.

Стандарный раствор готовят смешиванием в мерной колбе на 100 мл 10 мл 0,01 н. J2 в

1 н KJ, 10 мл 1 «. НС1 с доведением колбы до метки дистиллированной водой.

Колориметрирование производят на фотоэлектроколориметре ФЭК-56 со светофильтрами № 7 (максимум пропзскапия при 582 нм)

и № 5 (макСИмум проиуокания при 490 нм) в прямоугольной кювете длиной 20 мм. Измеряемый раствор заливают в кювету и измеряют по отношению к воде оптическую плотность со светофильтром № 7 - Ду и N° 5 - Д

Затем из кюветы пипеткой отбирают 2-3 мл измеряемого раствора, возмеш,ая отобрапную часть примерно таким же объемом стандартного раствора, и после перемешиваПИЯ содержимого кюветы стеклянной палочкой вновь колориметрируют, получая ряд значений:

Дз - 0,97; 0,765; 0,64; 0,56; 0,485, Д7 - Л,29; 0,905; 0,7; 0,57, 0,445. На миллиметровой бумаге строят график, откладывая по оси ординат значения Д, а по оси абсцисс значения Дг, для каждой пары измерений оптической плотности каждого из разбавлений измеряемого раствора. Далее через нанесенные на график точки проводят прямую и определяют ее наклон (Ид -1,62). При содержании амилозы более 27% участок калибровочной кривой, полученной для полисахаридов кукурузного крахмала, соответствует эмпирической формуле: (Ил -1,2),

в которой А - содержание амилозы в полисахариде, %.

Подставляя найденное значение Ид в эту формулу, определяют содержание амилозы в анализируемом образце высокоамилозного кукурузного крахмала:

(1,62-1,2) 1,25. 0,42 52,5%.

Предмет изобретения

1. Способ определения содерл ания амилозы в полисахариде, заключаюшийся в смешивании пробы полисахарида с йодом и йодидом,

измерении оптической плотности полученного раствора при длине волны 560-650 нм, предпочтительно около 600 нм, отличающийся тем, что, с целью упрощения определения, измеряют дополнительно оптическую плотность

раствора йод-полисахаридного комплекса при 5 длине волны 450-550 нм, предпочтительно около 500 нм, и затем содержание амилозы определяют по отношению оптической плотности при большей длине волны к оптической плотности при меньшей длине волны,5 6 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в 100 мл раствора содержание полисахарида составляет 0,5-3 мг, содержание йода - не менее 5 мг при мольном соотношении йодид : Под не менее 20: 1.