Устройство для получения градиентного полиакриламидного геля Советский патент 1977 года по МПК G01N27/26 

ЩаеМых приводом через механические устройства 5, 6 кулачкового типа. Рабочие объемы цилиндров 1, 2 через выведенные наружу резиновые трубочки-петли 7 и 8 соединены с камерой смешения 9. Дозатор-распределитель выполнен в виде тефлоновой пробки 10 с каналом, выход которого соединен со стеклянной трубочкой И, сужающейся на конце. На диске 12 под углом 40° закреплены полоски резины 13 с фитиляМи 14 из ленточек фильтровальной бумаги. Вращение механических устройств 5 и 6, а также тефлоновой пробки 10 (дозатора-распределителя осуществляется от редуктора и гистерезионого трехфазного двигателя. Электрическая схема устройства обеспечивает кнопочное управление основными операциями и сигнальными лампочками, информирующими оператора о характере работы прибора.

Работает устройство следующим образом.

Порщни 3 и 4 находятся в верхнем положении (рабочие объемы цилиндров максимальны). Исходные растворы акриламида во избежание преждевременной полимеризации приготовляют непосредственно перед заполнением цилиндров. Заполняют цилиндры с помощью 20-миллилитрового щприца, начиная с цилиндра 1, ниэкоконцентрированным раствором а-криламида через имеющукуся в порщне 3 трубочку (на чертеже не показана), предназначенную для жидкости. Через другую трубочку в поршне 3 (на чертеже не показана) из цилиндра 1 выводится воздух. Далее вытесняется воздух из летли 7 и камеры смешения 9. Цилиндр 2 заполняют раствором высокой -концентрации таким же образом, как и цилиндр 1.

После вытеснения воздуха из петли 8 цилиндра 2 и низкоконцентрированного раствора из камеры смещения 9 О1сун1,ествляется смачивание всех десяти фитилей высококонцентрированным раствором акриламида через трубочку 11.

На неподвижный стол устанавливают круговой щтатив 15 с электрофоретичеокими трубочками 16, фитили 14 вставляют внутрь трубочек, включается электродвигатель. Растворы акриламида из цилиндров 1 и 2 вьь жимаются порщнями через петли 7 и 8 в камеру смещения 9, где они перемещиваюкя за счет вращения пробки 10. Смешанная жидкость проходит через трубочку 11. В процессе враи1,ения на ее копце образуется капля диаметром около 1,5 мм. При контакте с очередным фитилем капля снимается. Л(.идкость тонкой пленкой стекает по фитилям 14, затем по внутренним стенкам трубочек 16 и наслаивается на поверхность слитой ранее жидкости. Наслаивание начинается с раствора .ма кснмальной концентрации и заверщается раствором минимальной концентрации Распределение акриламида по длине трубочек линейно (постоянный градиент).

Для повыщения точности распределения

раствора акриламида между электрофоретйческИМИ трубочками 16 сужающийся конец трубочки 11 обрабатывают гидрофобным веществом, например парафином. Той же цели

5-.cnoico6ствует смазка внутренних поверхностей цилиндров 1 и 2 и трущейся поверхности 10 силиконовым маслом.

Во избежание перемешивания раствора акриламида в трубочках о;бщий цикл заполнения их проводят в течение 20 мин, при этом скорость вращения пробки 10 составляет 1 об/4 сек.

Для предотвращения полимеризации растворой акриламида в устройстве после окончания разлива внутренние объемы смесителя и трубочки 11 промывают водой.

Эффективность изобретения состоит в получении столбиков геля с постоянным гради„ ентом одновременно в десяти стандартных электрофоретических трубочках, приготовление которого, например, вручную, невозможно. Программированное перемещение порщней, обеспечивающее принздительный и строго постоянный от опыта к опыту характер смещения исходных растворов в предлагаемом устройстве гарантирует, как показали проведенные испытания, стандартность закона распределения концентрации акриламида

Q по высоте геля, независимо от вязкости, концентрации и температуры растворов, что, в конечном итоге обеспечивает высокую воспроИ зводимость олределения молекулярного веса и геометрических размеров молекул белковых фракций от их относительного пробега в «градиентном, геле. Кроме того, использование градиентного геля расщиряет сферу применения электрофоретического метода: позволяет проводить изучение законов элект0 рофоретической подвижности белковых молекул в геле с меняющейся стрзтетурой молекулярных сит. Это особенно существенно при изучении физико-химических свойств новых белковых веществ методом электрофореза.

5 Автоматическая работа устройства и исключение благодаря этому ощибок оператора делают прибор удо;бныМ в работе при достаточно высокой производительности (60-80 заполненных трубочек за рабочий день). Прибор может найти практическое применение в работе бпохимических лабораторий.

Ф о ) м у л а изобретения

5 Устройство для получения градиентного полиакриламидного геля, содержащее смеситель в виде блока двух цилиндров с поршнями, камерой смешения, мешалкой и приводом и имеющее выводной канал, отличающе0 ее я тем, что, с целью заполнения множества электрофоретических трубочек смесью с одинаковым линейным распределением концентрации акриламида по их высоте, устройство снабжено дозатором-распределителем, распо5 ложенны.м симметрично под центральной ча