Способ исследования структурных перестроек хромосом эукариот Советский патент 1979 года по МПК A01H1/00 

1

Изобрегение огносигся к области молекулярной генетшш и цигогенегаки эукарног, а также селекции сельскохозяйср- . венных растений и животных.

Известен способ исследования структурных перестроек хромосом эукариот, включающий в себя мутагенное повреждение хромосом химическим агентом и регистрадию количествейньз:х и качественшах показателей структурных перестроек хромосом 1 . Способ не позволяет проводить исследования механизмов структурных перестроек хромосом эукарйот 1фй згк ранее заданных и контролируемых экспериментальных условиях, в частности прч контролируемом повреждении хромосом еукарйот в изолокусе хромосомы.

Известен также, способ исследования структурных перестроек хромосом эукарит, при котором индуцируют Только .нонитевые разрывы молекулы ДНК путем обработки БУДРом. Этот способ ocymeciw вляет следующим образом. Клетки обрабатывают ВУДРоМв .3- стадии первого

митотическОго цикла, облучают длинноволновыми УФ-лучаьга на стадии d второго митотического цикла. Далее регистрируют количественные и канестченные показатели структурных пересгроек хромосом эукариот 2 }

Такой способ не позволяет исследовать модакулярше механизмы перестроек хромосом эукаряот в аюранее ёапрограммированных н экспервмётатйльно контролируемых условиях, в частнобти, при контролируемом повреждений Мопейул ДНК в изолокусе хромосом эукйряаот,

Цельк) йзЬбрегеНйя является изучение молекулярных механизмов образования перестроек хромосом / эукарнот на базе экспериментально контролируемого локального повр дения Молекул ДНК хромосом эукарйот в изопо вусё.Поставленная цель достигается тем, что щюводят дополнительные воздействия на молекулы ДНК хромосом аукариот, в частности эти воздействия заключаются в том, что на молекулЬ ДНК хромосом эукаPHOT наносят повреждения типа цикпо-бутбновызс димерЬв, выделяют и обраба -ываю клеткийа стадаи пе|жог) митотичесжрго шакла агентом, включающимся в Молекулы ДНК хромосбм эукариот, который приводит к однонитевым разрывам молекул ДНК зфомосом эукариот во втором митотнческом пшспе при облучении длинноволновыми УФ-лучами. г „ а „ Способ осуществляется следующим Однослойную культуру ететок китайского хомячка (клон № 237) облучают коротковолновыми УФ-лучами с длиной волны меньше 300 нм на стадии Lr первого митотического никла, после стадии S перво го митотического цикла, в которой Йройсходит репликация молекул ДНК, на стадии G Первого митотического цикла клетки обрабатывают БУДРом в концентрации 10 J- /мл среды и колхицином в. конйент рации 0,7Sj-/мл среда, во втором мйтотическом цикле на стадии С оё1тучай т длинноволновыхли УФ-лучами с длиной л 11 . с - А .н. больше 3QO нм в дозе 4 О эрг/мк г -2 юг- эрг/мм. Клетки фиксирзтог в смеси метанола с уксусной киспогой в ;;. пропорции 3:1, окрашивают карбол-фУксином и регистрируют количественные и качественные показа-геЛи структурных перестроек„ ромосом., . 11рй испбльЗоВанйи предлагаемого dnoсоба получают первичные повреждения молехул ДНК хромосом эукариот, причем повреждения определенного типе, а таюке пблучают возможность трансформации пв} вичных повреждений молекул ходе генёт ичёских процессов, происходящих в: живой клетке. Эть позволяет при дбпол/нЙтетьном воздействии создавать &ксперШентально контролируемые условия, а именно локальную модификацию структуры молекулы ДНК хромосом эукариот. Ф о р м у л а изобретения 1. Способ исследования структурных перестроек хромосом эукариот, включа; щий в себя повышение чувствительности молекул ДНК хромосом к последующим воздействиям1 нанесение первичных повреждений молекулам ДНК хромосом с по вышенной чувствительностью на определенном этапе мутагенеза и региотрадню структурных перестроек хромосом в митозе, отличающийся тем, что. цепью изучения механизмов перестроек ГЮМпЬпкх .,,.. « . хромосом эукариот в экспериментально .контролируемых условиях при получении первичных повреждений молекул ДНК хромосом, в заранее подготовленном локус& ,,„., предварительно выдеучастке хромосомы предварительно выделяют зону изменений ДНК хромосом, повышают чувствительность молекул ДИК хрбмосок в выделенной локальной зоне и наносят первичные; повреждения молекулам ДНК хромосом в области повышенной чувстеителЬнйсги в вьвделенной аЬнф. 2V Спосо(б п6 п.l, о т л ичаю щи и с я. тем, что, с целью изучения механизмов образования перестроек хромьсом эукариот при локализации первичных -11Ьв11еждений, однонитевых разрывов, молекул ДНК в изолокусе-Сестринских сроиатид в нитях одной полярности, npettйари -ельно выделяют зону изменения модекул ДНК типа цикло-бутановых димеров облучеш ем клеток УФ-254 нм на стадии (.j первсчо миГотйческого цикла, повышают чувствйтельность молекул ДНК хромосом в efeiделенной локальной зоне вве-; ««««eM БУДРа только на стадии .Q первоfo о ческого ttKjbra и тсмько на стаДНИ О второго митотического цикла и наносят первичные повреждения молекулам ДНК; с повышенной чувствительностью в выделенной зоне облучением УФ 313 нм только на стадии О второго митотического цикла.. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе ; Дубинин Н. П. Общая генетика, М., Наука, 1976, с. 279-344. . 2,Mulalf on reseorcb20, № 3, .p. 403-416.