Способ получения флуоресцеин-5изотиоцианата нейтрального Советский патент 1978 года по МПК C09B11/08 C09K11/06 

Изобретение относится к способам получения флуоресцеин-5-изотиоцианата нейтрального, являющегося флуорес центным микробиологическим красителем формулы НО .п. ,ОН Это соединение применяется в флуо ресцентной микроскопии для приготовления люминесцирующих сывороток и как флуоресцентный метчик белка. В микробиологической практике для флуоресцентной метки белка и при готовления люминесцирующих сывороток широко используют хлоргидрат флуорес цеин-5-изотиоцианата. Однако он меиее удобен при применении, чем флуоресцеин-5-изотиоцианат нейтральный, так как в самом процессе применения исследователи-биологи вынуждены хлор гидрат переводить в нейтральный продукт, что усложняет исследование био логических систем, кроме того, ои менее стабилен при хранении. Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому результату является способ получения флуоресдеии-5-изотиоцианата нейтрального путем взаимодействия хроматографически чистого 5-аминофлуоресцеина с тиофосгеис в среде ацетона в присутствии реагента, удаляющего хлористый водород, образующийся в процессе реакции. В качестве такого реагента используют углекислый кальций i . Синтез проводят следующим образом. Суспензию в ацетоне .из 5-аминофлуоресцеина, тиофосгена и углекислого кальция, взятых в молярном cooTHOitjeнии 1:1,1:3,5, кипятят в течение 3 ч. После этого теплую смесь отфильтровывают от выпавших солей кгшьция, которые, однако, содержат значительное количество целевого продукта. Для извлечения его из осадка последний экстрагируют ацетоном, вновь фильтруют и промывают горячим ацетоном. Смесь ацетоновых растворов упаривают под вакуумом и затем прибавляют петролейный эфир до помутиеии. Смесь выдерживают в течеиие иочи, гфи