ПРИБОР ДЛЯ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА Советский патент 1974 года по МПК C12M3/00 

1

Изобретение относится к конструкциям приборов, используемых для электрофоротического разделения гомогенатов тканей, суспензий вирусов и микроорганизмов на отдельные фракции.

Известен прибор для электрофореза в гелях, содержащий верхний и нижний электродные сосуды, между которыми размещен блок кювет-секций с носителем.

Прибор известной конструкции не пригодн для проведения препаративного электрофореза и разделения гомогенатов тканей на отдельные субклеточные фракции.

С целью устранения указанных недостатков предложен прибор для электрофореза, в котором носитель размещен в трубках, снабженных в нижнем конце полупроницаемой мембраной, например, из целлофановой пленки и вмонтированных в дно верхнего электродного сосуда. Для повыщения эффективности разделения трубки для носителя могут быть выполнены в виде усеченного конуса с больщим нижним основанием. Прибор может быть размещен в емкости, заполненной охлаждающим агентом.

На чертеже представлен предлагаемый прибор для электрофореза в разрезе, вид сбоку.

Емкость 1, заполненная охлаждающим агентом, снабжена подающим 2 и отводящим 3 патрубками. В емкости 1, размещен нижний

электродный сосуд 4, в котором установлен верхний электродный сосуд 5, оснащенный стойками 6. В дно сосудов 4 и 5 вмонтированы платиновые неполяризующиеся электроды: 5 катод 7 и анод 8. Верхний электродный сосуд 5 выполнен с крышкой 9. В дно верхнего электродного сосуда 5 герметически вмонтированы (ввинчены) трубки 10 для носителя, которые расположены на одном расстоянии от

0 катода 7. На нижнем конце трубок 10 закреплена полупроницаемая мембрана И, например, из целлофановой пленки. Для визуального наблюдения за процессом электрофореза емкость 1, электродные сосуды 4 и 5,

5 трубки 10 выполнены прозрачными, например, из оргстекла.

Работает предлагаемый прибор следующим образом.

В трубках 10 размером 20X1 см нижний

0 конец которых закрыт пленкой из целлофана, создают градиент плотности сахарозы, последовательно наслаивая друг на друга растворы сахарозы с уменьщающейся концентрацией от 1,2 до 0,32 М по 2,5 мл. Растворы сахарозы готовят на трис-буфере с рН 7,4, содержащем хлористого натрия. Используют следующие молярные концентрации сахарозы: 1,2; 1,0; 0,9; 0,8; 0,7; 0,6; 0,5; 0,32М. Затем в колонки 10 с помощью щпри0 Ца с пластмассовым наконечником вносят

0,5-1,0 мл окрашенного цитохромом С или метиленовым синит гомогената ткани и наверх наслаивают еще 0,25 М раствора сахарозы.

Нижний сосуд 4 заполняют на /з объема фосфатным буфером с рН 7,4, устанавливают в него верхний сосуд 5 с трубками 10 и сосуд 5 также заполняют фосфатным буфером с рН 7,4 в таком количестве, чтобы уровень его был выше трубок 10. При этом необходимо следить, чтобы в электродных сосудах 4 и 5, в трубках 10 не оставалось пузырьков воздуха. Затем сосуд 4 с установленным внутри сосудом 5 помещают в емкость 1 для охлаждения, подключают патрубок 2 к магистрали с холодной водой, а патрубок 3 к сливному шлангу. Катод 7 и анод 8 подсоединяют к соответствующим полкзсам выпрямителя УИП-К. Электрофюрез проводят при напряжении 8 вольт/см, при силе тока ЗмА на трубку 10, при температуре О-4°С в течение 1,5-2,0 час. О местоположении субклеточных фракций судят по положению диска красителя, молекулы которого продвигаются во фропте подвижных ионов.

Предлагаемый прибор позволяет разделить гомогенат различных тканей (мозг, печень и др.), а также суспензии вирусов и других микроорганизмов на ряд четких фракций. Предлагаемый прибор возможно использовать также для разделения белков.

Предмет изобретения

1.Прибор для электрофореза, содержащий верхний и нижний электродные сосуды, носитель и электроды, отличающийся тем, что, с целью обеспечения возможности проведения препаративного электрофореза и разделения гомогенатов тканей на отдельные субклеточные фракции, носитель размещен в трубках, снабженных снизу полупроницаемой мембраной, например, из целлофановой пленки и вмонтированных в дно верхнего электродного сосуда.

2.Прибор по п. 1, отличающийся тем, что, с целью повышения эффективности разделения, трубки для носителя выполнены в виде усеченного конуса с большим нижним основанием.