Способ определения силы адгезии клеток Советский патент 1978 года по МПК G01N19/04 

(54) СПСЮОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СИЛЫ АДГЕЗИИ КЛЕТОК

Изобретение относится к области биологии и медицины и может быть использовано для изучения адгезии клеток в тканевых системах. Известен способ определения силы адгезии клеток путем фиксации клеток с последующим их отрывом под действием центробежной силы и вычисления величины силы адгезии по числу отделившихся клеток 1. Однако известным способом невозможно определить силу адгезии клеток в животной гкани. Цель изобретения - определение силы адгезии в животной ткани при минимальной степени повреждения клеток. Эта цель достигается тем, что образец ткани фиксируют на плоскости, помещают ее в центр объема с изотонической жидкостью параллельно оси вращения и приводят во вращательное движение одновременно плоскость с образцом и сосуд с изотонической жидкостью. Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. Образец ткани, выделенный из животного, фиксируют на плоскости и цо.мещают в центр объема с изотонической жидкостью, носле чего всю систему одновременно (или неподвижно закрепленный на плоскости об)азец) приводят во вращательное движение. Вращение всей системы (пли образца) осущестп,1яют с помощью электродвигателя. При эгом варианты закрепления образца на n;iocкости могут быть различны в зависимости от его геометрии. Например, цилиндрическим стержнем можно закрепить тонкую кишку, толстую кишку и,1и пищевод. Адгезию оценивают по абсолютной и относительной ве,лпчина 1 адгезии. .Абсолютная величина адгезии численно ptinна тому усилию (F 1. при котором к.петки TO,ihKO начинают выделиться из ткащччо системы. Относительную величину адгезии можно оце нивать по чис,1у клеток, выдс.тяющихся при фиксированном усилии; F const. Число клеток Б суспензии можно оценивать, напри.мер с помощью камеры Горяева. Способ обладает высокой чувствительностью. Ошибка измерений составляет 5-15%. Предлагаемый способ- позволяет производить отрыв клеток от ткани в очень мягких условиях, при минимальной степени повреждения самих клеток. Изобретение поясняется с.имующи.ми примерами. Пример 1. Оценка величины адгезии клеток тонкой кишки крыс. Для опыта берут белых беспородных крыссамцов весом 120-150г. Вскрывают брюшную полость, выворачивают участок тонкой кип1ки длиной 1 см и фиксируют этот участок на цилиндрическО М стержне, погруженном в стаканчик с изотоническим раствором. Цилиндрический стержень вместе со стаканчиком и раствором приводят во вращательное движение в течение определенного времени и затем подсчитывают число клеток, выделившихся в раствор при данном усилии с помощью микроскопа. Клетки начинают выделяться при усилии, равном 0,1 10 дин/см. Эта величина почти в 5 раз .меньше средней величины сцепленности для паренхиматозных клеток нечени крыс. Так как величина сцепленности клеток тонкой кишки неодинакова по высоте кишечных складок, и первыми должны выделяться слущивающиеся клетки, полученные результаты полностью согласуются с имеющимися представлениями о природе сил адгезии. Пример 2. Влияние рН на адгезию клеток тонкой кишки крыс. Образцы тонкой кишки, приготовленные аналогичным образом, подвергают предварительной одно.ЧШнутной инкубации в изотонической среде с различны.ми рН. Затем производят отрыв клеток способом, указанным Б примере 1, при фиксированно.м усилии. Результаты проведенного эксперимента сведены в табл. 1. 1аблица 1 №№ 4iicjTO выделивши.хся клеток при рН 3IТА

Ко.1ичество клеток, выделивщихся после )

в среде, содержащей кальций

20 23 21

О

30

60

В таблицу занесены значения количества клеток, найденных по всей площади камеры Горяева.

Ошибка метода не превышает 10%. Полученные результаты показывают, что. ЭДТА ослабляет адгезию клеток друг с друго.м. Предлагаемый сгюсоб.отличается простотой, экономичностью, возможностью быстрого осуществления и болыиой точностью измерения. Он позволяет оценить с.илу адгезии клеток в животных тканях, j; может быть применен в .ieдицинской практике и в области биологии. Способ может быть также использован при

в среде, содержащей ЭДТА

22

45

98

оценке вида оиологическои активности химических соединений.

Формула изобретения

Способ определения силы адгезии клеток фиксации клеток с последующи. их отрыво.м под действие.м центробежной силы и вычисления величины силы адгезии по числу отделивщихся клеток, отличающийся те.м, что, с .целью определения силы адгезии в животной ткани при минимальной степени повреждения клеток-, образец ткани фиксируют на плоскости, помещают ее в центр объема с изотонической В таблицу занесены количества клеток, подсчитанные по всей площади камеры Горяева. Полученные данные показывают высокую чувствительность предлагаемого способа к биогенным факторам. Ошибка метода составляет 5-150/0. Пример 3. Оценка адгезии клеток тонкой кишки крыс. Адгезия клеток в тканях в значительной степени зависит от содержания ионов кальция в межклеточной среде, поэтому для испытания способа был поставлен опыт по исследованию влияния хелатного агента этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) на адгезию клеток тонкой кищки крыс. Известно, что ЭДТА связывает двухвалентные ионы, особенно кальций. Сначала промывают и выворачивают участок тонкой кищки крыс, зате.м делят этот участок на две разные части и помещают первую часть в среду, содержащую ионы кальция, а вторую часть - в среду, содержащую ЭДТА. После инкубации в указанных средах образцы тканей фиксируют в заданном положении на плоскости. Для фиксации, образца применяют тонкий цилиндрический стержень, который вставляют внутрь отрезка тонкой кищки. При этом клетки располагаются на его цилиндрической поверхности. Затем цилиндрическийстержень вместе с образцом приводят во вращательное движение с заданной скоростью внутри объема с неподвижной жидкостью, при это.м с поверхности образца отделяются клетки. Оценку адгезии производят по величине, обратной числу выделивщихся в объем клеток, подсчитывая количество клеток в объе.ме с ru)мощью камеры Горяева. Результаты проведенного эксперимента сведены в табл. 2. Таблица2

55968656

жидкостью параллельно оси вращения и при-Источники информации, принятые во вниводят во вращение или одновременно вращаютмание при экспертизе:

плоскость с образцом и сосуд с изотонической1. Ехрог. Call research, 1960, JV 19, с. 539-

жидкостью.548.