Способ определения общего белка в растворе Советский патент 1978 года по МПК G01N33/16 

Изобретение относится к биологической химии и может быть использовано в анализе растворов для количест венного определения общего .белка. Известен способ определения общег белка в растворе путем воздействия на испытуемый раствор реагентом с последующим фотометрированием полученного окрашенного комплекса l . Однако на приготовление модифицированного раствора Фолина затрачивается значительная часть времени (10 ч.) и известный способ не обеспечивает высокой чувствительности. Целью изобретения является повышение чувствительности и ускорение способа . Для этого на испытуемый раствор воздействуют смесью 0,25%-ного раствора 1,2-динитробензола в метаноле, формалина и 20%-ного едкого натра в соотношении 1:2:2, и перед фотометрированием реакционную смесь нагревают в течение 3-4 мин при бО-бХ С. Способ осуществляют следующим образом. в каждую из двух пробирок, в одной из которых находится 1 мл испытуемого водного раствора (опытная проба), а в другой 1 мл бидистиллята ( контрольная проба), последовательно добавляют 1 мл 0,25%-ного раствора 1,2-динитробензола (Ч ТУ-44-68, дважды перекриста; лизованного из этанола) в метаноле СХЧ ГОСТ 6995-67), 2 мл раствора 40%-ного формальдегида и 2 мл 20%-ного раствора едкого натра (ХЧ ГОСТ 4328-66). Опытную и контрольную пробы термостатируют при в течение 4iO,5 мин. Через 3 мин после окончания термостатирования измеряют разность оптических плотностей обоих проб дифференциальным способом в кюветах 2 см при 520 нм на фотоколориметре типа ФЭК-М. Концентрацию общего белка в пробе определяют по заранее построенной калибровочной кривой в координатах разность оптических плотностей - логарифм концентрации белка. Ниже на примере лактальбумина приведены расчетные данные, позволяющие оценить точность количественного определения по предлагаемой методике.

Таблица

В табл. представлены экспериментальные данные кинетики распада окраски восстановленной 1,2 динитро бензола (при 520 нм) после окончания термостатирования,

Т1редставленные результаты свидетельстйуют о том, что максимальное развитие окраски наблюдается на 3 5 мин после термостатирования с посл ующим ее ослаблением.

Т а б л и ,ц а 2

-3

1-10

-i 2-10

2-5-10 --(

5-10

1-10

-i

1-310

Примеры количественного определения общего белка в % в некоторых препаратах даны в табл.З, где также приведены соответствующие результаты определения известныгли методами.

Таблица 3

Ртуть (II)

Арсенит,арсенат

Сульфиды,сульфиты, бихроматы, 2 перманганаты 1-10 563 Оптимальными средами для проведения реакции являются водно-спиртовые. При исследовании бинарных смесей различных спиртов (от метилового до амилового) с водой существенных отличий не наблюдалось. Допустимое содержание метанола в реакционной среде не более 25%. Более высокое содержание спирта приводит к уменьшению чувствительности определения белка. Предлагаемый способ обеспечивает высокую чувствительность и сокращает время определения белка. Формула изобретения Способ определения общего белка в растворе путем воздействия на испытуе мый раствор реагентом с последующим фотометрированием полученного окращенного комплекса 1Готличающийс я тем, что, с целью повьлиения чувствительности и ускорения способа, на испытуемый раствор воздействуют смесью 0,25%-ного раствора 1-, 2-динитробензола в метаноле, формалина и 20%-ного едкого натра в соотношении 1:2;2, и перед фотометрированием реакционную смесь нагревают в течение 34 мин при eo-ei c. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе: l.JBioE.Ctiem. 193265, 1951.