Способ отбора животных-доноров клеток красного костного мозга Советский патент 1978 года по МПК A01K67/00 

1

Изобретение отиосится к области животноводства и ветеринарии, в частности к способам отбора сельскохозяйствениых л ивотных, преимуи ествеиио свиией.

Известен способ отбора по специфическим белкам сыворотки крови 1. Этот способ рекомендуется использовать с целью установления истинного происхождения животных, и оп не позволяет производить отбор доноров клеток красного костного мозга с повышенным содержанием таких клеток.

Целью изобретения является разработка способа, нозволяющего делать отбор при жизии наиболее продуктивных свиней-доноров клеток красного костного мозга для увеличеиия выхода указанных клеток на 22- 180%.

Цель достигается тем, что производится установление генотипа животных с учетом сочетания медленных типов гаптоглобина с быстрыми типами амилазы и использование таких животных для получения клеток красного костного мозга свиньи.

Установленная зависимость между генетически контролируемыми типами амилазы и гаптоглобинов и выходом клеток красного костного мозга свиней позволяет в течение суток из имеюш,егося поголовья при жизни животных отобрать наиболее высокопродуктивных доноров, увеличить на 22-180% выход

указанных выше клеток, уменьшить потребность в животных-донорах, исключать из убоя иизконродуктивных по выходу клеток красного костного мозга животных и снизить за счет эгого себестоимость получаемой суспензии или культуры клеток.

В результате анализа выхода клеток красиого костного мозга (при концентрации 4X10 клеток/мл) и генотипа л ивотных по амилазе и гаптоглобину (у 240 иодсвинков трехмесячного возраста крупной белой и муромской пород) Зстановлена линейная зависимость между изученными показателями.

От животных, подлежаи1,нх сортировке, из хвостовой или ушной, НЛП передней полой вены берется 5 мл кровн. После се свертывания сгусток обводится пастеровской петлей или пипеткой, и пробирка со свернувшейся кровью иомекхается на 1 час в термостат при 37°С, затем на 1 час в бытовой холодильник при + 4°С. Цеитрифугированием ири 3000 об/мин в течение 5 минут отделяется сыворотка крови, в которой методом электрофореза в 14,э% крахмальном геле (Смитис, 1955) определяются типы гаптоглобииов и амилазы. Режим электрофореза: 2-2,5 о/см, 6 часов, крахмал по Смитису, трис-цитратный гель - буфер и боратно-литиевый электролит по Остергофу (1963). После электрофореза гелевую пластинку разрезают на 3 части - фореграммы.

Верхнюю и нижнюю фореграммы окрашивают на гаптоглобины в бензидиновом реактиве (2 г бензидина растворяют в 1 л дистиллированной воды ири нагревании до кипения, раствор охлаждают до появления хлопьев и добавляют 5 мл ледяной уксусной кислоты, а перед проявлением гаптоглобинов добавляют

2мл 33% перекиси водорода) в темноте 2-

3часа. Через 2-3 часа читают полосы проявления типов гаптоглобина по скорости движения в геле от анода (-) к катоду ( + ). Самый быстрый тип гаптоглобина (Нр) - Нр О-О, затем в порядке убывания скорости движения Нр IF-IF, Нр 1-1, Нр 2-2 и Нр 3-3.

Средняя фореграмма параллельно с первыми двумя инкубируется в термостате при 37-38,5°С в течение 3, но не более 18 часов, в 0,1М ацетатном буфере, рН 5,7, на проявление амилазы. Носле этого гелевую пластинку помещают иа 1 час в бытовой холодильник при -Ь4°С в охлажденный 15%-ный этанол (этиловый спирт). От этанола фореграмму отмывают теплой водопроводной водой (35- 40°С) и через 15-20 минут в проходящем свете читают полосы типов амилазы по скорости движения в крахмальном геле от анода (-) к катоду ( + ). Самый быстрый тип амилазы (Am) - Am 1-1, затем следуют в порядке убывания скорости: Am 2-2, Am 3-3.

Носле установления генотипа животного по гаптоглобину и амилазе отбираются доноры, содержащие сочетание медленных типов гаптоглобина и быстрых типов амилазы (Нр 3-3/Ат 1-1, Нр 3-3/Ат 1-2, Нр 2-2; Нр 2-3/Ат 1 - 1; Нр 2-3/ Am 1-2, HP 2-3/Am 2-2, Нр 3-I/Am 1-1, HP 3-I/Am 1-2; Нр 3-I/Am 2-2, HP 3-IF/Am 1-1, HP 3-IF/Am 1-2; HP 3-IF/Am 2-2), для получения указанных клеток. Средний объем клеток красного костного мозга от свиней, содержащих сочетание медленных типов гаптоглобинов с быстрыми типами амилазы, составил 10,0-14,0 литров па животное (,01--0,001).

Животные с сочетанием быстрых типов гаптоглобина с медленными типами амилазы (Нр О-0/Ат 2-3, Нр О-0/Ат 3-3, Нр О-IF/Am 2-3, Нр О-IF/Am 3-3, HP IF-IF/Am 2-3, Нр IF-IF/Am 3-3, HP IF-I/Am 2-3, HP IF-I/Am 3-3, HP IF-2/Am 2-3, Hp IF-2/Am 3-3, HP 1 -I/Am 2-3, HP 1-I/Am 3-3; Hp 1-2/ Am 2-3; Hp 1-2/Am 3-3, Hp 2-2/Am 2-3;

HP 2-2/Am 3-3), от которых получают иа 22-180% (от 5,0 до 8,2 литров на животное) клеток меньше (,01-0,002), выбраковываются и используются для других целей. На чертеже приведена зависимость выхода

клеток красного костного мозга от генотипа свиней по гаптоглобииу и амилазе крови. Объем клеток в литрах (4X10 клеток/мл),

Для проведения исследований по установлению генетичности контролируемых типов

амилазы и гаптоглобинов требуется в общей сложности 0,5 мл сыворотки крови свиней, срок определения около 24 час.

Способ рекомендуется для использования в условиях научно-исследовательских учреждеНИИ и хозяйств репродукторов свиней-доноров клеток красного костного мозга.

Формула изобретения

Способ отбора животных-доноров клеток красного костного мозга, преимущественно свиней, включающий установление генотипа животных по специфическим показателям крови, отличающийся тем, что, с целью повыщения эффективности отбора доноров, генотип животных устанавливают по сочетанию быстрых типов амилазы крови Am 1-1, Am 1-2 и Am 2-2 с медленными типами гаптоглобина крови Нр 3-3, Нр 3-2, Нр 3-1, Нр 3-IF.

Источники информации, принятые во внимание при эк:пертизе I. Авторское свидетельство СССР №330842, А 01К 67/00, 1973.

f-2 2-2 2-2 2-2 2-2 2-2 1-2 2-3

3-3 B-i 1-2 0-3 M J-; Ы -t

гапто&лаВино и амилазы cbiSopomffu ffpoSu

9 53 J3б367g5

о5сле а8аннь/х жиВотных соотВетстёующего генотипа..