танавливают рН 6,5-7,0 и снова центрифугируют. Получают 17,8 мл раствора с удельной активностью 180 МЕ/мг белка.
Аналогичным образом проводят вторую кристаллизацию. Получают 9,7 мл раствора L-аСпарагиназы с удельной активностью 185 МЕ/мг белка. После третьей кристаллизации получают 2,64 мл раствора с удельной активностью 200 МЕ/мг белка.
Проводят испытание на пирогенность. Принятая тест-доза равняется lOUO ME на кг веса кролика.
Раствор L-аспарагиназы, полученный растворителем кристаллического вещества в воде, разводят до концентрации 1000 МЕ/мл, вносят в качестве стабилизатора глицин в количестве 18,9 мг/мл, отфильтровывают через мембранный фильтр и лиофилизируют.
Результаты испытания на пирогенность представлены в табл. 1.
Таблица 1
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| ПРЕПАРАТЫ ПОЛИАЛКИЛЕНОКСИД-АСПАРАГИНАЗЫ И СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЕ | 2017 |
|
RU2758796C2 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СУБСТАНЦИИ РЕКОМБИНАНТНОЙ L-АСПАРАГИНАЗЫ ERWINIA CAROTOVORA | 2010 |
|
RU2441914C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЛЬФА-1-АНТИТРИПСИНА И ПРОДУКТ ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В МЕДИЦИНЕ | 2004 |
|
RU2268736C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОНЦЕНТРАТА VIII ФАКТОРА СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА И ПРОДУКТ ЕГО СОДЕРЖАЩИЙ | 2007 |
|
RU2326689C1 |
| Способ выделения -аспарагиназы | 1975 |
|
SU543671A1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИАЛУРОНИДАЗЫ | 1992 |
|
RU2027759C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО СРЕДСТВА | 1993 |
|
RU2082430C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ С1-ЭСТЕРАЗНОГО ИНГИБИТОРА ЧЕЛОВЕКА И ПРОДУКТ ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В МЕДИЦИНЕ | 2004 |
|
RU2256464C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНА ЧЕЛОВЕКА АНТИСТАФИЛОКОККОВОГО ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ | 1996 |
|
RU2141341C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИТИМОЦИТАРНОГО ГЛОБУЛИНА ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ | 2004 |
|
RU2264826C1 |
Пример 2. 20 г лиофилизированного сырца L-аспарагиназы с удельной активностью 50 МЕ/мг белка растворяют в 230 мл апнрогенной воды, подкисляют до рН 5,2-5,4, охлаждают и фракционируют раствором ПЭГ молекулярного веса 1500 как указано в примере 1. Осадок, выпадающий при концентрации ПЭГ 5-10%, растворяют и центрифугируют. Получают 173 мл раствора с удельной активностью 120 МЕ/мг белка. Проводят последовательно первую, вторую и третью кристаллизации аналогично примеру 1, с той разПример 3. 20 г лиофилизированного сырца L-аспарагиназы с удельной активностью 82 МЕ/мг белка растворяют в 230 мл воды и фракционируют водным раствором ПЭГ молекулярного веса 1500 аналогично примеру 1. Осадок, выпадающий при концентрации ПЭГ 5-10%, растворяют и центрифугируют. Получают 197 мл раствора с удельной активностью 170 МЕ/мг белка. Кристаллизацию проводят как в примере 1, с той разницей, что вносят
ницей, что вносят каждый раз 50%-ный раствор ПЭГ молекулярного веса 6000 до 1%, а изопропиловый спирт - до 10%. После первой кристаллизации получают
86 мл раствора с удельной активностью 177 МЕ/мг белКа. После второй кристаллизации получают 4,2 мл раствора с удельной активностью 200 МЕ/мг белка, после третьей кристаллизации раствор имеет удельную активность 205 МЕ/мг белка.
Результаты испытания на пирогенность представлены в табл. 2.
Т а б л и ц, а 2
каждый раз 50%-ный раствор ПЭГ молекулярного веса 6000 до 1,5%, изопропиловый спирт до 15%. После первой кристаллизации получают 93 мл раствора с удельной активностью 180 МЕ/мг белка. После второй кристаллизации препарат имеет удельную активность 170 МЕ/мг белка, после третьей кристаллизации - 180 МЕ/мг.
Результаты испытания на пирогенность представлены в табл. 3.
Пример 4. 20 г лиофилизированного сырца L-аспарагиназы с удельной активностью ПО МЕ/мг белка растворяют в 230 мл воды и фракционируют водным раствором ПЭГ молекулярного веса 1500 аналогично цримеру 1.
Осадок, выпадающий при кондентрации ПЭГ 5-10% растворяют, нерастворИ|Мую часть отделяют центрифугированием. Получают 175 мл раствора с удельной активностью 200 МЕ/мг белка. Проводят три последовательные кристаллизации как в примере 1, с
Таблица 3
той разницей, что вносят каждый раз 50%-ный раствор ПЭГ молекулярного веса 6000 до 2,2%, изонропиловый спирт - до 10%, а кристаллический осадок первой, второй н третьей кристаллизации дважды промывают двойным объемом ацетона и высушивают до постоянного веса в вакуум-сушильном шкафу при температуре 40°С и остаточном давлении 30- 40 MiM рт. ст.
Результаты испытания на пирогенность представлены в табл. 4.
Таблица 4
