Способ получения рифамицина из нового вида продуцента Советский патент 1977 года по МПК C12D9/22 

1

Изобретение относится к производству антибиотиков.

Предложен новый ранее в литературе не Отесанный штамм 2739 Nocotrdia asiatiса sp ., продуцирующий рифамицин В, характерйаующийся тем, что на минеральной среде На 1 образует белый скудный воздутаный мицелий и бесцветный субстратный .мицелий, гифы воздушного мицелия распадаются по всей длине на продолговатые споры с гпадкой поверхностью,la органической среде № возцушного мицелия нет, субстратный мицелий ярко-оранжевый, среда не окрашена, рос хороший; на среде Чапека образует хорошо развитый мицелий розоватого цвета, субстратный, мицелий ярко-краснь Й до вишневого, окраска с -бстратного мицелия обусловлена образованием красного пигмента, пигмент в среду не проникает; на среде СР-1 Краслльникова, глюкозо-аспарагиновом агаре и ереде Линденбайна образует розоватый воздушный мицелий и от оранжевого до ярко-крас- яого цвета субстратный мицелий, среда не OKpauiena на среде Треснера-Кореняко образует белый скудн).1й воздушный мицелий и

темно-вишневый субстратньтй мщелнй, пигмент cfjeay 1ю окрашивает; меланина не образует; усваивает фруктозу, г&яает озу, глицерин, сахарозу, рафинозу, ксилозу, арабинозу, , рамнозу, машшт и не усваивает целлюлозу; гидролизаты цельных клеток содержат мвзо-йиаминопимелиновую кислоту, арабинозу и галактозу; образует до 4ОО мкгЛст антибиотика.

Штамм 2739 Nocafdid asiatka sp, fioi выделен из почвы и имеет следующие особенности пря выращивании на различных агаровых ере- цах при в течение 7-21 дней. Определение цвета субстратного мицелия проводят по пшале цветов Бондартхева и по шкале Праузера, а окраски воздушного мицелия - по шкале Треснера.

Минеральная среда № 1. Воздушный мицелий тонкий, белый. Гифы возцушного мицелия по всей длине распадаются на продолговатые споры с гладкой поверхностью. Субстратный мицелий бесцветный; при росте на свету от оранжевого до вишневого. Среду йе окрашя- вает. Рост скудный.

Органическая среда № 2. Воздушного K-JHце шя нет. Субстратный мицелий ярко-оранжевый. Среда ие окрашена. Рск:т хороший.

Среда Чапека Воздушный мицелий белы до розоватого, хорошо развиТоС-бстратныймИ целий грко-красный до вичневого. Окраска субстратного китцелия обусловлена образованием KpacHot o тшгме гга, который экстрагируется из мицешгя анетоном. Среда не окрашена. Рост обильный.

Среда СР-1 Красильникова и глюкозоеспарагиновая среда. Воздушный мицелий белый по светло-розоватого. Су6стратнь Й миueimft от оранжевого до ярко-красного. Среда не окрашена. Рост хороший.

Овсяная среда. Воздушный мицелий белый. Субстратный мице.гшй оранжево- красный, Среда не окрашена. Рост умеренный.

Среда Линденбайна. Воздушный к-шцелий кремово-розовый. Субстратный мицелий вишневый. Среда не окрашена. Рост хороший.

Среда Треснера-Кореняко. Воздушный ; мицелйй белый, скуднг-тй. Суостратный мицелий темно-вишневый. Среда не окрашена. 1 Рост хороший.

Среда Эмерсона. Во.здушного мицелия нет Субстратный мттоелий желтовато-оранжевый. Среда не окрашена. Рост умеренный.

Картофельный агар. Воздушного мицелия нет. Субстратный мицелий желтоватый. Среда не окрашена. Рост умеренный.

Среца с пептоном и лимокно-кис/а тм железом. Меланина не образует.

