Способ выделения низкомолекулярных биологически активных веществ Советский патент 1977 года по МПК A61K35/30 C07G7/00 

Идооретеййе относится к фармацевтнчеокой промышленности и касается получения биологически-активных веществ, обладающих фармакологическим действием, Известен способ выделения низком|з«еку пярных биологически -активных веще9тв из гипоталамуса крупного рогатого скота путем экстракции сырья уксусной кислотой, удаления из экстракта высокомолекул1фных соединений, лиофилизации полученной ниЪкомолеку лярной фракции, растворения ее в дистиллиро ванной воде, пропускания раствора через колонки с сефадексом д-10, эпюции дистилл№рованной водой и сорбации алюированных 4 акиий 1 . Однако этот способ не обеспечивает высокого выхода продукта. Целью изобретения является повышение выхода продукта. Для этого алюат, полученный с колонки с сефадексом д-10, лиофилизируют, растворяют в буферном растворе с рН 4,0 и далее очищают на ионообменннке S { -сеф4щекс д-25, со скоростью злюнин вышеупомянуто го буферного раствора 6О-61 мл/ч при комнатной температуре. Способ осуществляется следующим образом. 1 Свежий гипоталамус крупного рогатого скота экстрагирует 0,25-0,5% уксусной кислоты при температуре 8О-85 С в течение 2О-30 мин,,экстракт центрифугируют при 8ООО-1ООООо, удаляют высокомолекулярные соединения обычными способами, ниэкомолекулярную фракцию собирают и лиофил зируют. Затем 4ОО г лиоф1шизированного порошка обрабатывают ледяной уксусной кислотой в соотношении 1:3. В ледяной уксусной кислоте выпадают в осадок оставшиеся крупные пептиды и некоторые белковые комплексы. После фильтрации i па стеклянных фильтрах уксуснокислый экстракт наносят на колонку сефадекса д-Ю (размер 10x6О см, свободный объем 2,2 л,), Нейрогормоны К и 5Г алк ируют дистиллпропанной воцой в 5-6 объемах, а нейрогормоп С - в 13-14 объемах, скорость эпгации 1,2 л/ч. Злюцию проводят дистиллированной воцой при комнатной температурва Фракций, в которых обнаруживают ней рогормоны К, 9° и С, выяушйвают лиофильно« Сухой остаток составляет 0,8-1,8 г для зо ны К и и около 0,3 г для зоны С

Поале гелевой фильтрации указанного количества лиоф{шизированного продукта нейро гормоны очищаются более чем в 200 раз „ Основная неактивная масса шофилизированно го продукта эпюируется в первых 2-3 объеMaXe.i

Лиофялианрованный порошок нейрогормона GS, а также смесь кейрогсрмонов К и 2-воряют в iO ivffllOsl М CHgCOOH -NHj буфара рН 4,0 (источником аммиака олужи-г 23%NH40H ) и наносят на копонкуионоабыенййка или же прово.цлт- через препаративный,, постоянно текущий бумажный зяёктрофорезс. Проводят также последовательно - сначала алектрофореЗв затем ионообменник

SP - сефадекс д-25 уравновешивают ука заниым буфероМв Элюцшо проводят исходным буфером, собирая фракции по 15 мл (скорост элюции 60 Mn/4aCj при комнатной .(температуре) ;Нейрогормоны G, К и (Гэпюируют с колонки соотве: ственно в 16-17s и фракциях, .Фракции высушивают лио:;;1шьно, обессоливают, поБТОрнойихроматогра фией на капонке сефадекса размером 2x50..

После этого вещество наносят на продол дающийся эиектрофорез (ватман К9 3, аммоний - ацетатный буфер, рН 4, температура , в течение 24-284; ббО-Юбоу, 2CN40 ма). Можно проапюировать весь материал, .полученный из 4ОО г лиофилизирова{ь. ,

наго порошка. Вещества; К и С двигаются к аноду, а 7- к катоду.

На всех этапах очистки проводят испыт вие биологической активности нейрогормо- нов.

Предлагаемый способ позволяет в 100200 раз увеличить выход цен1Ш1х биопогичеоки активных i веществ, которые могут быть испогшзованы в качестве сырья для приготов леийя лекарственных препаратов.

Формула изобретения

Способ- выделения низкомолекупярных био логически активных веществ из гипоталаму са крупного рогатого скота путем экстрак дни сырья уксусной кислотой, удаления из экстракта высокомолекулярных соединений, лиофилизацииполученной низкомолекулярной фракции, растворения её в дистиллированной воде, пропускания раствора через колонки с сефадекс ом д-10, элюции дистиллированной водой и 1сррбции 1 элюированных фракций, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода продукта, элюат, полученный с колонки с сефадекс ом priOg лиофилизируют, растворяют в буферном растворе с рН 4,0 и далее очищают на ионообменнике Sp-сефадекс №-25, со скоростью алюции вышеупомянутого буферного раствора 60-61 мл/ч- при комнатной температуре.

Источники информации принятые во внимание при экспертизе:

1о Авторское свидетельство СССР I 403214, кл С 07 G 7/00, 1975.