Способ диагностики мастита Советский патент 1989 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к медицине, в частности к хирургии, и может быть использовано для диагностики мастита.

Целью изобретения является увеличение точности способа и ранняя диагностика.

Способ осуществляют следующим образом.

Пробу молока в объеме 0,02-0,04 мл с каплей 0,01%-ного водного раствора метилового зеленого наносят на верхнюю поверхность предварительно лод- готовленного столбика полиакриламид- ного геля и в течение 3 ч при силе тока 2,0 мА на трубку осуществляют злектрофоретическое разделение белков

в кислом растворе до достижения метиловым зеленым финишной зоны геля. После извлечения геля из трубочек их -окрашивают раствором красителя амидо- черного 10 В в течение 30-40 мин. а затем отмывают несвязавшийся краситель, визуально оценивают спектр кислоторастворимых белков и измеряют длину пробега отдельных белковых фракций. При появлении на электрофо- реграммах катодной полосы с Е 0,47-0,49 по отношению к метиловому 1- леному диагностируют раннюю стадию мастита.

Пример 1. Пробу молока здоровой родильницы в объеме 0,02 мл

„ii.

вместе с каплей 0,01%-ного водного красителя метилового зеленого наносят на верхнюю поверхность предварительно подготовленного столбика полиакрил- амидного геля, находившегося в стеклянной трубочке размером 0,5 х 10 см. Подготовку полиакриламидного геля и процедуру электрофореза осуществляют по прописи Паниям и Чолкли. Полиакрил амидный геЛь готовят путем смешивания 3 растворов: раствор А: 60% акриламид (W/V); 0,4% метиленбисакриамид (W/V) в H-jO; раствор В: 43,2% уксусная кислота (V/V); 4% тетраметилэтилендиамин (V/V) в HjO; раствор С: IOM раствор мочевины.

Все растворы можно готовить загодя И хранить на холоде (+4°С) в teмнoй стеклянной посуде с притертой крышкой в течение 2-4 недель. Непосредственно перед анализом растворы сливают в следующем соотношении А:В.С 2:1:5. Далее к смеси добавляют катализатор полимеризации - персульфат аммония (40 мг на 32 мл смеси; 50 мг на 40 мл смеси). Смесь с катализатором тщательно перемешивают и разливают с помощью пипетки или шприца в стеклянные трубочки на высоту 9 см, а затем наслаивают на смесь дистиллированную воду. В течение 60-90 мин происходит полимеризация геля в трубочках. После окончания полимеризации, устанавливаемой по формированию четкой гра- ницы между гелем и водой и явлению синерезиса геля, выжидают 1 ч и переносят трубочки с гелем в аппарат для электрофоретического разделения (можно использовать отечественный аппарат марки ПЭФ-1 или венгерский аппарат фирмы Reanal модель-69). В верхнюю (анодную) и нижнюю (катодную) камеры заливают по 0,5 л 0,9 н. раствора уксусной кислоты в воде (буфер), при силе тока 2-3 мА на трубку осуществляют процедуру преэлектрофореза, в процессе которой удаляют из геля компоненты, мешающие лроведениш аналитического электрофореза. После оконча- НИН проэлектрофореза буфер в верхней и нижней камерах заменяют свежим. Преэлектрофорез проводят в течение 5-16 ч до постоянных значений тока и напряжения. Можно гели с полиакрил- амидным гелем подготавливать за 12 ч до проведения аналитического электрофореза. Пробы анализируемого молока с каплей 0,01%-ного водного раствора

метилового зеленого наносят на верхнюю поверхность геля. Они являются достаточно плотными, поэтому быстрой диффузии белков в кислый раствор для электрофореза не наблюдается. Электрофорез ведут при постоянной силе тока 2,0 мА на трубку в течение 3 ч. По окончании электрофореза, фиксируемого по достижении индикаторным красителем метиловым зеленым - нижней финишной части столбика геля. Гели извлекают из трубочек традиционным способом и окрашивают в течение 30 мин 0,1%-ным раствором амидочерного 10 В, растворенного в 20%-ном этаноле, 7%-ной уксусной кислоте, остальное . После окрашивания гели отмывают от несвязавшегося красителя, либо электрофо- ретически, либо путем смены раствора 0,9 н, уксусной кислоты. Спектр кис- лоторастворимых белков молока можно условно разделить на две зоны. В первой верхней зоне представлено 5 основных белковых фракций. Вторая зона в средней части геля представлена одинарной катодной полосой с Кл 0,37- 0,38. Rr определяют как отношение длины пробега данной белковой полосы к длине пробега метилового зеленого, т.е. к общей длине геля. Диапазон значений Rr обусловлен тем, что белковая полоса после прокрашивания имеет определенную толщину, а потому определение длины пробега ее в геле можно осуществлять как по переднему, так и

по заднему фронту полосы.

I.Пример 2. Проба молока в

объеме 0,02 мл, взятая у родильницы, у которой клинически диагностирован лактостаз, подвергается электрофоре- тическому анализу так же, как в примере 1. В спектре кислоторастворимьк белков молока этой пациентки выявлена дополнительная катодная полоса с Rf 0,47-0,49. Следовательно у больной имеет место начальный этап воспаления в молочной железе при отсутствии его клинического проявления. Диагноз подтвержден клиническими наблюдениями в течение последующих семи дней.

Пример 3. Проба молока в объеме 0,02 мл, взятая у родильницы, у которой клинически диагностирован лак тостаэ, подвергается электрофоретичес кому анализу так же, как в примере 1. В спектре кислоторастворимых белков молока этой пациентки изменений по

51

сравнению с нормой не обнаружено. Диагноз - лактостаз (застой молока), который подтвержден последующ} Ми клиническими наблюдениями.

С помощью предлагаемого способа возможно однозначно диагностировать начальную стадию развивающегося мастита в тех случаях, когда известные биохимические и физические способы не позволяют этого осуществить, а также дифференцировать воспаление от лактостаза. Точность способа - 97%, что на 16% выше, чем сцособа- прототипа.

Формула изобретения

Способ диагностики мастита путем биохимического исследования молока, отличающийся тем, что, с целью увеличения точности способа и ранней диагностики, производят электрофоретическое разделение белков молока 0,9 н. уксусной кислотой в 15Х- ном полиакриламидном геле и при появлении в злектрофореграмме катодной полосы с Ilr 0,47-0,49 по отношению к метиловому зеленому диагностируют мастит.

Изобретение относится к медицине, в частности к хирургии, и может быть использовано для диагностики мастита. Целью изобретения является увеличение точности и ранняя диагностика. Для этого пробу грудного молока обследуемой в объеме 0,20-0,04 мл с каплей 0,01%-ного водного раствора метиленового зеленого наносят на верхнюю поверхность столбика из 15%-ного полиакриламидного геля и подвергают электрофоретическому разделению в 0,9 н. уксусной кислоте в течение 3 ч. После окраски геля красителем амидочерным 10В визуально оценивают спектр кислоторастворимых белков молока и измеряют длину пробега отдельных белковых франкций. При появлении на электрофореграмме катодной полосы с R_F=0,47-0,49 по отношению к метиловому зеленому диагностируют раннюю стадию мастита. Способ относительно несложен, позволяет достоверно различать мастит и лактостаз на доклинической стадии. Точность способа составляет 97%.