Способ прижизненного отбора свиней -доноров клеток красного костного мозга Советский патент 1977 года по МПК A01K67/00 

1

Изобретение относится к области ветеринарии и может быть использовано для отбора наиболее продуктивных животных-доноров клеток красного костного мозга.

Известен способ прижизненного отбора животных по установлению их генотипа по специфическим показателям - белкам сыворотки крови 1.

Недостатком известного способа является то, что он не обеспечивает отбор свиней - доноров клеток красного костного мозга с повыпленным содержанием названных клеток.

С целью отбора /1аиболее продуктивных свиней-доноров клеток красного костного мозга но предлагаемому способу генотип животных устаиавливают по типам гаптоглобина и к донорам относят животных, имеющих генотип с медлеиными типами гаптоглобина Нр 3-3, Нр 3-2, Нр 3-1 и Нр 3-IF сыворотки крови.

Установленная зависимость между генетически контролируемыми типами гаптоглобинов и выходом клеток красного костного мозга свиней позволяет в течение суток из имеющегося поголовья при жизни отобрать наиболее продуктивных доноров, что способствует увеличению на 29-120% выхода указанных клеток, уменьшает потребпость в животныхдонорах, исключает необходимость убоя низконродуктивных животных и приводит к снижению за счет этого себеетоимости получаемой еуспензии или культуры клеток.

На графике показана линейная зависимость выхода клеток красного костного мозга (при

концентрации 4X10 клеток/мл) от генотипа

животных по гантоглобину сыворотки крови

у 281 подсвинка трехмесячного возраста

крупной белой и муромской пород.

Число животных, обследованных в каждом

генотипе, приведено ниже.

еГнотип0-1 0-3 1-1 1-2 1-3 3-3

48

118

87

Число животных 16

Способ осугцествляют следующим образом.

От животных, иодлел ащих отбору, из хвостовой, ушной или передней полой вей берется 5 мл крови. После ее свертывания сгусток обводится пастеровской петлей или пипеткой,

и пробирка или флакон с свернувшейся кровью помещается в термостат ири 37°С на 1 ч, после чего на 1 ч в холодильник при 4°С. Затем центрифугированием при 3000 об/мин в течение 5 мнн отделяют сыворотку крови, в которой методом электрофореза в 14,5%-ном крахмальном геле определяют тигы гаптоглобинов. Режим электрофореза: 2-2,5У/см, 6ч, крахмал по Смитису, трис-цитратный гельбуфер н боратно-литиевый электролит по Остергофу. После электрофореза гелевая пластинка разрезается на 3 пластинки - фореграммы, которые окрашиваются бензидиновым реактивом 2-3 ч в темноте. Бензидиновый реактив: 2 г бензидина растворяют в дистиллированной воде (1 л) при нагревании до кипения, после чего раствор охлаждают до появления хлопьев и добавляют 5 мл ледяной уксусной кислоты, а перед проявлением фореграмм на гаптоглобины добавляют 2 мл 33%ной нерекиси водорода. После окраски читают полосы проявления типов гаптоглобина (Нр) но скорости их движения в крахмальном геле от анода (-) к катоду ( + ) Самый быстрый тип гаптоглобина - Нр О-О, затем в порядке убывания скорости движения располагаются Нр IF-IF, HP 1 - 1, HP 2-2 и HP 3-3. Носле установления генотипа животного по гаптоглобину отбираются доноры желательного типа, содержащие медленные тины гаптоглобина (Нр 3-3, FIp 3-2, Нр 3- 1 и Нр 3-IF) и их используют для получения клеток красного костного мозга. Средний выход клеток от животных желательного тина с медленными типами гаптоглобина составляет 11,7-14Д л на животное (,001-0,002). От животных нежелательного типа с быстрыми типами гаптоглобина (Нр 0-0, Нр О-1, Нр О-IF, HP 0-2, HP 0-3, HP IF-IF, HP IF-1, HP IF-2, HP 1 - 1, HP 1-2, HP 2-2) получают на 29-120% (от 6,4 до 8,0 л на животное) суспензии клеток меньше (,01-0,05), они выбраковываются и используются для других целей. Для проведения исследований по установлению генетически контролируемых типов гаптоглобннов требуется в обн1,ей сложности 0,5 мл сыворотки крови, срок определения не более 24 ч. Формула изобретения Способ прижизненного отбора свиней-доноров клеток красного, костного мозга по установлению генотипа животных по специфическим белкам крови, отличающийся тем, что, с целью отбора наиболее продуктивных свиней - доноров клеток красного костного мозга, генотип животных устанавливают но типам гаптоглобина и к донорам относят животных, имеющих генотип с медленными тинами гаптоглобина Нр 3-3, Нр 3-2, Нр 3- 1 и Нр 3-IF сыворотки крови. Источники информации, принятые во внимание нрн экспертизе 1. Авторское свидетельство № 330842, кл. А 01К 67/00, 1973.

OSuCf fi-/yfmOf,

1Ч-131271 fij

9 e7 6 54

0-1S-3/-//refJCTTrun гаг7/поелр$и а

7-5

J