Способ определения количества гаптоглобина в сыворотке крови Советский патент 1974 года по МПК G01N33/16 

1

Изобретение относится к области медицины.

Известен способ определения гаптоглобина в сыворотке, полученной из негемолизироваипой крови, и основанный на том, что в сыворотку добавляют различные количества гемоглобина, проводят электрофоретическое разделение с последующим спектрофотометрическиы определением минимального количества гемоглобина, обеснечивающего полное насыщение имевщегося гаптоглобина, и по полученпому значению рассчитывают искомую величину.

Однако известный способ является трудоемким и требует больщого расхода исследуемого материала и реактивов.

Для упрощения определения и повыщения чувствительности по предлагаемому способу взятую кровь гемолизируют до полного насыщения гаптоглобина гемоглобином с последуЮЩИЛ1 электрофорезом полученной сыворотки и спектрофотометрическпм определением количества связаппого гемоглобина известными приемами.

Способ определения количества гаптоглобнпа в сыворотке осуществляют следующим образом.

В центрифужную пробирку помещают 4-- 5 мл крови. Полихлорвиниловой палочкой, соединенной через резиновую трубочку с осью

якоря электромоторчика, производят механическое разрушение эритроцитов в течепие 12 мин, а затем центрифугируют при 300 об/мин в течение 7 мин. Сыворотку крови, насыщенную гемоглобином, в количестве 0,4 мл вносят в стартовый желобок агарового геля. Стартовый желобок готовят путем погружения на глубину 5 мм в горячий раствор агара стеклянного щтамма толщиной 1,4 мм

и длиной 65 мм. 1%-ный агаровый гель готовят на боратном буфере путем смещивания 0,5 М раствора борной кислоты, 0,2 М раствора едкого натра и дистиллированной воды в объемных отпощениях 6:3:1. Этим же буфером заполняют электрофоретические ванны. Агаровый гель непосредственно соединяется с электродным раствором. Электрофорез ведут в течепие 10 час при напряжении 100 в. По окончании электрофореза гемоглобин-гаптоглобиновая фракция располагается ближе к старту. Кусочек агарового геля, содержащий гемоглобин-гаптоглобиновую фракцию, переносят в мерный цилиндр и доводят объем содержимого буферным раствором до 20 мл.

Полученную смесь переносят в гемогенизатор и измельчают в течение 12 мин. Гемогенат центрифугируют в течение 5 мин при 9000 об/мин. Супернатантную жидкость переносят в кювету и спектрофотографируют на

регистрирующем спектрофотометре СФ-10

против такой же кюветы с дистиллированной водой. На полученной спектрофотограмме измеряют высоту пика и зону Сорэ в миллиметрах. По калибровочной кривой, построенной по результатам измерений высоты пиков в зоне Сорэ стандартных растворов гемоглобина, определяют количество гемоглобина, связав1пегося с гаптоглобином исследуемой порции сыворотки.

При вычислении молекулярный вес гаптоглобина принимают равным 106000, а молекулярный вес гемоглобина равны.л 68000.

Расчет количества гаптоглобина проводят по формуле

Снр - АХ389,7,

где Снр - количество гантоглобина в 100 мл

сыворотки;

А - количество гемоглобина (мг) в 0,4 мл исследуемой сыворотки.

Предмет изобретения

Способ определения количества гаптоглобина в сыворотке крови путем электрофореза с последуюндим спектрофотометрическим определением гантоглобина по величине гемоглобина в гемоглобин-гаптоглобиновом комплексе, отличающийся те.м, что, с целью упрощения определения и новыщения чувствительности, кровь предварительно гемолизируют до полного насыщения гаптоглобина гемоглобином.