Способ получения полисахарида Советский патент 1977 года по МПК C12D13/04 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИСАХАРИДА веществ на основании полученных онытных данных. Пример I. 3000 л раствора мелассы, разбавленного водой (содержание редуцирующих веществ после гидролиза 5%), вносят в ферментер с мешалкой объемом 5000 л. Ферментер стерилизуют обычным способом. Затем в него добавляют 300 л посевной культуры после 18-часового выращивания. Посевная культура состоит из раствора минеральных солей (рН 7-8) и содержит 1% крахмала и 0,5% дрожжевого автолизата. После 18-часового выращивания число бактерий в посевной культуре составляет 3,6Х XIО клеток/мл. После 10-часового выращивания основной культуры ири интенсивной аэрации отбирают первую пробу, оиределяют количество бактерий и сравнивают его с количеством, указанным на стандартной кривой (см. чертеж). Отбор проб повторяют через каждые 3 час. После 25-часового культивирования количество бактерий в основной культуре понил :ается по сравнению с количеством, указанным на стандартной кривой. В стерильных условиях добавляют 10 л 15%-ного раствора дрожжевого автолизата. Результаты опыта пзобрал :ены графически на чертеже, где Л - стандартная кривая роста, Б - кривая роста основной культуры. Пример 2. Построение стандартной кривой. Состав оптимального питательного раствора (г): Сахароза30,00 Дрожжевой автолизат2,00 NaNOs2,00 КН2РО41,00 FeS040,01 Водопроводная вода1,00 (л) В 50 мл стерильной питательной среды (рП 7,5) добавляют 1 л посевной культуры, которая содержит около 2X10° бактерий/мл. Выращивают в колбе на 200 мл на качалке. Через 4 час после засева и далее 2 час отбирают пробы по 0,5 мл и под микроскопом определяют количество бактерий. После достижения максимального количества бактерий ферментацию прекращают. По полученным данным строят кривую роста Л, служащую стандартом. Для синтеза используют посевную культуру, содержащую 2,00% мелассы и 0,15% дрожл евого экстракта, и основную культуру- 6,5% мелассы. В стерильный питательный раствор (рН 7,5±0,5) добавляют посевную культуру после 24-часового выращивания и выращивают при перемешивании и пропускании воздуха в количестве 1 л на 1 литр раствора в 1 мин. После 8-часового выращивания отбирают первую пробу и определяют количество бактерий. Время отбора последующих проб и полученные результаты даны в таблице По сравнению со стандартом количество бактерий и норма прироста понижаются. Добавляют стерильный водный раствор дрожжевого экстракта с таким расчетом, чтобы содержание экстракта в главном ферментере составляло 0,05% (по сухому весу). Сразу после этого начинается повышенный рост бактерий. Стандартной величины достигают через 8 час. После 38-часовой ферментации основной культуры пробы больше не отбирают. После 68-часовой ферментации основной культуры сиитез полисахарида окончен. Синтезировано 2,5% полисахарида, выход неуиравляемой ферментации - 1,75/полнсахарида. Вместо определения числа бактерий можно определять другие факторы, связанные и не связанные иепосредственпо с числом бактерий, такие как, например, субстрат, образующийся СО, потребленный кислород, повышение вязкости и др. Формула изобретения Способ получения полисахарида путем выращивания бактерий Xanthomonas campestris в условиях аэрации в среде, содержащей в качестве источника углерода углеводы или продукты, содержащие углеводы и другие необходимые питательные вещества, с последующим выделением полисахарида известным способом, отличающийся тем, что, с целью более эффективного использования необходимых для роста бактерий веществ и регулирования их добавления в питательную среду, содержание углеводов в среде поддерживают равным 0,02-6,00%, преимущественно 0,5-2,0%, в качестве ростовых веществ используют дрожжевой автолизат в оптимальной для роста и образования полисахарида концентрации, препмущественно 0,3% (по сухому весу), количество аэрирующего воздуха устанавливают, преимущественно, равным 1 л на 1 л среды в минуту, при этом в процессе выращивания строят кривую роста и при помощи этой кривой определяют полученные нормы прироста и количества бактерий (или связанные с ними факторы, как, например, образование СО) в основной культуре в промежутках времени, например, через 3 час, и в случае пониженных по сравненпю со стандартом значений основной культуры дополнительно вводят раствор ростовых веществ с таким расчетом, чтобы его концентрация в основной культуре составляла менее 1%, преимущественно менее 0,25%.

исло ймгпе pUU/f,J

-72tnlUlU 1

:J 8 7 и

- 3

2

-1 I г тi1111i113

4- 8 12 IB 20 28 52. ЗВ W f 48 ЗренЯ,

vac