Способ обработки спермы Советский патент 1979 года по МПК A61D7/02 

I

Изобретение относится к области искусственного осеменения животных, а более конкретно к методам искусственного осеменения лошадей спермой, сохраненной при -196 С,

Известны способы обработки спермы, , животных, включающие разбавление крио протекторами, эквилибрацию, а также инактивацию спермы в анаэробных условиях до замораживания и последующей оксигенацией 13.

Известные способы обработки спермы для повышения живучести и оплодотворяющей способности разработаны применительно к определенному виду сельскохозяйственных животных с учетом физиологических особенностей, физического и биохимического состава спермы производителей. В коневодстве, где острота отбор очень высока, а объект селекции слишком дорог, повышение оплодотворяющей способности спермы отдельных же1ребцов после оттаивания имеет Особо важное значение. Вся работа строится

на использовании особо ценных жеребцов, .выдающихся по своим резвостным качествам. В практике много примеров, когда чем выше рбзвостнЫ класс жеребца, тем 1иже качественные псжазатели его спермы (американский рысак Лоу Гановер 1,59; жеребец орловской породы Пион 2,00; арабский жеребец Мускат и др.).

Целью изобретения является повышение сохранности биологической активности сперматозоидов после замораживания.

Предложенный способ предусматривает приведение сперматозоидов в обратимо неактивное состояние при переходе в глубокий анабиоз (замораживание до

5 -196 С), исключающее нарушение структуры клетки к последующую активацию оттаянной спермы.

Инактивация спермы, заключается в гом, что свежеполученную сперму раз0бавляют известным способом Цсредой (криопротектором)и быстро (в течение, 1 мин) помещают в барокамеру, содержащую гипоксическую смесь с 93-96% t и 4-7% 0 (наилучший состав 95% Л и 5% ()j). В барокамере создается давление атм для ускорения диффузии Гаазов через мембрану клетки. При указанных гйпоксических и гипербаричес ких условиях сперму выдерживают 20ЗО мин. Оксигенацию спермы проводят в газовой смеси, состоящей из 60-90% DI в течение 8-10 мин. Влияние гипоксического воздействия на сперматозоиды достоверно снижает , ПОДВИЖНОСТЬ перед замораживанием , однако после оттаивания подвижность сперматозоидов в опытной партии спермы д(зсто)верно вь1ше, чем в контрольной. Влияние гипоксйческой обработки на подвижность сперматозоидов в баллах приведено в табл. 1. Изменение биохимических показателей приведено в табл. 2. Исследования проводят на сперме жеребцоВ| каждый овулят делится на 2 час ти: опытную и контрольную. Данные, при ведейные в табл. 2, показывают, что со .аержаниё аденозинопрлифосфатов после оттаивания достоверно уменьшилось в контрольной партии, тогда как в опытны образцах этот показатель остается без .изменений. АденоэинополИфосфаты в .основном син тезируются в цитеп азМйтической бболоч ,ке сперматозоидов и в мембранах мито .хондрий. Нарушения механизма синтеза АТФ связань со структурными изменения ми в этих органеллах. Об этом можно су дить по данным увеличения содержания неорганического фосфора после заморажи вания которое .происходит не только за счет расщепления АТФ+АДФ, но и за сче поступле.ния его.в погибшие И поврежден ные сперматозоиды из внешней среды пр разрушении их оболочки и изменении её .ПрювйцвтёльнрстИ. Таким образом, оценка спермы по со ержаншо аденозинополифосфатов, неорганического фосфора и активности щелочной фосфатазы дает точную картину биологической полноценности оттаянной спермы. . . Активизация оттаянной спермы проводит я путем обработки газовой смесью, содержащей 60-90% 0 в барокамере при давлении 2-3 атм в течение 8-10 мин. Таким образом, активизация спермы достигается путем оксигенирования при избыточном давлении. Проведенные сравни-. тельные исследования на сперме жеребцов показывают повьпцение подвижности сперматозоидов после оксигенации. Влияние кратковременной оксигенации спермы в гипербарических условиях на подвижность сперматозоидов приведено в табл. 3--. . Насыщение оттаянной спермы кислороом увеличивает . подвижность сперматозоидов. Данные этой таблицы по пережи- ваемости снимают сомнения отно.ситель- но того, что кислород, повышая/окислительные процессы, вызывает быстрое.расходование питательных веществ половых клеток и ускоряет их гибель. Образцы спермы, подвергнутые оксигенированию после оттаивания, имеют более высокую переживаемость. Особый интерес представляет вопрос о влиянии на оплодотворяющую способность спермы. Зажеребляемость подопытных кобыл приведена в табл. 4. Результаты таблицы убедительно показывают, что оплодотворяемость кобыл опытной группы значительно выше, чем в контрольной, причем- эта разн.ица получена в 2-х разных заводах. Преимущество опытной группы по сравнению с контрольной в 5О,3% оказалось вполне достоверным, ( Р 0,99). Таблица 1

Контрольная

.

Опытная (обработка гипоксией в багрокамере)

4,7 + 6V05 2,4 + 0,3

4,2 + 0,07 2,8 ± 0,1 Контрольная16 2,43±0,3 1,38±О,2 Опытная (обработка гипокси6й э барокаме16 2,28±0,3 . 2,21±0,2 ipe)

Опытная16 2,8 ± 0,1 3,2 t 0,12103 ± 5,0

Контроль16 2,4 ±. 0,1

ная

Конный завод им. С. М. Буденного

Таблиц

Таблица 3

67 +.4,8

Таблица 4 3,6±О,4 7,2±0,2 6,бК),9 4,9±1 3,8+0,2 4,9±0,4 5,9±1.0 3,О+1

Опытный конный завод

Формула изобретения;

1, Способ обработки спермы, прей- 35 мущественно жеребцов, включа{рщий разбавление, инактивацию в газовой среде, замораживание-оттаивание и окснгенацию, отличающийся тем, что, с целью повышения сояранности биологи- до ческой активности сперматозоидов после замораживаний, инактивацию проводят в барокамере гипоксичаской смесью, состоящей из 93-96%//2 и 4-7% Од, при давлении 2-3 атм в течение 20-30 мин.. 45

8 Продолжение табл. 4

Источники информации, принятые во . {внимание при экспертизе

1. Кундьшев П. П, Значение анабиоза и аэробиоза S технологии замораживания семени быка, Животноводство № 4, 1973, с. 79. ,