Способ исследования белковых фракций микроэлектрофорезом Советский патент 1962 года по МПК G01N27/26 

Предлагаемый способ исследования белковых фракций микроэлекгрофорезом является модификацией одкого из методов электрофореза на опорной Среде, например на агар-агаровом геле.

Предлагаемый способ по сравнению с известными позволяет увеличить число одновременно проводимых исследований и уменьшить количество сыворотки на одно исследование, причем непрозрачный фон на фильтровальной бумаге заменяется прозрачным фоном агар-агара и время электрофореза уменьшается до 2 час. Особенность способа за ключается в том, что на стеклянной пластинке с агаром посредством гребенки со строго одинаковыми размерами зубьев делают ряды желобков, в которые градуированной пипеткой вносят различные исследуемые жидкости, подключают электрический ток и по окончании процесса обрабатывают пластинку известными способами.

Исследование белковых фракций микроэлектрофорезом на агаровом геле МОжет быть осуществлено на известном аппарате, схема которого изображена на фиг. 1, вид в плане; на фиг. 2 - тот же аппарат, разрез -Л на фиг. 1; на фиг. 3-схема гребенки для выполнсиия желобков на поверхности агарового геля; на фиг. 4 - схема рабочего положения гребенки при выполнении желобков.

На чистую, высушенную, с обезжиренной поверхностью стеклянную Пластинку /, находящуюся в горизонтальном положении, наливают подогретый до температуры 80° и охлажденный до 50-60° профильтрованный 1%-ный раствор агар-агара в буферном (веронало-мединаловом, баратном) растворе, рН которого равна 8,6, ионная сила 0.08-0,1, а оптимальное количество - 80 мл раствора для получения толщины слоя в 1,75 мм- Пластинку / с агар-агаром прикрывают кристаллизаторным колпаком и Охлаждают при комнатной температуре в течение 1 час.

После охлаждения берут гребенку 2 (из пластмассы), устанавливают ее зубьями, имеющими одинаковый размер, под углом 90° к поверх№ 146086

ности слоя 3 агара и слегка нажимают до упора в стеклянную пластинку. Через 30-40 сек гребенку снимают и повторяют эту же 01перацию в следующем ряду слоя агара. Таким образом получают 16 желобков 4 в одном ряду, соответственно числу зубьев гребенки, а всего 48 желобков в трех рядах, причем каждый желобоК имеет следующие размеры: глубину 1,75 мм, ширину 1 мм и длину 4,5 мм; расстояние между рядами желобков составляет 75 ммПодготовленную к работе пластинку / с агаром устанавливают на столик 5 аппарата в горизонтальном положении. На края пластины (на агаровый гель) накладывают четырехслойные салфетки 6 из предварительно пропитанной буферным раствором фильтровальной бумаги, посредством которых агар-агаровый слой соединяется с буферным раствором 7, заполняющим кюветы 8, в которых за перегородками 9 находятся анодный электрод 10 и катодный электрод // В каждой кювете находится -по 900 мл буферного раствора. Градуированной пипеткой в каждый желобок 4 вносят различные исследуемые жидкости, например.сыворотку или плазму крови, по 0,0015-0,002 мл (оптимальное количество белка составляет 0,1 миллиграмма).

После заполнения всех желобков 4 аппарат закрывают крышкой 12, снабженной по краям резиновой прокладкой для герметичности образуемой в аппарате камеры, подключают выравненный электрический ток и ведут электрофорез в течение 2 час при комнатной те.мпературе (18- 20), По окончании процесса пластинку / отделяют от буферного раствора (после отключения тока салфетки 6 снимаются), извлекают ее из аппарата и обрабатывают обычными способами. Окраску электрофореграмм производят известными красителями, используемыми для окрашивания на фильтровальной бумаге. Расшифровку электрофореграмм проводят на микрофотометрах типа МФ-2 или МФ-4. Таким образом можно одновременно проводить 48 опытов (исследований) на обычных аппаратах, предназначенных для электрофореза на фильтровальной бумаге.

По заключению ордена Ленина Института ге.матологии и переливания крови предлагаемый способ может быть рекомендован для внедрения в практику биохимических исследований.

Предмет изобретения

Способ исследования белковых фракций микроэлектрофорезом на агаровом геле, отличающийся тем, что, с целью увеличения числа одновременных опытов, на стеклянной пластинке с агаром гребенкой со строго одинаковыми размерами зубьев делают ряды желобков, в которые градуированной пипеткой вносят различные исследуемые жидкости, подключают ток и по окончании процесса обрабатывают пластинку известными приемами.