Способ диагностики лимфолейкоза крупного рогатого скота Советский патент 1978 года по МПК C12K1/00 A61B10/00 

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способам диагностики лимфолейкоза крупного рогатого скота.

Известен гематологический метод диагностики лимфолейкоза крупного рогатого скота путем исследования изменения состава крови l .

Однако этот метод обеспечивает диагностику лимфолейкоза только на поздних стадиях заболевания. Точный диагноз может быть обеспечен только с использованием дополнительных методов, например биопсии.

.Биопсия лимфоузлов - сложный, трудоемкий и длительный процесс. Для точного диагноза требуется биопсия пораженного узла, который не всегда удается обнаружить.

Массовую диагностику лимфолейкоза животных можно проводить постановкой цитотоксической реакции in v-itro с применением кроличьих иммунных сывороток с определением индекса питотоксическо реакции по количеству дозиро.ванных клеток больного животного 2

В этом методе- применяют сыворотки, взятые через 7 дней после первого цикла иммунизации кроликов экстрактами лейкозных и нормальных тканей больных животных. Однако чувствительность указаннбго метода для диагностики лимфолейкоза крупного рогатого скота невелика: 20-30% иэ-за высокой неспецифичкости сыворотки к антигену, выделенному из лейкозных тканей.

Известен также способ диагностики лимфолейкоза, позволяющий диагностировать болезнь на ранней стадии заболевания. Этот способ основан на обнаружении наличия в плазме крови животных онкорновируса типа С viVus tovinuft ЛБ-21 з .

Такой способ неприемлем для массовой диагностики животных на фермах, так как требует использования сложного лабораторного оборудования и электронномикроскопического исследования.

Цель изобретения - повышение точности диагностирования лимфолейкоза крупного рогатого скота на ранних ста36днях заболевания при массовых обследованиях животных. Для этого по предлагаемому способу диагностику проводят с помошью постановки цитотоксической реакции ш vHtO на кроличьих гипериммунных сыворотках против указанного выше вируса, при это индекс реакции определяют по соотношен лизированных клеток лейкоцитов крови здорового и больного животного и при величине его меньше О,3, считают положительным ответ на лимфолейкоз. На фиг. 1 представлен лейкоцитарный профиль (по оси ординат отложено абсолютное количество лейкоцитов в 1 мм крови, а по оси абсцисс форменные элементы крови, 1-базофилы, 2-эозинофилы 3-нейтрофилы, 4-лимфоциты, 5-моноциты); на фиг, 2 - диаграмма обследования 4-х групп животных с различными интернурентными лимфолейкозу заболеваниями (по оси ординат отложено абсолютное количество лимфоцитов в 1 ммкрови и индекс цитотоксической реакции). Предлагаемый способ отработан на породе Коров Латвийская бурая и закл чается в следующем, Для иммунизации кроликов использую материал, содержащий С Leukemia virus ЛБ-12 из фракции градиента сахарозы с плотностью 1,161,18 г/мл. J . Иммунные сыворотки попучают после 2-3 циклов иммунизации кроликов на 21-30 день. Кормал1гную и иммунную кроличьи сыворотки инактивируют при 56. С в течение 30 мин. .Рабочее разведение иммунной сьторотки отрабатьгеают на лейкоцитах здорового животного до индекса цитотоксической реакции О,3, Лейкоцитарные клетки из цитратной крови получают путем гемолиза эритроцитов в гипертонической среде с пбследующим восстановлением изотоничност раствора. Цитотоксическую реакцию ставят следующим образом. Смешивают равные объемы лейкоцитарной суспензии, содержащей 10 кле ток в 1 мл и иммунной сыворотки в рабочем разведении. После инкубации смес в термостате при 37 С в течение ЗО м добавляют двойной объем комплемента сыворотки крови морской свинки. После по&торного инкубирования в термостате в течение 9О мин смесь центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5 мин. Оса 1 денные клетки окрашивают раствором трипанового синего в разведении 1:2000 . Соотношение живых и мертвых клеток подсчитывают в камере Горяева при общем количестве не менее ЗОО. Параллельно в качестве контроля стаят реакцию с разведенной на физиологическом растворе 10%-ной нормальной сьгоороткой кролика. Индекс цитотоксической реакции вь числяют ао методу Хеллистрема процент живых клеток в кон- . троле; процент живых клеток в опыте. С целью исключения неспецифического проявления реакции при заболеваниях нелейкемического характера, сопровождающихся лейкемоидной реакцией миелоидного типа, были обследованы коровы со следующими заболеваниями; травматический перикардит, послеродовый сепсис, воспаление мозговых оболочек, полиартрит, мастит и др. Все животные были обслецованы гематологически. Указанная на фиг. 1 кривая 1 соот ветствует здоровым животным, кривая 2 профиль форменных элементов белой крови животных с интеркурентными заболеваниями, сопровождающимися лейкемоидной реакцией миелоидногЪ типа, со сдвигом ядра влево до миелоцитов, кривая 3 соответствует животным, больным туберкулезом, кривая 4 - животным, больным лимфолейкозом. На фиг. 2 заштрихованные прямоугольники отображают величину индекса цитотоксической реакции, незаштрихофанные - количество лимфоцитов в 1 мм крови, диаграмма 1 относится к здоровым животным, диграмма 2 - к животным с различными воспалительными процессами, диаграмма 3 - к животным, больным туберкулезом, диаграмма 4 - к животным, больным лейкозом. На диаграмме видно, что у здоровых живо-гных индекс цитотоксической реакции составляет 0,447, у животных с иитеркурентными заболеваниями - 0,406, в группе с лейкемоидной реакцией миелоидного типа - 0,397. У животных, больным лимфолейкозом, индекс цитотоксической реакции составляет 0,154-0,239, Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает точную диагностику лимфолейкоза, позволяет диагностировать болезнь на ранних стадиях, когда гематологическим методом этого сделать нельзя.

Формула изобретения .

Способ диагностики лимфолейкоза крупного рогатого скота, включающий обнаружение в крови животных онкорновируса типа С Leu1 eiTiia tJOVinus ю ЛБ-21, отличающийся тем, что, с целью повышения точности диагноза лимфолейкоза крупного рогатого скота при массовых обследованиях животных, обнаружение указанного вируса проводят ,j с помощью цитотоксической реакции in V( на Кроличьих гипериммунных сыворотках против данного вируса, при этом индекс реакции определяют по соот6184116

ношению лизированных клеток лейкоцитов крови здорового и больного животного и при величине его, равной меньше 0,3, считают положительным ответ на лимфолейкоз.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1,: Лейкозы сельскохозяйственных животных, М., Колос, 1975, с. 82-85

2.Брондз Б. Д. О методиках реакции, агглютинации клеток нормальных и опухолевых тканей и литотоксической реакции in vHtO . Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 1964,

т, 7, N 5, с. 64-69.

3,Заявка 1941520/15 кл. С 12 К 1/ОО, 1974, по KOTOpcrfl принято решение о выдаче авторского свидетельства.

fgOOO

16000 12000 10000

8000

6000 0002000

2

I

«

1 234

Фиг. 2