СРЕДА САН-ЛАКТ ДЛЯ ЗАМОРАЖИВАНИЯ СПЕРМЫ БАРАНА Российский патент 1998 года по МПК A61D19/02 

Изобретение относится к искусственному осеменению овец, в частности к технологии производства защитных сред для криоконсервации спермы барана.

Известно значительное количество защитных синтетических сред для разбавления и последующего замораживания семени барана, используемой при искусственном осеменении овец.

Современные технологии получения спермы от животных, разбавления и криоконсервации ее, приготовления защитных сред с использованием желтка куриного яйца сопряжены с нежелательной контаминацией ее посторонней патогенной и условно-патогенной микрофлорой. Последняя значительно снижает биологическую полноценность и оплодотворяющую способность спермиев, запас их живучести, подавляет факторы гуморальной защиты матки у овец при их осеменении, вызывает у животных аборты, акушерско-гинекологические заболевания и бесплодие [1, 2 и 3]. Даже при асептическом методе получения спермы внутригенитальная контаминация не исключена, так как практике не предложены стерильные разбавители спермы. В используемом нативном желтке куриных яиц содержатся десятки видов фильтрующихся вирусов, многие бактерии, в том числе микробактерии туберкулеза, сальмонеллы и др. [4].

С целью санации спермы в нее вводят синтетические средства: антибиотики или сульфаниламидные препараты (среды ВИЖ, ВНИИ плем, КазНИТИО и др.). Однако названные средства снижают биологическую полноценность, оплодотворяющую способность и запас живучести сперматозоидов, кроме того, обуславливают у животных иммунодепрессивные явления, адаптацию и селекцию резистентных к ним микроорганизмов [3].

Из большого числа известных защитных синтетических сред, используемых для разбавления и криоконсервации спермы барана, наиболее близкой по биологотехнологическому решению к предлагаемой (прототип) является лактозо-желточная среда [5, 6 и 7], состоящая из следующих ингредиентов, мл:
Лактоза, г - 12
Желток куриного яйца - 20
Вода дистиллированная - 100
При использовании этой среды в качестве криопротектора в нее дополнительно вносят глицерин, содержание которого в сперме составляет 3,5%.

Однако названная среда не защищена от развития в ней посторонней микрофлоры в связи с отсутствием в ее составе антисептиков. Кроме того, в ней нет антиоксидантов, что снижает живучесть спермиев. К недостаткам следует отнести также низкую вязкость среды. Перед замораживанием биотехнология предусматривает 4-5-кратное разбавление нативной спермы, что значительно снижает ее изначальную вязкость, но названный протектор не компенсирует ее. Последнее способствует вытеканию введенной при осеменении спермы из канала шейки матки во влагалище с последующей гибелью спермиев, что снижает оплодотворяемость животных и повышает расход спермодоз. Перечисленные недостатки среды (прототипа) обуславливают снижение оплодотворяющей способности спермы после замораживания, которая не превышает 22% [7].

Целью изобретения является разработка состава новой синтетической защитной среды, обеспечивающей повышение оплодотворяющей способности спермы барана после замораживания.

Для достижения поставленной цели в лактозо-желточно-глицериновую среду дополнительно вводится бактерицидный препарат лактобрил [8] при следующем соотношении ингредиентов, мас.%:
Лактоза - 10 - 12
Желток куриного яйца - 15 - 21
Глицерин - 5 - 9
Лактобрил - 0,02 - 0,04
Вода дистиллированная - остальное
Лактобрил представляет собой лиофильно высушенную композицию лекарственных веществ химического (бриллиантовый зеленый, калия иодид, фуразолидон) и биологического (концентрат структурирующий пищевой (КСП), вырабатываемый по ТУ 49.1171-85 из обезжиренного коровьего молока путем ферментации яблочным пектином) синтеза. Он безвреден для эмбрионов животных, их спермы, а также для окружающей среды [8 - 10], губительно действует на грамполярную антибиотикоустойчивую микрофлору. В разведении 10^-5- 10^-6 лактобрил бактерициден для золотистого стафилококка, вульгарного протея, бактерий группы кишечной палочки, сальмонелл и пиогенного стрептококка, а в разведении 10^-3- 10^-4 убивает вегетативные формы палочек синего гноя и грибы из рода кандида. В разведении 10^-4на среде Дюльбекко препарат оказывает санирующее действие на ранние эмбрионы крупного и мелкого рогатого скота, не токсичен и не обладает тератогенными свойствами [10].

Лактобрил содержит биологически активные вещества, неспецифические лактоглобулины, незаменимые аминокислоты молока, повышающие естественную резистентность, биологическую полноценность, переживаемость и жизнеспособность замороженно-оттаянной спермы в составе предлагаемой криозащитной среды.

В составе среды САН-ЛАКТ лактобрил выполняет роль актиоксиданта: снижает перекисное окисление липидов и повышает устойчивость протоплазматической оболочки спермиев, нормализуя в них обменные процессы в критические периоды жизнедеятельности вне организма животного, в процессе подготовки к замораживанию и в период осеменения овец оттаянной спермой. В результате жизнедеятельность спермиев значительно повышается, что объективно подтверждается возрастанием показателя абсолютной выживаемости оттаянных сперматозоидов барана, которая в 1,7 раза превышает уровень этого показателя в контрольном криопротекторе. Кроме того, среда САН-ЛАКТ в разведении 1:4 увеличивает на 38% вязкость оттаянной спермы, что не может не сказываться на результатах плодотворного осеменения овец (табл. 1).

