Способ получения инсулина Советский патент 1976 года по МПК A61K38/28 

Описание патента на изобретение SU508162A3

1

.

Изобретение относится к фармацевтичес кой промышленности.

Известен способ получения комплекса цинковая соль инсулина - протамин путем прибавления к раствору кристаллического

инсулина цинка хлорида,и протамин-сульфата.

Для повышения быстрагы и длительности действия вещества смешивают натриевую соль инсулина в соотношении, на каждые

1ОО ед. инсулина 0,2 - 1,5 мг протамиНа И растворяют в воде при рН 6,5-8,0.

Соль Инсулина приготавливают путем щелочной кристаллизации инсулина, применяя едкий натр, гидроокись шелочного металлаИЛИ гидроокись аммония. После кристаллизаиии кристаллы промывают и сушат до тех пор, пока содержание влаги будет, менее 10%. Соль инсулина мгновенно растворяется в воде при нейтральном рН и может храниться в растворе до 3 кгесяцев без существенного ухудшения,

Соль инсулина и протамин соединяют в ВОДНОЙ среде так, чтобы образовался комп- леке соль инсулина-протамин5 рН

среды 6,5-8,0., Комплекс соль инсулина-пртамнн может быть легко отделен от жидкой среды фильтрованием и высушен. Комплекс в сухой форме может храниться год и более. ЕСЛИ применяют комплекс соль инсу- лина-протамин, -то его растворяют в водной среде, предпочтительно в изотоническом разбавителе при рН 6,5-8,0. После растворения комплекс готов для инъекииИо Комплекс характеризуется быстро наступающим И длительно продолжающимся действием.

Изготовление комплекса соль инсулина-протамин СОСТОИТ в приготовлении натриевой СОЛИ инсулина, почти не содержащей цинка, т.е. менее О,О5% (натриеввя соль в кристаллическом внде, но растворима в воде ИЛИ в изотоническом разбавителе). Затем натриевую соль растворяют Б жидкой среде в таком количестве, чтобы на 1ОО мл жидкой среды приходилось ед. Затем к ЖИДКОЙ среде добавляют требуемое коли--, чество протамин-сульфата. Образуется нерастворимый комплекс в виде очень тонкого осадка. Тонко распределенный осадок хорошо суспендируется в жидкой среде, так

; что инъекция производится лето. Если ком плекс хр)ннтся ;в жидкой среде, то ои

остается стабильным и ве теряетг/автйввоёт

в течение года.

ь Натриевую соль инсулина получают путем i обработки неочишенного инсулина едким

натром в водном растворе, причем едкий .. натр п$«сутствует в количестве, необходимом для получения рН 8-8,5. Нат жевая

соль инсулина осаждается в растворе и : легко отделяется декантированием,цектри фугированием, фильтрованием. Натриеваг f

сдль MolkeT быть очищена последующим : растворением и перекристаллизацией. Анализ показывает, что при применении натриевой соли инсулина на 1 моль натрия присутствует 1 моль инсулина. Кристаллы натриевого инсулина могут содержать обычный или свиной инсулин и легко растворимы в воде-И изотонических растворах при рН около 7.

Протамин обычно присутствует в виде протамин-сульфата или в другой водораст воримой форме.

Если применяют изотонический оаэбави- гель в качеств е среды для протамин-суль-;

фата и соли инсулина, необходимо чтобы разбавитель содержал консервирующее среДгстбо. Консервирующим средством является фенол и метил- п -гидрооксибензоат.

Биологическую активжжть комплекса протамин инсуля определяют на кролшсах.

36 кроликов (2 равные группы) выдерживают голодными 24 часа перед испыта аием. В течение всего испытания им не да уг ни BOjEibr, ни пиши. Для определения перфо начального содержания сахара в крови про крови берут из концевой ушной вены. Ко нтрольной группе кроликов впрыскивают назначени -ю г ДОЗУ нейтрального протамин-инсулина Хагедорн (NPH), испытываемой группе инъецируют комплекс протами№-натиевый инсулин (PSИ). Первую пробу крови у каждого кролика берут через ЗО мин. Последующие пробы берут через 1,5, 3, 5, 7 и 9 час после инъекции. Каждую пробу анализируют на содержание сахара в крови, результаты выражают в миллиграмм/ процентах глюкозы. Дли обеих групп вычисляют- среднее содержание aeatetpst для каждого отбора проб,

Если применяют перекрестное испытание, кроликов, которые лопучакуе контрольную пробу, :иньецируют комплексом протаминнатриевый инсулин iii наоборот. Эти испытания проводят через неделю; по окончании яервоначальных испь таквй.

Полученные результату вь1раженные как среднее содержание сахара в крови в миллиграмм/процентах, представлены в табл. 1.

