СПОСОБ ОЧИСТКИ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЖИДКОСТИ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ ЖЕЛЧНЫХ КИСЛОТ Советский патент 1974 года по МПК B01D15/08 

1

Изобретение может быть использовано в медицине и биологии.

Известен способ очистки биологической жидкости (сыворотки крови или желчи) при определении желчных кислот путем обработки сыворотки и желчи солями бария, отделения образовавшегося осадка, обработки пробы эфиром и элюции бариевых солей желчных кислот этиловым спиртом. Однако указанный снособ не позволяет полностью очистить биологическую жидкость.

Целью изобретения является разработка способа, позволяющего повысить степень очистки биологической жидкости.

По предлагаемому способу пробу жидкости -наносят на хроматаграфическую бумагу, обработанную солями бария, и последовательно обрабатывают бумагу с нанесенной пробой диэтиловым эфиром и этиловым спиртом.

Пример. Л(елчь разводят вдвое 0,02 н. раствором гидроокиси натрия, а сухой остаток, полученный после экстракции сыворотки крови этанолом, растворяют в 0,3-0,6 мл щелочного бутанолового раствора (100 мл я-бутилового спирта смещивают с 1,0 мл 30%-ного раствора гидроокиси натрия, хорощо перемешивают и фильтруют). В зависимости от ожидаемой концентрации желчных кислот, обработанные, как это описано вь1ше, образцы желчи и крови наносят но 0,03-0,4 мл на центр хроматографнческой бумаги размером 30x40 мм, одна из коротких сторон которой срезана в виде заостренного клина. Бумагу нредварнтельно обрабатывают 0,01 н. раствором хлористого бария, отжимают от избытка реактива между двумя листами фильтровальной бумаги и высушивают. Нанесенную на обработанную бумагу пробу высушивают и бумажку вставляют в аппарат для экстракции, состоящий из приемника (стеклянная пробирка размером 15-20 мм X 150 мм) и воздушного холодильника (стеклянная трубочка размером

10-13 .ИлгХ500 мм), соединенных собой при помощи шлифа. Для этого бумажку с пробой сворачивают в форме цилиндра и на /5 ее длины вставляют заостренным концом наружу, в щлиф воздушного холодильника. Б приемник наливают 2-2,5 мл диэтилового эфира, свободного от этилового спирта и перекисей, соединяют с воздушным холодильником, в просвет шлифа которого вставлена бумажка с нанесенной иробой, и

экстрагируют в течение десяти минут на во дяной бале при температуре 50-60°С. Время экстракции отсчитывают с того момента, когда эфир начнет сканывать с клиновидно заостренного конца бумаги (бумага не должна

касаться стенок приемника во избежание непОоТиого омывания всей поверхности конденсированным эфиром, который в месте контакта сплывает по стенке, минуя ниже расположенный участок бумажки). Указанного времени достаточно для удаления из пробы холестерина, лецитина и других веществ, растворимых в эфире. После экстракции эфиром, меняют приемник на новый, в который наливают 1 мл 96° этилового спирта, соединяют приемник с воздушным холодильником (с оставшейся в нем бумажкой, проэкстрагированной эфиром) и ведут экстракцию на кипящей водяной бане этанолом в течение 15 мин, считая с момента скапывания спирта с бумажки. При этом в спирт переходят все бариевые соли желчных кислот, а бариевые соли жирных кислот и билирубина, благодаря адсорбции и плохой растворимости в спирте остаются на бумаге. После окончания экстракции спиртом трубку воздушного холодильника в,месте со вста(вленной .в него бумажной отсоединяют от приемника, а имеющийся в нем спирт выпаривают досуха на кипящей водяной бане. Оставшийся -после выпаривания сухой остаток используют для определения желчных кислот.

Предмет изобретения

Способ очистки биологической жидкости при определении желчных кислот путем осаждения жирных кислот и части пигментов солями бария и обработки надосадочной жидкости чорганическими растворителями, отличающийся тем, что, с целью повышения степени очистки, пробу жидкости наносят на хроматографическую бумагу, обработанную солями бария, и последовательно обрабатывают бумагу с нанесенной пробой диэтиловым эфиром и этиловым спиртом.