Способ хранения фитопатогенного гриба Советский патент 1978 года по МПК C12K1/00 

(54) СПОСОБ ХРАНЕНИЯ ФИТОПАТОГЕННОПО ГРИБА VerljciiEium dabEjae KEeb

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и фитопатолгии, в частности, к хранению и культивированию микроорганизмов.

Известны способы культивирования микроорганизмов, например, гриба Asp. oiizat на древесных стружках, экстрагированных раствором соды и залитых tl3 Этрт способ Используется для краткосрочного выращиван.ид. гриба при получении кормового белка. Для длительного хранения гриба необходимы частые пересевы. На обычных питательных tipeдax это сопровожцается изменением морфолого-физиологических признаков микроорганизмов.

Для длительного хранения микроорганизмов без пересевов используют также способ лиофильной сушки 23.

Но этот способ требует сложной аппаратуры, состоящей из вакуумнасосов, холодильных установок и др.

Цель изобретения - сохранение вирулентности гриба Veri. dIahEiaf при длительном хранении без пересевов

Это достигается тем, что в качеств субстрата берут опилки древесины лиственных пород, которые после экстрагирования раствором бикарбоната или карбоната натрия при автоклавировании,

Промывания водой и высушивания, смешивают с сухой картофельной мезгой, увлажняют до 50% средой Чапека, не содержащей источника углерода, инокулируют грибом, выращивают его до стадии мккросклероциев, высушивают до воздушно-сухого состояния и хранят в , лабораторных условиях.

Пример. Опилки древесины ли- ственных пород для удаления смолистых веществ заливают 4%-ным раствором NaHCO, автоклавируют 30 мин, при 1 атм, отмывают водой до нейтральной реакции и высуишвают до воздушно-сухого состояния. Затем сухие опилки смешивают с высушенной картофельной мезгой в количестве 20-40% от общего веса и пропитывсШ)т минеральной средой Чапека 1а«а, 0,3%, КН„РО 0,1%, MgfiO 0,05%; kcE 0,5%) до получения влажности 50-60% (субстрат раствор 1:1). Полученную массу насыпают s пробирки слоем 2-3 см, пробирки закрывают ватными пробками и стерилизуют в автоклаве при 1,2 ати, 45 мин.

Пробирки с субстратом засевают водной -суспензией грибаи инкубируют при 24-26 с, периодически встряхивая. Через семь суток субстрат преобретает черную окраску за счет образования мякросклероциев гриба. Культуру гриба далее просушивают «пибо естественным путем За счет испаремня влаги через ватную пробку, либо при температуре не вьгше . Далее культуру хранят в течение 3,5 лет в лабораторных условиях при комнатной теьшературе и после пересева на агари зованную сраду Чапека проверяют вирулентность daHPiot к хлопчатнику в тепличнь1Х условиях путем- инъекции в стебель конидиальной суспензии гриба плотностью 510 спор/мл. При этом установлено, что полученная куль тура сохраняет исходную вирулентность в то время как культура гриба, хранив шаяся в течение того же срока на агариэованной среде Чапека с пересевами, потеряла полностью вирулентность. Таким образом, способ позволяет длительно хранить гриб без пересевов, что стабилизирует его морфолого-культуральные признаки и вирулентность. Сыпучесть -субстрата позволяет многократно производить отсев в различные сроки, на обычные пит тельные среды из одной и той же пробирки, что дает возможность работать со стандартным материалом. Формула изобретения Способ хранения фитопатогенного гриба VeriiciEEium dahEioe KPeb, включающий его выращивание на субстрате с древесной основой, экстрагированной раствором соды, отличающ и 9 с я тем, что, с целью сохране ния вирулентности гриба при длительном хранении, в качестве субстрата для .выра1;1ивания используют опилки дре весных лиственных пород,, которые после экстрагирования раств9РОм соды при автоклавировании, промывания водой и высушивания смешивают с сухой картофельной мезгой (20-40% от общего веса) , увлажняют до 50% средой Чапека, не ссщержащей;источника углерода, засевают грибом и после выращивания до стадии микррсклероциев и высушивания до вoздsauнo-cyxoгo состояния культуру хранят в лабораторных условиях. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе: 1.Голубчина Р.Н, Особенности посевного материала для глубинной культуры Asp. ofizaS при получении кормового белка . Кормовые белки и биости «1уляторы для животноводства. Изд. АН СССР, М..-Л., 1961, 139. 2.Крохина В.Н. Консервация культуры Бас. лиофильным методом , Прикладная биохимия и микробиология, т. X, вып. 5, с. 753-756, 1974.