Таблица

Похожие патенты SU508162A3

название год авторы номер документа
ИНСУЛИНОВЫЙ ПРЕПАРАТ, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА, СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ САХАРНОГО ДИАБЕТА 1994
  • Джеймс Артур Хоффман
RU2135205C1
КОМПЛЕКС АНАЛОГА ИНСУЛИНА И ПРОТАМИНА, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ДИАБЕТА 1995
  • Майкл Розарио Де Фелиппис
RU2154494C2
Способ получения дисперсии полипептидов для интраназольного применения 1988
  • Филип Эдгар Хансен
  • Андерс Роберт Серенсен
SU1837869A3
КОМПЛЕКС БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА С ПОЛИСИАЛОВОЙ КИСЛОТОЙ 2008
  • Безуглов Владимир Виленович
  • Грецкая Наталья Михайловна
  • Бобров Михаил Юрьевич
  • Акимов Михаил Геннадиевич
  • Баирамашвили Дмитрий Ильич
  • Шибанова Елена Дмитриевна
  • Клинов Дмитрий Владимирович
  • Мирошников Анатолий Иванович
RU2391354C1
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ ФОРМЫ ИНСУЛИНА, ОБЛАДАЮЩИЕ БЫСТРЫМ УСВОЕНИЕМ 2010
  • Стейнер Соломон С.
  • Пол Родерик
  • Ли Мин
  • Хаузер Роберт
RU2506945C2
Способ получения человеческого инсулина или его аналогов 1981
  • Рональд Юджин Чанс
  • Джеймс Артур Хоффманн
SU1327790A3
ИНСУЛИНОВЫЕ ПРЕПАРАТЫ, СОДЕРЖАЩИЕ УГЛЕВОДЫ 1997
  • Кимер Лоне Легструп
  • Бальшмитт Пер
  • Енсен Стен
RU2204411C2
ИНСУЛИНСОДЕРЖАЩИЙ ПРЕПАРАТ ПРОЛОНГИРОВАННОГО ДЕЙСТВИЯ 2015
  • Сабецкий Владимир Андреевич
RU2676101C2
СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ СУСПЕНЗИИ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ КОМПОЗИЦИИ НА ОСНОВЕ СУБСТАНЦИИ ГЕННО-ИНЖЕНЕРНОГО (РЕКОМБИНАНТНОГО) ИНСУЛИНА ЧЕЛОВЕКА 2001
  • Хлябич Г.Н.
  • Пак М.Ф.
  • Пак Т.В.
  • Бондарева Л.Н.
  • Мазов М.Ю.
  • Колдышев А.Е.
RU2185152C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДНК-СОДЕРЖАЩЕГО ПРЕПАРАТА ДЛЯ ПЕРОРАЛЬНОГО ПРИМЕНЕНИЯ И ПРЕПАРАТ, ПОЛУЧЕННЫЙ ЭТИМ СПОСОБОМ 2022
  • Бессонов Алексей Николаевич
  • Байдусь Александр Николаевич
RU2779914C1

Реферат патента 1976 года Способ получения инсулина

Формула изобретения SU 508 162 A3

Комплекс протамин-натриевый инсулин действует более быстро более продолжительно, чем продукт NPH.

Комплекс PS 3 (протамив иатриёвьтй и сулин) сравнивают со смесью AiJ3 (кислот ный обычный инсулин) и NPH # соотнощении 1:1 (на базе активности). Концентр 55 ция протамнн-сульфата О,8 мг/мл.

При этом перекрестном испытании ио польЕ ют 36 кроликовс Каждому впрыскивают ОД мл инсулинового продукта, т.е. 1 ед. инсулина на инъекцию. 60Результаты представлены в табл.2.

Проводят сравнение трех типов нейтральных продуктов протамин-натриев 1й инсулин е комбинации с 0,02 мг цинка «а ДООед.

.5 ; - iffK;,.-....

инсулина. Каждый инсулиновый продукт содержит О,О2 мг цинка, на ЮО ед. инсулина.

При добавлении цинка определяют его влияние на быстро наступающее и долго продолжающеесн действие комплекса протаю .мик йатриевый инсулин. Неблагоприятного

. Свиной инсулин действует быстро, хотя продолжительность его действия не такая длительная, как других инсулиновых продуктов. Бычий и смешанный прюдукты действуют быстро и долго.

П р и м .е р 1. Приготорление комплек- са протамин-инсулин в дозированной форме.

Кристаллический бычий натриевый инсулин приготавливают следующим образом.

Инсулин экстрагируют из бычьей поджелудочной железы, подкисленной водной спирТа б л и ц а 2

действия не наблюдается.

Сравнивают три продукта: свиной и быП чий инсулинь, а также смесь, сА ержащую 75% бычьего и 25% свиного инсулина.

Испытание проводят над 6 кроликами, каждому впрысясивают О,О1 мл, т.е. дозу в i ед. инсулина.

Результаты пз едставпены в табл. Я. ТаблицаЗ

товой средой,- концентрируют под вакуумсм;и 4iacTH4Ho очищают дробным осаждением . с хлористым натрием и изоэлектрическим осаждением. Затем инсулин очищают щелочной .кристаллизацией при рН 8. Полученные кристаллы растворяют в разбавленной уксуо.ной кислоте (0,5 н) и далее фракционируют фильтрованием на Софадексе Г-5О.

