ются введенным в силикагель красителем через 2-3 мин после развития хроматограммы.
При введении в силикагель метилового красного наблюдают фиолетовые пятна липидов иа малиновом поле пластины.
Для ослабления окраски поля пластину помещают на 30 сек в камеру, насыщенную парами аммиака (интервал рН изменения окраски этого красителя из красной в желтую составляет 4,,2).
При введении в силикагель сульфата нильского голубого проявляются светло-голубые пятна липидов на темно-синем поле пластины.
Количественное содержание индивидуальных классов липидов определяют по калибровочной кривой зависимости приведенной площади пятна от логарифма количества (мкг) вещества определенного класса липидов в этом пятне (см. табл. 1).
Прямолинейная зависимость на графике
для логарифма количества вещества сохраняется в интервале 0,В-2,0.
Приведенная площадь пятна (So™. ) является отношением площади пятна от искомого количества определяемого липида (Sx) к стандартной площади пятна (Sjo), полученной от стандартного количества вещества того же класса липидов (20 мкг), т. е.
А-.
с -
-пти. -
M
Площадь пятна определяют по уравнению для площади эллипса:
к а b
S где а п b - большая
и малая оси эллипса.
Таблица 1
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| Способ измерения массовой концентрации метиловых эфиров жирных кислот в биологических средах методом газожидкостной хроматографии | 2020 |
|
RU2758932C1 |
| Способ определения границ хроматографических зон отдельных классов фосфолипидов при разделении их смеси методом тонкослойной хроматографии | 1990 |
|
SU1778684A1 |
| ^ЙЛ | 1973 |
|
SU406147A1 |
| КОМПОЗИЦИЯ МАТЕРИАЛОВ СЕНСОРОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХИМИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ ПРИ СЛЕДОВЫХ КОНЦЕНТРАЦИЯХ И СПОСОБ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ СЕНСОРОВ | 2006 |
|
RU2427834C2 |
| Способ количественного определения индивидуальных токоферолов | 1973 |
|
SU463070A1 |
| Перхлорат 2,6-ди- @ -метоксифенил-4-фенилэтинилпирилия как импрегнатор в тонкослойной хроматографии | 1984 |
|
SU1189861A1 |
| СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ КЛАССОВ ЛИПИДОВ И ПОДКЛАССОВ ФОСФОЛИПИДОВ В БИОЛОГИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛАХ | 2011 |
|
RU2517086C2 |
| СПОСОБ ЛИПОСОМАЛЬНОГО ИММУНОАНАЛИЗА ДЛЯ ДЕТЕКТИРОВАНИЯ АНАЛИТОВ В ОБРАЗЦЕ | 2001 |
|
RU2203495C2 |
| Способ количественного определения металлсодержащих антрахиновых хромовых и катионных красителей | 1977 |
|
SU735974A1 |
| РЕАКТИВ ДЛЯ ИЗМЕРЕНИЯ ТРОМБОЦИТОВ, НАБОР РЕАКТИВОВ ДЛЯ ИЗМЕРЕНИЯ ТРОМБОЦИТОВ И СПОСОБ ИЗМЕРЕНИЯ ТРОМБОЦИТОВ | 2009 |
|
RU2445628C1 |
Другим способом количество индивидуальных классов липидов определяют по способу определения приведенных объемов их пятен, который заключается в следующем: количественное содержание индивидуальных классов липидов находят фотоденситометрическим путем (см. табл. 2). Для этого с хроматографической пластины получают фотокопию контактным способом на штриховую пленку (фототехническая, ФТ-31), которую затем денситометрируют на приборе (например, МФ-4).
На основании полученных фотоденситограмм строят калибровочную кривую в координатах: приведенный объем пятна (
л ) - логарифм количества вещества
20
определяемого класса липидов (в мкг).
Объем пятна определяют по уравнению конуса с эллипсом в основании:
конуса - 12 а О
(h - максимальное значение оптической плотности фотокопии пятна на фотоденситограмме, а и 6 - основания пиков, полученных при сканировании пятна вдоль направления движения растворителя и перпендикулярно к направлению развития хроматограммы соответственно).
Открываемый минимум каждого индивидуального класса липидов по измерению плоО1ади пятен (I вариант окончания анализа) равен 0,5 мкг, а открываемый минимум каждого индивидуального класса липидов фотоденситометрическим путем (II вариант окончания анализа) - 5 мкг.
Продолжительность анализа с I вариантом окончания не больще 40 мин, со II - 2 час.
Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает надежное количественное определение индивидуальных классов липидов, является достаточно быстрым и эффективным, а также позволяет получить достоверные данные по количественному соотношению индивидуальных классов линидов при анализе.
Предмет изобретения
Таблица 2
хроматографированием и определением количества индивидуальных классов липидов, отличающийся тем, что, с целью ускорения и повышения точности определения, перед нанесением липидного экстракта в силикагель вводят жирорастворимый азо- или оксазиновый краситель.
