Гипоталамический рилизинг-фактор гормона роста и способ его получения Советский патент 1975 года по МПК A61K38/22 

не токсичен в остром и хроническом опытах в дозах, во много раз превышающих биологически активную дозу. Экснерименты, проведенные с помощью хроматографии и электрофореза, показали, что выделенное вещество является индивидуальным чистым пептидом. На основании определения аминокислотного состава и N-концевой аминогруппы и данных, полученных в результате последовательных реакций расщепления пептида по методу Эдмана, а также сопоставления с известными литературными данными по структуре рилизингфакторов других гормонов, установлена структура выделенного трипептида-пироглутамил-серил-глицинамида

isСНгОН

СН-СО-Ж- CH-CO-Mi-CHrCO-NHf

ш

пример. Получение рилизинг-фактора гормона роста. 5000 г свежезамороженных гипоталамических фрагментов крупного рогатого скота гомогенизируют в охлажденном до -15°С ацетоне и получают ацетонированный порощок ткани, который затем обрабатывают 2М уксусной кислотой. Лиофилизированный уксусно-кислый экстракт подвергают гель-фильтрации на волокне с сефадексом Г-25. Активную фракцию с Rf 0,63-0,53, элюируемую 0,005 М аммонийно-ацетатиым буфером рН 4,5, смешивают в стакане с КМцеллюлозой, суспензированной в этом буфере. Буфер отсасывают на воронке Бюхнера, целлюлозу промывают дважды этим буфером и аммонийно-ацетатным буфером рН 6,5. Активный материал элюируют с катионообменника 0,1М NaCl рП 6,5 и лиофилизируют, после чего освобождают от солей, пропускают через колонку с сефадексом Г-15 в 0,005 М аммонийно-ацетатном буфере рН 4,5. Затем активную зону подвергают хроматографическому разделению на колонке с КМ-целлюлозой в условиях ступенчатой элюции. Активный материал адсорбируют па колонке из 0,005М буфера рН 4,5, элюируют 0,1 М NaCl рН 6,5 и лиофилизируют. Сухой препарат подвергают дважды гельфильтрации в водном растворе на волокне с сефадексом Г-15, а затем с сефадексом Г-10. Активный материал лиофилизируют.

В составе активного препарата, элюируемого с колонки с сефадексом Г-10 с Rf 0,7, обнаружены с помощью автоматического аминокислотного микроанализатора Technicon три аминокислоты в эквимолярных соотношениях: серии, глутаминовая кислота и глицин. Дансил-хлоридный метод показал, что N-KOHцевая аминокислота пептида блокирована.

Предмет изобретения

1. Гипоталамический рилизинг-фактор гормона роста, представляющий собой пироглутамил-серил-глицинамид структуры

,СН,

СН,ОН

,

Г I

О с,, Ш-со-ш-СИ - СО-Ml - сн г со-та 2 . ш

2.Способ получения гипоталамического рилизинг-фактора гормона роста, отличающийся тем, что, с целью получения конечного продукта в химически-чистом виде, гипоталамические фрагменты крупного рогатого скота экстрагируют кислотой, например, уксусной, хроматографируют на катионообменнике, затем на органическом молекулярном сите в водном растворе или системе органических растворителей, например аммонийно-ацетатной с последующей лиофилизацией.

3.Способ по п. 2, отличающийся тем, что в качестве катионообменника используют,

например, КМ-целлюлозу.

4.Способ по п. 2, отличающийся тем, что в качестве органического молекулярного сита используют, например, сефадекс Г-10 и

Г-15.