Фирменное (авторское) название новой среды САН-ЛАКТ включает санирующее действие ее на постороннюю микрофлору, обеспечиваемое препаратом лактобрил.

Новая среда САН-ЛАКТ технологически воспроизводима в граничных и усредненных значениях (мас.%) компонентов (табл. 2).

Технология приготовления среды САН-ЛАКТ включает последовательное растворение в дистиллированной воде с соблюдением правил асептики лактозы, желтка, глицерина и лактобрила. Полученная от животных сперма разбавляется, а затем замораживается по известному способу [6], что поясняется следующим примером.

Пример 1. Свежеполученную сперму барана активностью не менее 8 баллов и концентрацией не менее 2,5 млрд./мл разбавляют средой САН-ЛАКТ. Разбавленную сперму охлаждают до +5^oC в течение 4 ч (эквилибрация), а затем замораживают в гранулах объемом 0,2 мл на фторопластовой пластине в парах жидкого азота. Замороженную сперму хранят в жидком азоте (-196^oC) в сосуде Дьюара.

Биологическую полноценность и жизнеспособность спермы барана, замороженной в среде САН-ЛАКТ и контрольной (прототип), определяли по плодотворному осеменению овец в производственных условиях (табл. 3).

Результаты производственной проверки свидетельствуют, что оплодотворяющая способность спермы барана, замороженной в среде САН-ЛАКТ, в 1,5 раза выше, чем в контрольной среде.

Следовательно, предлагаемая среда САН-ЛАКТ для разведения и последующего замораживания спермы барана имеет ряд позитивных отличий и существенных преимуществ по сравнению с прототипной:
дополнительное внесение в известную среду препарата лактобрил незначительно удорожает стоимость криопротектора, однако экономически целесообразно в связи с тем, что при этом повышается в 1,5 раза оплодотворяющая способность спермы барана, в 1,7 раза абсолютный показатель выживаемости сперматозоидов, на 38% вязкость оттаянной спермы, на 66% рождаемость ягнят;
повышается санирующая активность среды, что значительно снижает бактериальную обсемененность спермы и улучшает ее санитарно-биологические показатели, не вызывает адаптации к себе патогенной и условно-патогенной микрофлоры;
сокращается расход спермы и повышается результативность осеменения овец по первому половому циклу;
среда САН-ЛАКТ дает возможность витальной дифференциальной окраски спермы с целью выявления ослабленных и погибших сперматозоидов до ее замораживания: последние в среде окрашиваются в более темный зеленый цвет [11].

Источники информации
1. Замораживание семени высокопродуктивных баранов. Рекомендации Кирг. НИИ животноводства. /Под ред. Рабочев В.К. Фрунзе, 1990, с. 15.

2. Балашов Н.Г. Ветеринарный контроль при искусственном осеменении с/х животных. - М.: Колос, 1980, 271 с.

3. Криоконсервация спермы с/х животных. - Л.: Агропромиздат, 1988, 256 с.

4. Логвинов Д. Д. О массовости патологических родов у первотелок. Ж. "Зоотехния", N 7, 1993, с.39 - 40.

5. Платов Е.М. Замораживание семени барана в лактозо-желточно-этилен-гликолевой среде. - Овцеводство, 1965, N 9, с.11 - 12.

6. Замораживание и использование спермы баранов-производителей (рекомендации). /Под ред. Г.А.Зайцева. - М.: ВО "Агропромиздат", 1989, 19 с.

7. Желтобрюх Н.А. и др. Среда для замораживания спермы. Авторское свидетельство N 677750, 1977.

8. Слипченко С.Н. и др. Бактерицидный препарат лактобрил. Авторское свидетельство СССР, N 1672629, 22.04.91.

9. Лактобрил. Технические условия ТУ 9291-001-07532800-93. Инструкция по применению утверждена Департаментом по ветеринарии МСХ РФ от 18.10.93.

10. Слипченко С. Н. Разработка новых методов и средств профилактики и лечения острого послеродового и посттрансплантационного гнойно-катарального эндометрита у коров: Автореферат докторской дисс, Воронеж, 1994.

11. Майер П.К., Михайлов Н.Н. Способ дифференциальной окраски сперматозоидов. Авторское свидетельство СССР, N 345919, 1972.

Изобретение относится к искусственному осеменению овец, в частности к технологии производства защитных сред для криоконсервации спермы барана. Сущность изобретения: в лактозо-желточно-глицериновую среду дополнительно вводят бактерицидный препарат лактобрил при следующем соотношении компонентов, мас. %: лактоза 10 - 12; желток куриного яйца 15 - 21; глицерин 5 - 9; лактобрил 0,02 - 0,040; вода дистиллированная остальное. Среда позволяет повысить оплодотворяющую способность спермы барана и абсолютный показатель выживаемости сперматозоидов, а также увеличить рождаемость ягнят. 3 табл.

Среда для замораживания спермы барана, содержащая лактозу, желток куриного яйца, глицерин и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что дополнительно содержит лактобрил при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Лактоза - 10 - 12
Желток куриного яйца - 15 - 21
Глицерин - 5 - 9
Лактобрил - 0,02 - 0,04
Вода дистиллированная - Остальноее