Способ трипсинизации ткани и устройство для его осуществления Советский патент 1985 года по МПК C12M3/00 

2. Устройство для трипсинизации тквни содержащее герметичный термостатируемый сосуд-трипсинизатор, сооб щенный трубопроводами с емкостью для раствора трипсина и с холодильной камерой, и измельчитель ткани, включающий емкость для ткани и привод, отличающееся тем, что, с целью увеличения выхода клеток и повьшения чистоты клеточных суспен16

11657

зий, ёмкость измельчителя установлена соосно в сосуде-трипсинизаторе и соединена с приводом с возможность реверсивного вращения для одновременной фильтрации клеточной суспензии, при этом стенки и дно емкости выполнены из металлическое го сетчатого материала квадратного плетения с острыми кромками.

1. Способ трипсинизации ткани, включающий обработку ферментом с последующим отделением клеточных сус-v пензий, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода клеток и повышения чистоты клеточных суспензий, обработку проводят 0,080,1%-ным раствор трипсина,а отделение ведут при реверсивном вращении измельчителя с частотой 500-800 об/ /мин и интервалом 30 с.

1

Изобретение относится к биологии и может быть использовано для трипсиниэации тканей и органов животных с целью получения суспензии первичных клеток.

Цель изобретения - увеличение выхода клеток и повышение чистоты клеточных суспензий.

Способ осуществляют следующим образом.

Кусочки ткани или органы животных обрабатывают 0,08-0,1%-ными растворами трипсина. Затем сосуд с клетками приводится в реверсивное вращение с частотой 500-800 об/мин с ин.тервалом 30 с.

На чертеже представлено устройство для трипсинизации ткани.

Устройствб для трипсинизации

ткани содержит герметичный стеклянный те1м остатируемый сосуд-трипсинизатор 1, сообщенный трубопроводами с емкостью 2 для раствора трипсина и с холодильной камерой 3. На трубопроводе мезвду емкостью 2 и сосудом-трипсинизатором 1 размещен перистальтический насос 4. Устройство содержит измельчитель ткани, включающий емкость 5 для ткани и привод 6. Емкость 5 измельчителя установлена соосно в сосуде-трипсинизаторе 1 и соединена с приводом 6 через магнитную муфту 7 с возможностью реверсивного вращения для одновременной фильтрации клеточной суспензии, при этом стенки и дно емкости выполнены из металлического сетчатого материала квадратного плетения с ост рыми кромками.

Приме р 1. Эмбриональная ткань птиц обрабатывается 0,08%-ным раствором трипсина. Затем сосуд с тканью приводится в реверсивное вращение с частотой 500 об./мин с интервалом 30 с.

П р и м е р 2. Ткань почек телят измельчается до размера 2-3 мм. Далее загружают в измельчитель, в который подают 0,1%-ньй раствор трипсина. После измельчитель приводится в реверсивное вращение с частотой 800 об./мин с интервалом 30 с.

Устройство работает следующим образом.

Измельченные кусоЧки тканей или органов животных асептически загружают в емкость 5, которую помещают в стеклянный сосуд-трипсинизатор 1. Затем в последний с помощью перистальтического насоса 4 подают раствор трипсина из емкости 2. После этого емкость 5 приводится во вращение через магнитную муфту 7 от элект родвигателя 6 и совершает реверсивное вращение с частотой 500-800 об./ /мин с интервалом 30 с. Дезагрегация тканей и органов животных осуществляется путем механического воздействия в центробежном поле в присутстви фермента трипсина. Под действием раствора трипсина ослабляются межклеточные связи в кусочках органов или тканей животных. Под действием центробежного поля диспергированные кусочки органов и тканей проталкиваются через сетчатую фильтрующую перегородку. Острые кромки фильтрукидей перегородки разрушают кусочки органо и тканей до образования отдельных 3 11657 клеток. Таким образом, происходит дезагрегация органов и тканей животных и одновременно центробежное фильтрование клеточной суспензии. После достижения необходимой концент-5 рации отдельных клеток в растворе трипсина в сосуде-трипсинизаторе 1 создают избыточное давление, и клеточную суспензию перекачивают в холодильник 3. . 164 : Предлагаемый способ и устройство для трипсинизации ткани обеспечивают увеличение выхода клеток и повьшение чистоты клеточных суспензий в 1,52 раза больше по сравнению с известным способом, Кроме того, предлагаемое устройство обладает высокой производительностью.