Предложенный штамм хорошо усваивает фруктозу, глюкозу, галактозу, глицерин, сахарозу, рафинозу, ксилозу, арабинозу, инозит рамнозу, маннит; не усваивает целлюлозу Подавляет рост StaphvCococcus aureos 2О9Р; Bac.-mycoides К , Bac.subtifn i6g; .Safcirta ЬЫа. Гидролизаты целых гслеток содержат . аминопимелиновую кислотугарабинозу и галактозу

Для получения антибибтика рифамицина из

культуральной жидкости штамм 2739 выращи. вают глубинным методом на сгреде, содержащей KoVftioHeHTb) в следующих соотношения вес.%:

Соевая мука. 1,5

Глицерин 3

Хлористый Натрий0,2

Карбонат кальция;0,5

Медина л0,1

Кашалотовый жир. 0,1

Водадо 100 мл.

Посевной мицелий выращивают в течение24 ч. на жидкой питательной среде состава,% Перевар Хоттингера 3 по объему (28 30 мг% aMJiHHoro азота)

Глюкоза1

Пептон0,5

Ужг. тип., 3. 763-77 г., т. 2500.

Хлористьп натрий0,5

Карбонат кальцияо,з

ВодаВодопроводная

Максимальное накопление антибиотика в ку/пзтуральной жидкости происходит на 5-6 сутки культивирования при 2 8-30° С и постигает 400 мкг/мл рифакгацина В.

Выделяют рифамицин В из культурапьной жидкости следующим образом. Культуральнуто жидкость отфильтровывают от мицели Натпвный раствор подкисляют до рН 4, антибиотик экстрагируютС метиленхлоридом. На первую экстракцию берут 0,1 часть, на вторую и на третью по 0,05 части по отношению к объему нативного раствора. Первый и второй экстракты объединяют. Третьим экстракт ом проводят вторичную экстракцию нативного раствора следующей ферментации. Из метиленхлоридного экстракта .антибиотик; переводят в ОД М фосфатный буферный раствор с рН 7,0-7,5, содержащий 0,5% аскорбиновой кислоты. Реэкстракцию проводят 3 рази. На каждуто операцию берут по О,1 части от объема метиленхлоридного экстракта. Все три водные реэкстракты объединяют, до.бавляют 5% (по отношению к объему реэкстракта) бутилового спирта, доводят рН раствора до 4,0, и антибиотик снова экстрагирую метиленхлоридом 3 раза. На первую экстракцию берут 1 /2 объема, на вторую и третью по 1 /4 объема реэкстоакта. Метиленхлоридны экстракты объединяют, концентрируют в вакууме при +40 С в 25-50 раз, и раствор оставляют при 0-5°С. Через несколько часов выпадает кристалический рифамицин В. Кристаллы отфильтровывают, промывают этилацетатом, Рифамицин Б путем окисления азотистой кислотой превращают в рифамицин О. Затем рифамицин О гидролизуют соляной кислотой и рифактцин 5 . Рифамицин 5 востанавливают аскорбиновой кислотой в рифамицин SV , из которого добавлением натриевой щелочи получают препарат натриевой соли рифамицина & . Г

Формула изобретения

2739 Nocapdics oisiciiicoi sp. HOW.- продуцент рифамицина В .характеризующийся тем, что на минеральной среде № 1 образует белый скудный воздушный мицелий и бесяцветный субстратный мицелий, гкфы воздушного мииелия распадаются по всей д.гшне на продолговатые споры с гладкой поверхностью; на органической среде N 2 воздушного мицелия нет, субстратный мицелий ярко-оранжевый, среда неокрашена, рост хороший; на среде Чапека образует хорошо развитый воздушный .мицелий розоватого пвета, ;субстратньгй ми- целий ярко-красный до вишневого, окраска субстратного мицелия обусловлена образованием красного пигмента, пигмент в среду не проникает; Иа средеСРЗ. Красипьникова, глюкозо -аспарагйновом агаре и среде Лин- ценбайна образует розоватый воздушныймицелий и от оранжевого до ярко-красного цвета субстратный мицелий, среда не окрашена; на среде Треснера-Кореняко образует белый скудный воздушный мицелий и темно-виптевый субстратный мицелий, пигмент среду не окрашивает; меланина не образует; усваивает фруктозу, галактозу, глицерин, сахарозу, рафинозу, ксилозу, арабинозу, инозит, рамнозу, маннит и не усваивает целлюлозу; гидролизаты цельных клеток содержат кгезо-диаминопимелиновую кислоту, арабинозу и галактозу; образует до 400 мкг/мл антибиотика.