Способ получения липосом Советский патент 1978 года по МПК A61K35/12 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПОСОМ

фнльные группы X которого направлены внутрь глобул, которые заполнены водной жидкостью; гидрофобные группы У наоборот направлены к внешней части глобул, которая состоит из неводной фазы.

Вторая стадия способа состоит в образовании чистых липосом. Это образование происходит потому, что, проходя через мономолекулярный слой соединения формулы X -У, который находится на поверхности раздела фаз между слоем верхней неводной жидкости и слоем нижней водной жидкости, каждый предшественник липосом (глобула) вовлекает в себЯчасть этого слоя, который объединяется с мономолекулярным слоем соединения Х-У, который его ограничивает, образуя биомолекулярныйслой этого соединения, характеризуюший линосомы.

В качестве соединения формулы Х-У используют, например, соединение, в котором гидрофильная группа X представляет собой фосфатную, карбоксильную, сульфатную, аминную, гидроксильную или холинную группу, а гидрофобная группа У представляет собой насыщенную или ненасыщенную алифатическую углеводородную группу, например алкил или алкилен, алифатическую углеводородную, замещенную по крайней мере одним ароматическим или циклоалифатическим радикалом группу.

Предпочтительно в качестве соединения формулы Х-У используют фосфолипид или вещество, близкое фосфолипидам, а именно лецитин, фосфатидилэтаноламин, лизолецитин, лизофосфатидилэтаноламин, фосфатидилсерин, фосфатидилинозит, сфингамиэлин. кардиолинин, фоефолипоидную кислоту и цереброзид.

В качестве соединения формулы Х-У можно также использовать смесь, по крайней мере одного фосфолипида и по крайней мере одного липида, принадлежащего к друго.му классу, чем фосфолипид, например стеариламин, дицетилфосфат, холестерин и токоферол.

В качестве жидкости, слаборастворимой или нерастворимой в воде с меньшей плотностью, чем у воды используют бензол, галоид- или алкилпроизводные бензола, простой эфир алкиленоксида. алифатический кетон, алифатический альдегид, сложный алифатический 1)ир алифатический углеводород или циклоалифатический углеводород,или смесь нескольких соединений, имеющую плотность ниже, чем у воды.

Предпочтительно использовать в качестве водной жидкости раствор по крайней мере одного биологически активного вещества, а именно энзима, лекарства типа антибиотика.

В качестве второй водной жидкости используют чистую воду или любую другую подходящую водную жидкость.

Предпочтительно используют водный раствор .хлористого натрия. Можно использовать водный раствор хлористого натрия, так называемый физиологический раствор, и.меющий концентрацию 0,15 моля на 1 л (0,9 вес./о) с целью непосредственного получения во время второй стадии сюсоба дисперсии липосом в среде для инъекции в человеческий организм.

Выделить липосомы из второй водной жидкости .можно любым из известных способов, например гель-хро.матографией.

Пример 1. Заключают в капсулы водный раствор амилоглюкозидазы, содержащий 10 мг амилоглюкозы в 1 мл раствора, в водном растворе хлористого натрия концентрации 0,15 моль/л.

Сначала добавляют 54 мг лецитина и 0,1 .мл указанного водного раствора амилоглюкозидозы к 3 мл дибутилового эфира и подвергают полученную таким образом гетерогенную с.месь обработке ультразвуком в течение 2 мин, поддерживая те.мпературу ниже 30° С с помощью охлаждающей бани.

Получают прозрачную голеогенную жидкость, которая имеет синеватый отблеск. Осаждают слой этой жидкости в пробирке для центрифугирования на слой от 1,5 мл водного раствора хлористого натрия концентрации до 0,15 моль/л. Получают двухфазную смесь, состоящую из нижнего слоя водной фазы (раствор хлористого натрия) и верхнего слоя органической фазы, полученной обработкой ультразвуком из смеси дибутилового эфира, лецитина и раствора а.чилоглюкозидозы.

.Подвергают эту двухфазную с.месь центрифугированию со скоростью 30 000 об/мин в течение 30 .мин, после чего выделяют верхний слой (органическая фаза) и подвергают нижний слой (водная фаза) новому центрифугированию со скоростью 30000 об/мин в течение 30 мин. Получают проз) жидкость, слегка окрашенную в син(;| iju-r «Налет незначительного объема, образованную недиспергированным липидо.м (лецитином), который удаляют. Эта прозрачная жидкость представляет собой суспензию липосо.м, и.меющих коллоидные размеры, содержащую в себе водный раствор амилоглюкозидазы в 0,5 М водном растворе хлористого натрия, а также - небольшое количество а.милоглюкозидазы, не заключенной в

капсулы.

В зависимости от при.менения .можно исно.пьзовать эту суспензию как она есть, или после удаления не заключенной в капсулы амилоглюкозидазы, хроматографией на геле (напри.мер с по.мощью геля сефарозы).

Пример 2. Опыт проводят по примеру 1, но используют в качестве раствора, заключае.могр в капсулы, 0,05 .мл водного буферного раствора (фосфатный буфер 10 ммолей рН 7,2), содержащего 100 .мг/мл пенициламина, растворенного в 0,15 мл водного раствора хлористого натрия и используют для образования органической фазы, подвергаемой обработке ультразвуком, 27 мг лецитина и смесь 2,4 мл дибутилового эфира и 0,6 мл .хлорофор.ма.

Пример 3. Опыт проводят по при.меру 1, но используют в качестве раствора, заключаемого в капсулы, 0,1 мл раствора имипрамина концентрации 300 мг/мл в 0,15 М водно.м растворе хлористого натрия и применяют для образования органической фазы, подвергае.мой обработке ультразвуком, смесь 25 мг лецитина и 40 мг холестерина и 3 мл дибутилового эфира.

Пример 4. Опыт проводят по примеру 1, но используют в качестве раствора, заключаемого в капсулы, 0,05 мл раствора динатрийфосфатбента-метазона с концентрацией 150 мг/мл в 0,15 М водном растворе хлористого натрия и применяют для образования органической фазы, подвергаемой обработке ультразвуком, смесь 15 мг лецитина и 12 мг фосфаттидилэтаноламина,и смесь 2,5 мл дибутилового эфира и 0,5 мл хлороформа.

При осуществлении предлагаемого способа становится возможным устранить операции выделения очистки и повторной подгонки концентрации жидкости, заключаемой в капсулы, позволяя тем самым использовать способ в промышленном масштабе.

Формула изобретения

Способ получения липосо.м путем обработки исходного водного раствора ультразвуком в присутствии соединений, имеющих гидрофильную и гидрофобную функциональные группы с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем. что, с целью упрощения технологического процесса, обработку ультразвуком осуществляют и присутсгвии органического гидрофобного растворителя с плотностью, ниже воды, а затем к полученной дисперсии добавляют новую порцию воды и трехфазную систему подвергают центрифугированию.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. J. BiochemistfY Society 2/61, 1974, р 1275.