Способ диагностики лимфолейкоза крупного рогатого скота Советский патент 1983 года по МПК G01N33/48 A61B10/00 

Изобретение относится к ветеринарии, в частнсюти к области циагностики пейкоза сельскохозяйственных животных.

Ивестен гематологический метод циагностики лимфо/1ейкоза К PC путем учета количественных и качественных изменений лейкоцитов крови с использованием известных критериев, так называемых дейкозных ключбй. Значительное увеличение количества лейкоцитов и процент лимфоцитов служит одним из существенн ;признаков лейкоза С13 . Однако данный способ диагностики лейкоза с использованием различных /лейкозных ключей недостаточно эффективен, характеризуется низкой специфичностью. Совпацаемость его положительны результатов на лейкоз не превышает 50 60%. Эти недостатки обусловлены чрезв чайной вариабельностью гематологических показателей при лейкозе: до 75% больных лейкозом животных имеют сублейкемическую картину крови (незначи- тельнОе увеличение количества лейкоцитов); 5-10% - алейкемическую (количество лейкоцитов не увеличено) t23 . Известен способ диагностики лимфолейкоза крупного рогатого скота, включающий обнаружение в крови животных ,онкориа-вируса типа С с помощью цитотоксической реакции in 5 it го на кроличьих гипериммунных сыворотках против данного- вируса. Индекс реакции определяют по соотношению лизированных клеток лейкоцитов крови здорового и больного животного 3 . Однако данный метод требует получения онкориа-вируса в очищенном и кон центрированном виде и гипериммунных сывороток на кроликах, что является сло ной и длительной операцией. Наиболее близким к предлагаемому является спосс б диагностики злокачестве ных новообразований путем облучения об разца плазмы крови ультрафиолетовым светом при с последующей регистра .цией его послесвечения. По кинетике кривых послесвечения судят о наличии злокачественных новообразований у людей 4 1 . Однако известный способ включает дополнительные операции: охлаждение образцаплазмы крови и ультрафиолетовое облучение. Кроме того, постановка диагноза по данному методу основана на анализе лишь одного параметра - кинети

ке кривых послесвечения, что снижает точность постановки диагноза, не устраняет влияние изменения чувствительности

установки, возможных и географических колебаний состава плазмы крови животных.

Известен также способ, основанный на явлении хемилюминисценции сыворотки крови и более низкой интенсивности хемилгоминисценцни сыворотки при лейкозе в инте{вале 20 - 45 С.