Элюат, состоявший из О,5 н. уксусной кислоты и инсулина, нейтрализуют 1 н. едкйм натром и перемешивакэт 1 час при ком нач-ной температур®. Затем кристаллы натри евого инсулина отделяют фильтрованием и промывают 2%™ным хлористым натрием. После чего промытие кристаллы вносят в избыток абсолютного спирта нри сильном перемешивании, отфильтровывают и собирают. После второй промывки абсолютным спиртом кристаллы промывают эфиром и вь сушивают е вакууме., Получают кристаллический бычий натриевый инсулин со следующей жарактеристикой:активностъ -25,8 ед./мг азот - 15,82%; 8,О%; uBeTHquj индекс. - О,О05 для 1%-ного раствора при 34О ммкм, ,. Йорцию сухого натриевого инсулина в количестве 8,98 г растворяют в 990 мл свободной -от пирогена воды,. содержащей 2,27 г фенола и 1J5 мл 1О%-ной НСб . Затем с помошью 1,7 мл 10%чногоКаОН доводят до 7,4, Испытания показали, что активность инсулина 1О1,3 ед./мл. Этот раствор подвергают стерильной фильтрации и разливают в флаконы по 1 мл, высушйва ют при температуре ниже в асептичеок;их условиях и получают б каждом флаконе сухой, натриевый инсулин, который и сохраняется в таком виде до испытаний.

Данные таблицы показывают, что даже после хранения комплекса, суспендированного в изотоническом разбавителе, при 25°С сохраняется активность инсулина: он действует быстро и длительно.

П р и м е р 3. Образование и применение коктлекса протамина с аммонийным, литиевым и калиевым инсулином, а также натриевым инсулином примера 1.

Каждую из этих, инсулиновых солей получают по методике примера 1, смешивают с изотоническим раствором, содержащим 0,4 мг протам н-сульфата/мл, и впрыо-; кивают так, как о;шсано в примере 1, 18 KpoTi KaM.

Результаты приведены в табл.5. в каждый флакон добавляют изотоничеокий разоавитель в тшсом количестве, чтобы жидкая среда содержала 1О1,3 ед. и сулина /МП. Этот изотонический разбавитель-содержит0,4 мг протамин-сульфата/ /мл, 1,6% глицерина и О,25 вес.% фенола, рН изотонического раствора 7,4. После добавления1изотонического раствора к су хому натриевомуИ юулину происходит мгновенное образование комплекса протами -на1 риевый ишзулин. комплекс находится в флаконе в виде тонко р«юпределенного осадка. Осадок остается достаточно равномерно суспендированным в водном разбавителе, так что при взятий инъекционным шприцем каждь й раз отбирают одинаковое количество инсулина. П р и м е р 2. Нейтральный комплекс ригЬтавливают .аналогично 1 за исключением того, что изотонический разбавитель содержит 1,2 мг протамина/мл. Каждое испытание проводят над 9 кроликами. Между испытаниями комплекс, суспендированный в изотоническом разбавителе, хранится при 25°С. Кроликам впрыскивают по 0,01 мл инсулинового продукта. Результаты приведены в табл.. 4. Таблица4

9 Натриевый инсулин действует длительнба другие же составы вызывают значительное снижение содержания сахара в крови. П р и м е .р 4. Стабильность комплекса протамин-натриевый инсулин. Комплекс приготавливают аналоАчно примеру 1, применяя 0,4 мг/мл протамин-сульфата в изотоническом разбавителе. После приготовления комплекс помеишют в проби{ ки центрифуги, центрифугирз ют- и выделившуюся жидкость декантируют. Отделенный осадок промывают 15 мл абсолютного спирта и затем 15 мл абсолютного эфира. lipoКаждый из выс/шенных инсулиновых составов растворяют и инъецируют, что выаы- . вает значительное снижение содержания , сахара в крови..

S08162

10 Таблицаб

Формула изобретения Способ получения препарата инсулина путем смешивания соли инсулина с протамин-сульфатом, отличаюшийся мь7тый осадок зйтем высушивают в вакууме при комнатной температуре. Высушенный материал снова суспенд1фу- ют в нейтральном разбавителе, не содержащем протамин.-сульфата, СуспенАрованный материал анализируют на активность. Активность 88-95 ед./мл, что показывает легкую потерю инсулина при промывке перед сушкой. Испытания проводят на 9 кроликах. Данные приведены в табл. 6. Испытания с высушенным при низкой температуре материалом проводят с материалом, снова суспендированным в воде и затем высушенным при низкой температуре. Таблица 6

,.508162

TeM.nqrok с аелыо повышения быстроты нкаждые ОО ед. инсулина 0,2-1,5 мг продлнтельности действия вешествд, смешивают тамина и растворяют в воде при рН 6,5натриевую соль инсулина в соотношении на8,0.

SU 508 162 A3

Авторы

Ричард Ли Джексон

Даты

1976-03-25Публикация

1972-04-26Подача