Аппарат для трипсинизации ткани Советский патент 1979 года по МПК C12K9/00 

- I . . : Изобретение относится к устройст вам для получения клеточной суспензии, используемой для выращивания вирусов в культуре, и может быть ис пользовано в медицинской, микробисэ.логической и биологической промышленности. Известен аппарат для трипсинизации ткани, содержащий измельчитель с Ножами, сосуд-трипсинизатор с тер мостатирующим устройством, устройст во для отделения клеточной суспензии от трипсина и концентрирования ее, сосуды для питательного раствора и г товой суспензии и соединительные трубопроводы f1. . Однако этот аппарат имеет низкую производительность и невозможно в нем получить клеточную суспензию из различных тканей. Кроме того, процессы измельчения ткани и концентрирование изолированных клеток осуществляется на отдельных устройствах вне аппарата, что не позволяет полностью механизировать процесс трипсинизацяи. Целью изобретения является механи зация и повышение производительности процесса. Цель достигается тем, что в предлагаемом аппарате для трипсинизации ткани устройство для отделения клеточной суспензии от трипсина и концентрирования ее представляет собой центрифугу, установленную в корпусе аппарата и соединеннуютрубопронодами с сосудом -трипсинизатором, с сосудами для питательного раствора и готовой суспензии. Измельчитель установлен над сосудом-трипсинизатором и снабжен конусной обечайкой, расположенной концентрично ее валу, для предотвращения вращения измельчен-, ной массы вместе с ножами. На фиг, 1 изображен аппарат для трипсинизации ткани, схема вааимосвязи и взаимодействия узлов; на , фиг. 2 - измельчитель, вид сбоку в разрезе. Аппарат содержит корпус (не показан) , измельчитель ткани, сосудтрипсйнизатор 1 с тёрмостатирующим устройством (не показано),сосуды 25 для свежего трипсина, отработанного трипсина, питательного раствора и готовой суспензии, соответственно, два бактериологических фильтра 6 для фильтрации стерильного и стравливаемого воздуха, сосуды 7 и 8 для шлама и солевогр раствора, соединитель jJtJie труббпрЬводал 9-27, соединяющие сосуды аппарата-в технологической последовательности через распределительные коллекторы 28-34 и электрона гнйтйые клапаны 35-50, подключенные к магистрали воздуховода под давлением через один из бактериоло. гических фильтров 6, и устройство для отделения клеточной суспензии От трйпсКна и койцёнтрирований её.

.Измельчитель ткани содержит корпус 51, в котором размещен вал 52 сблоком измельчающих ножей 53, дозирующим ножом 54 и шнеком 55 для выгрузки ткани с горловиной 56. Один кЬнец вала установлен в опоре 57, а другой пропущен через головку 58 корпуса и соединен с приводным электродвигателем 59.

ИзмеЛьчйтёЯь установлен над сосудом - трипсинизатором I и имеет коиусную обечайку 60, расположенную конйентрично валу 52 для предотвращения вращения измельченной массы вместе с ножами 5.

На Внешней поверхности корпуса 51 измельчителя закреплен коллектор 61 для солевого раствора, а также патрубок 62 для подачи измельченной массы в сосуд- рипсйнизатбр.

Устройство для отделения клеточно суспензий от трипсина и концентрирования ее представляет собой центрифугу 63, установленную в корпусе аппарата и соединенную трубопроводами с сосудом-трипринйзатором 1 и сосудами 4 и 5 питательного раствора и готовой суспензии.

Сосуд-трипсинизатор 1 и центрифуг 63 снабжены индивидуальными приводами 64 и б5, этом привод ё4 ydfaйовлён на гибком валу 66;

Аппарат работает следующим образом. --

После стерилизации все составные части аппарата монтируются по заданной схеме tФиг.l).

Сосуды 2,4 и 8 заполняются, соответственно, свежим трипсином. Питательным раствором и солевым раствором Хенкокса.

В стерильном боксе эмбрионы или почки загружаются в измельчитель в особом боксе, который герметично закрывается и доставляется к аппарату.

- Затем измельчитель навешивается на патрубок 62 горловиной 56 шнека под факелом, после чего на головку

58корпуса навешивается электрздвйгатель 59 и соединяется с концом вала блоха измельчающих ножей 53.

Затем включением электродвигателя

59приводится в действие измельчиteribV осуществляющий измельчение материала.

