Способ глубинного культивирования клеток DIoScoRea DеLтоIDеа WaLL Советский патент 1982 года по МПК C12N5/00 

1

Изобретение относится к области микробиологической промышленности и касается культивирования растительных клеток.

Известен способ глубинного культивирования клеток Dioscorea deltoidea Wall в питательной среде, содержащей углеводы, минеральные соли, витамины, фптогормоны в аэробных условиях .

Однако известный способ не предотвращает адгезию клеток.

Целью изобретения является предотвращение адгезии клеток.

Эта цель достигается тем, что культивирование ведут в присутствии полпоксииропиленгликолевого эфира в концентрации 0,005-0,2%/объем питательной среды, причем полиоксипропиленгликолевый эфир используют в виде водной эмульсии с концентрацией 0,1-10%.

Пример 1. Готовят питательную среду для культивирования клеток Dioscorea deltoidea W. следующего состава, мг/л: NHiNOs1650

KNOs1900

CaCl2-2H20440

MgS04-7H2O370

KHzPOi170

НзВОз6,2

MnSO4-4H2022,3

ZnSO4-7H208,6

KJ0,83

Na2MoO4-2H2O0,25

CuS04-5H200,025

CoCi2-6H2O0,025

5FeSO4-7H2O27,85

ЫагЭДТА37,25

Фолиевая кислота0,5

Рибофлавин0,5

Биотин1,0

10Са-пантотенат1,0

Пиридоксин1,0

Тиамин1,0

Никотинамид2,0

Кобаламин0,0015

15Кинетин0,1

2,4-D1,0

Сахароза30000

Пропинол Б-400 (0,1%-ная

эмульсия)50

20 Приготовленную среду в количестве 4,6 л вносят в ферментационный аппарат объемом 7,5 л, стерилизуют в автоклаве при атмосферном давлении в течение 15 MHEI (температура около 100°С), выдерживают 25 при 0,7-0,8 ати 20 мин (температура 116-118°С) с последующим плавным спуском давления пара до атмосферного в течение 15 мин. В охлажденный аппарат асептически вносят инокулюм в количестве 30 400 мл, содержащий 2x10 клеток.

В качестве инокулята используют штамм Dioscorea deltoidea Wall, выращенный в колбах на качалке при 100 об/мин в термостатируемой комнате при 26±1°С в темноте в течение 10 суток.

Процесс ферментации ведут при 27+ ±0,2°С со скоростью вращения мещалки 500 об/мин при расходе воздуха 1,5- 3,5 л/мин с поддержанием концентрации растворенного кислорода 60-90% от насыщения максимального по питательной среде.

В ходе ферментации периодически отбирают пробы культуральной жидкости, в которых контролируют рН, концентрацию клеток, вес биомассы (влажной и сухой), содержание диосгенина. Накопительное культивирование ведут в течение 2-3 недель, получают 4 л культуральной жидкости с концентрацией клеток 7X10 кл/мл (10 г/л сухого вещества биомассы) и содержанием диосгенина 1,37% в пересчете на абсолютно сухой вес биомассы. Общий выход диосгенина составляет 100- 140 мг/л.

Пример 2. Питательную среду готовят аналогично примеру 1, при этом пропинол Б-400 вносят в количестве 2 г/л в виде 10%-ной водной эмульсии. Все последуюище операции (стерилизация среды, процесс культивирования, биосинтез диосгенина) остаются неизменными.

Использование изобретения позволит увеличить выход целевого продукта.

Формула изобретения

1.Способ глубинного культивирования клеток Dioscorea deltoidea Wall в питательной среде, содержащей углеводы, минеральные соли, витамины, фитогормоны з аэробных условиях, отличающийся тем, что, с целью предотвращения адгезии клеток, культивирование ведут в присутствии полиоксипропиленгликолевого эфира « концентрации 0,005-0,2%/объем питательной среды.

2.Способ по п. 1, отличающийся тем, что полиоксипропиленгликолевый эфир используют в виде водной эмульсии с концентрацией 0,1 -10%.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Бутенко Р. Г. «Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений, М., 1964, с. 272.