Цель изобретения - повышение точнооауются значения t 2, обеспечивающие вероятность ощибки первого рода не более 10% при л 7/5. ти диагностирования лимфолейкоза крупного рогатого скота и расширение диагностических средств. Цель достигается тем, что согласно способу диагностики лимфолейкоза крупного рогатого скота по изменению интенсивности сверхслабого свечения сыворотки крови измерение последнего проводят при любой фиксированной температуре в диапазоне 25 - 73 С. На чертеже представлена температурная зависимость сверхслабого свечения сьшоротки крови животных. Повышение надежности диагностики согласно предлагаемому способу достигается измерением сверхслабого свечения сыворотки крови крупного рогатого скота при фиксированной TeMnepatype из диапазона температур 25-73 С, имеющую наибольшие отклонения, и при отличии интенсивности свечения от среднего свечения контрольной группы заключают о наличии лейкоза. Для этого вычисляется величина выборочной дисперсии (4) контрольной группы по форму.- величина свеченияпри выбранной фиксированной температуре для данного опыта} h - число животных. Отличие считается значимым, если оно о абсолютной величине превышает tS, где величина t выбирается из распределения Стьюдёнта с целью получения ошиби первого рода, не превышающей заданвый уровень значимости. Так как контроль ное и опытное распределения перекрываются, и уменьшение уровня значимости приводит к росту ошибки второго рода, увеличивать беспредельно уровень значимости нельзя. В исследованиях испольВремя исслецования сокращается до 25 мин за счет более быстрого изменения интенсивности сверхслабого свечения всего лишь в одной точке температурной кривой и более быстрого принятия решения. Дальнейшее повышение надежности обеспечивается изменением значений интенсивности при трех фиксировайных значениях температуры из диапазона температур 25-7 3°С и вычислением коэ ьфициента формы кривой К4 по формуле .х -|2/-.2 3 2 п2 2 1 V Тз-.Т/ гдвТ - меньшее из значений температуры;TO - среднее из значений температуры;Та - большее из значений темп.ера, туры; -II 2( значения интенсивностей сверхслабого свечения при этих температурах соответственно. Как установлено экспериментально, оптимальными значениями Т, Т2, Т оказалось 33, 5О и соответственно. Поскольку берутся равноотстоящие друг от друга значения температур, то формула для коэффициента формы кривой дпрошается 50/- ЗЬ б7 При этом если температурная зависимост сверкслабого свечения представляет собой экспоненту, то К 1; большие значения К соответствуют кривым, растущи медленнее экспсиенты, менылие - быстр Решение о заболеваемости лимфолейкозом принимается если ; (K-Kj ± где К - коаффициент формы для животно подозреваемого на лейкоз; К - среднее контрольной совокупнос S - дисперсия контрюльной совокупности;fc 2 . .Для проведения исследования используют сьюоротку крови крупного рогатого скота, полученную стандартным способом к которой добавляется окисленный агент Берут 3 мл сьшоротки, разведенной физи ологическим раствором до со- .держания белка, на которую наслаивают 1 олеиновой кислоты. Сверхслабое свече- ниё регистрируют при помоши известной установки. Объект помещают в термоста тированный бокс. Установка работает в режиме счета фотонов, интенсивность потока выводят на стрелочный и пересчетный приборы, регистрируют на самописце температурную зависимость интенсивности потока фотонов сверхслабого свечения двухслойной системы: сыворот ки крови КРС - олеиновая кислота. Кривые контрольной совокупности об-. рабатьшают следукядим образом. Попучают усредненную кривую температурной зависимости сыворотки крови здоровых животных и границы разброса кривых, среднее и дисперс.ию контрольного распре- . деления для значения интенсивности при 73 С и из значений интенсивности при 33, 50 и вычисляют коэффициент формы кривой. . Для получения параметров контрольного распределения исследуют сыворотку крови здоровых коров с нормальными гематологическими показателями из благополучных по лейкозу и другим инфекционным заболеваниям хозяйств. На 3 мл сыворотки крови наслаива- ют 1 мл олеиновой кислоты и получают как .температурные зависимости сверос- слабого свечения указанной сыворотки, так и значения интенсивности свечения при температурах 33, 50, 67, 73°С, при помоши вьцвеуказанной установки. Как установлено экспвримент 1льно кривые температурных зависимостей интенсивности сверкслабого свечения сыворотки контрольных, животных проходят близко друг от друга, максимальные от личия между кривыми не превышают 20% Максимального значения. Следовательно, может быть предложен критерий заболевания, заключающийся в том, .что кривая температурной зависимости сыворотки крови животного, подозреваемого на лейкоз, выходит из области вариаций температурных кривых нормальных животных. Среднее значение интенсивности при температуре 73 С составляло ,3,85+ ннОДб)-10- имп/с, при этом дисперсия контрольного распределения J-j.,O,.12« 1О Таким образом, « -,,85loi2-0,12-10 3,15-10, 3-,,+tS 3,85-10 -0,12-10 4,55-ib- и может быть предложен критерий заболевания, заключающийся в том, что зна- . чение интенсивности свечения сыворотки крови животного, подозреваемого на лейкоз, при 73°С ниже 3, или выше 4,55-10 мп/сек. Средний коэффициент формы контрольной совокупности ,9О4р,07. При эток дисперсия контрольного распределения ,02в, таким образом .90 2Уб;о2б 0,58, Kf iJ5 -O,9O-f2 fO ,02 ,22 и может быть предложен критерий заболевания, заключающийся в том, что значение коэффициента формы кривой oHaOiротки крови животного подозреваемого на лейкоз, ниже 0,58 или выше 1,22. Проводилось .исследование сыворотки крови коров, признанных по клиническим, гематологическим, патологоанотомическим и гистологическим показателям больными лимфолейкозом. Измерялись те же пара.метры, что и для контрольных животных и сравнивались с кострольным распределением. Экспериментально получены следующие результаты: из исследованных кр вьрс больн1« животных 90% вьшли из области вариаций 1 контрольных кривых, т.е. при диагностике указанным способом допущена ощибка 10%; из доверительньсх границ при 73°С вьшши 8О% значений, Ш f/1секJff 0 JO т.е. допущена ошибка при диагностике 20%; оказалось выше доверительной границы для К 90% значений К, т.е. допущена ощнбка прк диагностике 1О%, Таким образом, наряду с уманьщением времени, необходимого для обнаружения лейкоза, имеется возможность проводить исследования большого объема, эффективно отсеивая больной крупный рогатый скот, Оэдоравливая поголовье стада. Возможно построение на основе предлагаемого изобретения переносной установки, позволяющей диагностировать лимфолейкоз крупного рогатого скота в полевых условиях. Кроме того, применение диагностики по по коэффициенту форыы кривой (К) позволяет повысить надежность результатов не только за счет их объективизации, но и за счет уменьшения влияния таких факторов как изменение чувствительности прибора, сезонные колебания ссютава сыворотки крови и др. 6В 70 fC

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЛИМФОЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГДТОГО СКОТА по изменению интенсивности сверхслабого свечения сыворотки крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и расширения .диагностических средств, измерение сверхслабого свечения сыворотки крови npoaoi дят при любой фиксированной температуре в диапазоне 25 - 73°С. (Л с. 00 СП сд