(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТИОФОСФАТНЫХ АНАЛОГОВ НУКЛЕОЗИД-ДИ- ИЛИ -ТРИФОСФАТОВ
вергают обработке с S-2-карбамоилэтилфосфатом в среде полярного органического растворителя с последующим омылением в щелочной среде и возможным окислением до дисульфида. Или Р(1)-дифенил-Р(2)-нуклеозид5-пирофосфат подвергают взаимодействию с солью дитиофосфорной кислоты в среде полярного растворителя с последующим восстановлением меркаптопроизводным и возможным окислением до дисульфида. Или S-2-карбамоилтиофосфат подвергают обработке хлорангидридом дифенилфосфорной кислоты и полученный продукт реакции приводят во взаимодействие с нуклеозид-5-дифосфатом с последующим омылением в щелочной среде и возможным окислением до дисульфида.
В качестве полярного органического растворителя обычно берут Пиридин.
Как правило, реакцию ведут при О-100°С, предпочтительно при комнатной температуре.
Отщепление группы R от целевого продукта проводят обычно щелочным омылением при нагревании в случае карбамоилэтильной группы или путем восстановления меркаптопроизводным, обычно р-меркаптоэтанолом, в случае тиофосфорнокислой группы.
При этом исходные соединения, содержащие фосфорнокислые группы, вводят либо в свободной форме, используя полярные органические растворители,- образующие соли, либо в виде их солей, растворимых в органических растворителях, предпочтительно в виде солей с третичными аминами.
Окисление целевого продукта до дисульфида, как правило, проводят красной кровяной солью или разбавленной перекисью водорода.
В формуле 1-В- в случае, если это натуральное нуклеиновое основание, представляет аденин, гуанин, гипоксантин, цитозин, урацил, тимин, 5-метилцитозин или 5-оксиметилцитозип. В случае, когда X - оксигруппа - это производные нормальных нуклеотидов, а в случае, когда X - водород, то это соответствующие дезоксирибонуклеотиды.
Представителями соединений, полученных по предлагаемому способу, являются аденозин-5-0- (2-тиодифосфат), гуанозин-5-0- (2-тиодифат), инозин-5-0-(2-тиодифосфат), ц.итидин-5-0- (2-тидифосфат), уридин-5-0- (2-тиодифосфат), тимидин-5-0-(2-тиодифосфат), 5-метилцитидин-5-0- (2-тиодифосфат), 5-оксиметилцитидин-5-0- (2-тиодифосфат), аденозин5-0- (2-тиодифосфат) -дисульфид, гуанозин-50- (2-тиодифосфат) -дисульфид, инозин-б-О- (2тиодифосфат)-дисульфид, цитидин-5-0- (2-тиодифосфат) -дисульфид, уридин-5-0- (2-диодисульфат) -дисульфид, тимидин-5-0- (2-тиодифосфат) -дисульфид, аденин-5-0- (3-тиотрифосфат), гуанозин-5-0-(3-тиотрифосфат), ииозин5-0- (3-тиотрифосфат), цитидии-5-0- (3-тиотрифосфат), уриди«-5-0-(3-тиотрифосфат), тимидин-5-0- (3-тиотрифосфат), адении-5-0- (3тиотрифосфат) -дисульфид, инозин-5-0- (3-тиотрифосфат) -дисульфид, цитидин-5-0- (3-тиотрифосфат) -дисульфид, уридин-5-0- (3-тиотрифосфат) -дисульфид.
В случае, когда В в приведенной формуле представляет модифицированное нуклеиновое основание, это соединение можно получить заменой одного или нескольких заместителей у ядра природного нуклеинового основания. Так, можно присоединить к пуриновому или пиримидиновому ядру в различных положениях атом галоида, алкилы, замещенные аминогруппы, сульфгидриды.
Представителями подобных соединений являются, например 1-метил-, 2-метил- или 7-метиладенин, -гуа-нин, -гипоксаятин, -ксантин; 3-метил-, М(4)-метилцитозии; 5-бром-, 5-ИОД-, 5-хлор-урацил; 8-бром, 8-йод, 8-фторгуанин; Н(6)-диметиладенин, 1-диметилаллиладеиин, 2-аминопурин, 2-кетопурин, 2-тио- или 4-тиоурацил, оротовая кислота, 1-метил- или
3-метилура-цил, 5-оксиурацил, 5-гидрометилурацил, моноалкиламино- и диалкиламинопурин и т. п.
Пример 1. В5мл высушенного метанола и 0,43 мл (1 ммоля) три-н.октиламина вносят
347 мг (1 ммоль) аденозин-5-фосфата и смесь слегка нагревают для полного растворения. Затем растворитель отгоняют под вакуумом и остаток несколько раз упаривают досуха с аликвотным количеством по 5 мл
сухого диметилформамида. Затем приливают 7 мл сухого диоксана л, если не происходит растворения, - 1 мл сухого диметилформамида. Затем приливают 0,3 мл хлорангидрида дифенилфосфорной кислоты и 0,3 мл три-н.бутиламина. Образуется белый осадок, который вновь растворяют при иеремещивании. После 3 час выдержки растворитель отгоняют и приливают 50 мл сухого эфира. Смесь оставляют на полчаса при 4° и затем декантируют.
К остатку приливают 5 мл сухого диоксана и полученную суспензию упаривают досуха. Затем приливают раствор S-2-карбамоилэтилтиофосфата в виде соли с три-н.бутиламмонием в 6 мл сухого пиридина. Смесь выдерживают 3 часа при комнатной температуре, при этом образуется осадок. Пиридин отгоняют под вакуумом, приливают 80 мл 0,2 н. едкого натра и полученный мутный раствор нагревают в течение 10 мин до 100°С. Охлаждают
смесь и нейтрализуют ее ионообменной смолой Мерк 1 (в пиридиниевой форме), обрабатывают 0,5 мл р-меркаптоэтанола, фильтруют и хроматографируют на ДЕАЕ-целлюлозе с применением линейных градиентов триэтиламмонийбикарбонатного буфера. Продукт элюируют при 0,22 М. Выход достигает 35% в пересчете на аденозин-5-фосфат. Соединение имеет спектр аденозина (. 259 ммкм
(815000).
Пример 2. 1 ммоль (302 мг) дикалийдигидродитиофосфата переводят в соль пиридиния пропусканием через ионообменник
Мерк 1 в пиридиновой форме. К соли пиридиния добавляют 2 ммоля три-н.бутиламина и
