Способ получения диосгенина Советский патент 1974 года по МПК C12D13/08 C12K9/00 C07C173/00 

1

Изобретение относится к области химикофармацевтической промышленности.

Известен способ полз чения диосгепина, заключаюпдийся в культивировании клеток, культуры ТКани Dioscorea deltoidea Wall in vitro с последующим выделением целевого продукта.

Целью изобретения является интенсификация процесса.

Поставленная цель достигается тем, что ткань предварительно обрабатывают N-нитрозометилмочевиной в концентрации 0,25- 30 мМ.

При обработке мутагеном в концентрациях 0,25-2 мМ используют всю обработанную ткань, обладающую равномерным ускоренным ростом, вследствие индуцированной мутагеном стимуляции, а при обработке мутагеном в концентрациях 2 мМ и выще отбирают мутаптные штаммы с ускоренным темпом роста и увеличенным накоплением биомассы.

Пример. 2, 5 г ткани Dioscorea deltoidea Wall суспендируют в 50 мл жидкой среды Мурасиге-Скуга и стерильно добавляют раствор N-нитрозометилмочевины, чтобы конечная концентрация составляла 0,5 мМ.

Среду Мурасиге-Скуга готовят следующим образом.

На 1 л среды берут 9 г агар-агара, 30 г сахарозы, 40 мг 2,4-дихлорфенилуксусной кислоты и добавляют растворы солей и витаминов, так, чтобы в 1 л среды содержалось (в мг):

1650

NH4NO3 1900

KNOg

CaCl2-2H2O 440 370 MgSO4-7H2O 170

КН2Р04 6,2

НзВОз 22,3

MnS04-4H2O 8,6

ZnS04-7H2O

0,83 МГ

KI

0,25

Na2MoO4-2H20

0,025

CuSO4-5H2O

0,025

CoCl2-6H2O

FeSO4-7H2O

27,8 iNa ЭДТА

37,3

(натриевая соль этилендиамиптетрауксуспой

кислоты)

Фолиевая а ислота0,5

Рибофлавин (BS)0,5

0

Биотин1,0

Са. пантотенат1,0

Пиридоксин (Вб)1,0

Тиамин (Bi)1,0 Амид никотиновой

кислоты2

В120,00015

После 1-часовой экспозиции воздействия му30 тагена ткань отмывают на матерчатом фильтре 5-кратной сменой свежего питательного раствора, высаживают по 250 мг в пробирки на агаризованную среду Мурасиге-Скуга, выращивают 8 недель в термостате при 25°С, 70% влажности и определяют сырой вес ткани. Он составляет 140% по отношению к контролю, при этом наблюдают равномерный рост ткани и ее большую диссоциированность по сравнению с контролем. При пассировании эффект стимуляции сохраняется и усиливается. Так к IV пассажу сырой вес ткани превышает вес исходного контроля в 1,5-5 раз. При этом максимального прироста ткань достигает за более Короткий срок. Кроме того, увеличение биомассы ткани не сопровождается снижением концентрации действующего продукта в ней. Усиления оводненности ткани в вариантах

опыта не наблюдают, т. е. увеличенный вдвое 1выход сырой ткани с одной пробирки сопровождается также удвоением «урожая воздущно-cjxoro сырья. Следовательно, если в 100 г воздушно-сухого сырья содержится 340 г диосгенина, то соответственно 200 г воздушно-сухого сырья содержит 680 мг диосгенина.

Предмет изобретения

Способ получения диосгенина путем культивирования изолированной ткани Dioscorea deltoidea Wall и последующего выделения целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью интенсификации процесса, ткань предварительно обрабатывают N-нитрозометилмочевиной в концентрации 0,25-30 мМ.