V Измельченная из измельчителя выгружается через патрубок 62 в сосуд-трипсинизатор 1, для чего в измельчитель из сосуда 8 через электромагнитный клапан 35 по трубопроводу 9 подают солевой раствор давлением сжатого стерильного воздуха, поступающего из воздуховода через первый фильтр 6, распределительный коллектор 28, электромагнитный клапан 36 по трубопроводу. 10 в сосуд 8, из которого вытесняется раствор. При этом избыток воздуха из сосуда-трипсинизатора 1 отводится по трубопроводу 11 через электромагнитный .клапан 37, коллектор 29 и второй фильтр 6.

После окончания выгрузки измельченной ткани часть солевого раствора из сосуда-трипсинизатора I отводися в сосуд 7 для сбора шлама через коллектор 30, .H 38 и трубопровод 12 давлением воздуха, поступающего из первого фильтра ё, через коллектор 28, клапан 39 и трубопровод 13.-

Вместо солевого раствора в сосудтрипсинизатор 1 поступает порция свежего трипсина из сосуда 2 по трубопроводу 14, через клапан 40 и коллектор 30 под давлением воздуха, поступающего из первого фильтра 6, коллектор 28, клапан 41, трубопровод 15, распределительный коллектор 31-и трубопровод 16.

В сосуде-трипсинизаторе 1 процесс трйпсинизаций продолжается 10 мин с подогравом содержимого сосуда-трипсинизатора до и перемешиванием МЭшалкой (не показана).

Дезагрегированные клетки вместе с трипсином подают в центрифугу 63, где клетки с трипсином разделяются, при этом трипсин осаждается на внутренних стенках ротора центрифуги, а отработанный трипсин отводится в сосуд 3 . , , - ; .

Одновременно с центрифугированием в сосуд-т ипсиниэатор 1 подается отработанный трипсин из сосуда 3 через коллектор 34 по трубопроводу 21, ,клапан 46, распределительный коллектор 30 давлением воздуха из первого фильтра 6 через коллектор 28, клапан 41, трубопровод 15, коллектор 31 и трубопровод 22. Избыток давления из сосуда-трипсинизатора поступает по трубопроводу 11 через клапан 37, коллектор 29 во второй фильтр 6.

По окончании центрифугирования и остановки ротора центрифуги в него подается из сосуда 4 питательный раствор для отмывания и йейтрализаций ферментов.

Отмывка и нейтрализация ферментов производится путем попеременного/включения и остановки ротора центрифуги 63.

Затем питательный раствор отделяется центрифугированием и отводится в сосуд 7, избыток давления йэ котоВого выходит через пробку.

Затем в ротор центрифуги при его останове подается питательный раство из сосуда 4 для концентрирования в нем клеточной суспензии.

Затем вновь включается центрифуга и по достижении ротором скорости 500 об/мин резко выклк)чается с помощью ручного тормоза, Ьри этом клетки смываются питательным раствором.

Смытые клетки сливаются в сосуд 5 готовой суспензии, после чего избыток давления в центрифуге стравливается через коллектор 33, трубопровод 26, клапан 50, распределителный коллектор 29 и второй фильтр 6, а избыточное Давление в сосудё 5 стравливается через трубопровод 27, клапан 67, коллектор 29 и второй Фильтр 6.

В такой последовательности повторяется непрерывный процесс npitroTOBления клеточной суспензии.

Предлагаемый аппарат может работать в автоматическом программном режиме и обеспечивает повьяяенную производительность процесса. Формула изобретения

Аппарат для трипсинизации ткани, содержащей измельчитель с ножами.

сосуд-трипсинизатор с термостатирующим устройством, устройство для отделения клеточной суспензии от трипсина и концентрирования ее, сосуды для питательного раствора и готовой суспензии и соединительные трубопроводы, отличающийся тем, что, с целью механизации и повышения производительности процесса и предотвращения вращения измельченной массы вместе с ножами, устройство для отделения клеточной суспензии от трипсина и концентрировання ее представляет собой центрифугу, установленную в корпусе аппарата и соединенную трубопроводами с сосудомтрипсинизатором, с сосудами для питательного раствора и готовой суспензии, а измельчитель установлен над сосудом-трипсинизатором и снабжен конусной обечайкой, расположенной концентрично ее валу.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское

свидетельство кл. С 12 К 9/00, СССР 333184, 1972.

652217

а

st

5Г