Способ диспергирования тканей животных Советский патент 1977 года по МПК G01N33/16 

1

Изобретение относится к биопогичесвим исследованиям и касается способа диспергирова1щя тканей животных.

Известен способ диспергирования тканей животных путем механического растирания образца пестиком гомогенизатора и подсчета полученных целых клеток Ll.

Однако .известный способ не обеспечивает точного определения силы сцепления между клетками в ткани, так как не регулируется усилие разрушения ткани.

С целью обеспечения точного определения силы сцепления между клетками в .ткани по предлагаемому способу тканевый образец фиксированным усилием продавливают через отверстие (или ряд отверстий) диаметром, не превышающим размер образца, но большим размера единичной клетки, и подсчитывают число выделившихся клеток.

Способ осуществляют следующим образом.

Сначала животное декапитируют, брюш50ю полость вскрывают, печень in situ отмывают от крови через/, pontq . Центральную долю печени извлекают, укладывают на

парафиновую подложку и цилиндрическим рез цом вырезают образцы массой 5tO,5 мг.

Образец ткани помещают в цилиндр щприца, на; носик которого насаживают камеру с калиброванным отверстием, затем цилиндр заполняют изотонической жидкостью в объеме li 0,1 мг. Диспергирование проводят путем перемещения поршня шприца с постоянной скоростью специальным устройством.

При этом жидкость, проходя через камеру, заклинивает отверстие тканью и продавливает его в приемникт-стаканпик или пробир- ку. Усилие процавливання регистрируют записыьающим устройством, что позволяет получить количественную оценку прочности испытуемого образца ткани.

Полученную в приемнике суспензию разбавляют изотонзвческой жидкостью и просчитывают счетчиком микрочастиц количество цепых и разрушенных клеток. Такую операцию проводят с образцом ткани, не подвергавшейся какому-либо воздействию (контрольный опыт) и подвергнутой обработке, например, путем введения биологически активного вещества. На основании полученных данных (количества выделившихся целых клеток при одной и той. же нагрузке) делают заключение об эффективности обработки.

П р н м.е р , Лля испытания берут образцы ткани (печень крыс), подвергнутые инкубации э бескальциевой изотонической среде , ослабляюшей клеточные контакты ткани, для чего в раствор Хэнкса добавляют этилендиаминтетрауксус1юй кислоты (ЭДТА) для СБЯзывания Са и контрольные образцы, по(вергавшиеся инкубации в растворе Хэнкса без добавления . Для каждого опыта берут по 5 образцов. Инкубацию проводят в течеше 1 ч, при 360С. После чего каждый образец ткани продавливают через калиброванное отверстие специального устройства, оатем полученную суспензию помещают в целлоскоп, где определяют число выделившихся целых клеток (см. табл.).

Величина, ошибки в предлагаемом способе

12-14%, а в известном 40-100%.

Предлагаемый способ позволяет проводить испытание химических соединений по их действию на межклеточные контакты и может s быть использован для испытания новых химических соеднне шй на биологическую активность и отбора этих соединений перспективных в качестве противоопухлевых препаратов.. -30 Формула изобретен и я Способ диспергирования тканей путем механического разрушения образца, о т20

л. ю щ и и с я тем, что, с депью. точного определения силы сцепления между клетками в ткани, тканевый образец фиксированным усилием продавливают через отверстие (или рад отверстий) диаметром, не превышающим размер образца, но большим размера единичной клетки, и подсчитывают число выделившихся клеток.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. Цитология 1968, 1О, 9.1081.