Способ получения электронномикроскопических автографов Советский патент 1975 года по МПК G03C1/00 G03C5/00 

1 -„

Изобретение относится к способу получения электрониомикроскоиических автографов, которые могут быть использованы в медицине, биологии и технике для исследований способом электронной авторадиографии с применением меченых атомов.

Известен способ получения электронномикроскопических автографов путем нанесения на биологический срез ядерной эмульсии, предварительно подвергнутой тонкослойному сепарированию для выделения твердой фазы эмульсии, с последующим экспонированием и проявлением.

В этом случае первое созревание проводят в присутствии стабилизатора - ста-соли и отделяют твердую фазу эмульсии методом тонкослойного сепарирования, проводимого в одну стадию.

Введение стабилизатора в первом созревании эмульсии обеспечивает задапный размер микрокристалловгалогенидасеребра

(0,08 мкм), но при этом снижается фотографическая чувствительность (3-4) единиц почернения на 1 электрон с энергией Е 75,6 кэв при толщине эмульсионного слоя 20 мкм.

Малая чувствительность эмульсионного слоя требует длительных экспозиций, сопровождающихся процессом регрессии центров скрытого изображения, а также способствующих протеканию процессов перекристаллизации микрокристаллов галогенида серебра, что вызывает артефакты автографа.

Поэтому предлагаемым способом нельзя выявить метаболизмы ультраструктур клетки.

Цель изобретения - увеличение разрещающей способности автографов, повыщение фотографической чувствительности эмульсии, улучщение адгезии эмульсии к биологическому срезу, повышение эффективности фотографической обработки - достигается тем, что выделение твердой фазы эмульсии выполняют не менее, чем в две стадии, причем на первой стадии выделяют микрокристаллы галогенида

серебра, средний размер которых больще среднего размера мпкрокристаллов, выделяемых на второй стадии, и фотографическую обработку ведут при (-4) -(+8) С.

Для улучшения адгезии эмульсионного слоя

к биологическому срезу в эмульсию обычно вводят смачиватель - додецилгликолевый эфир изооктилфенола.

Иример. Для получения мелкозернистой эмульсии прпготавливают 2,9%-ный раствор предварительно набухшей желатины в дистиллированной воде, причем в расплавленную желатину вводят 6,3 г-моль/л бромистого калия и водный раствор аммированного азотнокислого серебра (5,3 г-моль/л).

К раствору желатины при перемешивании (100 об/мин) прибавляют раствор азотнокислого серебра в течение 1-2 сек. Продолжительность физического созревания до 60 сек. После нейтрализации избытка иона аммония 30%-пым раствором уксусной кислоты доводят рН эмульсии до 4,7-4,9.

Тонкослойное сепарирование проводят не менее, чем в две стадии.

Сначала пропускают эмульсию через дозирующий ниппель размером 6,0 мм при скорости сепаратора 4500 об/мин. Затем новторно сепарируют выделяющийся фугат, пропуская эмульсию через дозирующий ниппель размером не более 3,0 мм при скорости сепаратора 7700 об/мин.

На первой стадии сепарирования выделяют крупные микрокристаллы, на второй - мелкие, но более однородные по размеру.

Полученный на второй стадии сепарировапия осадок галогенида серебра диспергируют в присутствии желатины и подвергают химическому созреванию нри 50°С в кислой среде в нрисутствии золотохлористоводородной кислоты, роданида и тиосульфата натрия.

Физико-химические и фотографические характеристики исходной эмульсии и первой и второй фракций сепарирования приведены в таблице.

Перед нанесением второй фракции эмульсии на биологический срез ее разводят стабилизирующим раствором в соотнощении 1 : 10, после чего вводят смачиватель - додецилгликолевый эфир изооктилфенола.

Эмульсии, изготовленные предлагаемым способом, обладают высокой коллоидной устойчивостью и не склонны к процессу перекристаллизации несмотря на больщую удельную поверхность микрокристаллов второй

фракции сепарирования, поскольку использована стандартная ядерная эмульсия типа М, в которой коллоидная устойчивость микрокристаллов оптимальна. Полученную эмульсию наносят на препаративную металлическую

сетку с предварительно положенным биологическим объектом, содержащим меченые атомы, экспонируют в холодильнике при +4°С в течение 10-15 суток для следовых автографов и до 25 суток для контрастных автографов,

после чего проявляют при (-4) - (+4)°С в течение 4-10 мин.