(54) ШТАММ ACT1NOMYCES NARBONENS1S 2а-ПРОДУЦЕНТ ФEPMEHTAJ8-Ч , 3/1, 4-ГЛЮКАК-ГЖ)КАНОГВДРаЛАЗЫ Антагонистические.свойства. ЙдДаСвляёт роет Saccharomyces .cerevisiae Torula ituiis. Не подавляет St. aureus , Ё.coli,Bac,Sub tilis, Mycobacterium Sp. , Aspergillus niqer Fisarium solani, П p Й M e p. получения продуцента фермента.. В Ленинградской области были собраны 50 образцов почвы, их суспёндировали в равном количестве воды (вес:объем); взбалтывали 15 мин, дав ли отстояться 5 мин., надосадочную. жидкость в количестве, 0,2 мл засева ли газоном на чашки Петри с модифицированным агаром Чапека, содержащим в качестве ,единственного источника углерода бета-структурированный глюкан. Состав среды (г/л): 3,0 KjHPO - IjO/Mg-SO - 0,5;КС1 - 0,5; 0,01;глюкан - 3,0;агар-агар 20, ОТВыращивание 3-5 дней при . Отбирали наиболе:ё активно растущие колонии и рассеивали их на среду так .го же состава.Операцию пов оряли 35 раз до выделения чистой культуры. Полученные штаммы проверяли на способность выделять фермент в культуральную среду.Для этого их засевали в жидкую среду,по солевому у;оставу не отличающуюся от приведенной выше но содержащую 3% сахарозы и 0,03% гл кана в качестве индуктора.Выращивали в колбах на качалках.Активность фермента в культуральной жидкости определяли вискозиметрически.Из активной культуральной жидкости фермент высаливали сульфатом аммония при насыщении О,6,избыток соли удаляли диализом в фосфатном или ацетатном буфере, рН которого соответствовал рН культуральной жидкости. Диализованный фермент использовали для изучения его субстратной специфичности (табл.). В качестве субстратов были взяты полисахариды с различной химической структурой. Активность ферментов определяли по Приросту редуцирующих саха-, ров методом Хаггедорна-Йенсена. За единицу активности принимали то количество фермента, которое в условиях опыта вызывает образование 1 мкг i редуцирующих веществ (в пересчете на глюкозу) за 1 ч. Отбирали только те штаммы, которые продуцировали бетаглюканазу и не образовывали других гликозидаз, которые могли бы затруднить дальнейшую очистку специфического фермента. Таким образом был отобран штамм актиномицета 2а. Изучение гидролиза полисахаридов, имеющих различную химическую структуру, ферментом, продуцируемым этим микроорганизмом, показывает, что данный фермент является высокоспецифичнь1М в отношении р-1,3/1,4 связанных глюканов.
Химический Наименование субстрата связей Ламинарин глюкан I I Шизофилан Пуллулан Крахмал I . . Гликоген маннан jbПолисахаридRhodotorula irubra Полисахарид Cryptoeoccus laurentii iПолисахаридCandida albicans 4- |1 -глюкоз Целлобиоза 4- р)-галакт Лактоза 1- oL-глюкоз Трегалоза
Активность ед/мл
86+18 1Ь49+10р 19+5рОoLОТ
О Л4+0,5 О О состав субстрата и тип 1,3 1,3 и р-1,6 1,3, oL-1,4, cL-lf6 1,4 и cL-1,6 о же 1,3 и р)-1,4 1,3 l,2 и ot-1,6 идглюкоза |5-1,4 озидглюкоза (i-1,4 идглюкоза Характеристика фермента. При выращивании в описанных выше условиях выход фермента с 1 л культу ральной жидкости составляет в среднем 20 мл раствора с активностью 80 ед/мл с использованием в качестве субстрата ламинарина. Оптимум рН 6,0 температурный оптимум . Фермент сохраняет активность при хранении в ацетатном буфере при рН 6,0 и температуре в течение 10 дней В лиофилизованном состоянии в эапая ных ампулах сохраняет активность в течение 2 месяцев. При рН 2,5 за 1 ч теряет 70% своей активности, при рН 8,5 за то же время утрачивает 55% активности. Формула изобретения Штамм Actinomyces narbonensis 2а .продуцент фермента р - 1,3/1,4 глюкан-глй)каногидролазы. Хр айится в коллекции Ленинградского химико-фармацевтического института. Мо)рфологические признаки. Образуе прямые удлиненные спороносцы, расположенные в виде метелок или пучков. Споры овальные, продолговатые с гладкой оболочкой. На среде Чапека с крахмалом воздушный мицелий белый, мучнистый. Субстратный мицелий жёлтый до бежевого. На среде Гаузе .II воздушный мицелий белый,субстратный-желтый.На овсяном агаре по Ваксману воздушный мицелий светло-серый, субстратный - бежевый.На крахмало-аммиачной среде воздушный мицелий розовый, .субстратный .- желтый. На жидкой среде без встряхивания поверхностный рост с образованием мицелиальной плонки. Физиолого-биохимические признаки. Аэроб. Оптимальная температура роста 28-30 С. Оптимум 6,8-7,2. Молоко пептонизирует, желатин разжижает, крахмал гидролизует, нитраты редуцирует, клетчатку не разлагает. Ассимилирует углеводы: глюкозу, сахарозу, мальтозу, лактозу, галактозу, арабинозу, крахмал. В присутствии ,|Ь-1,3 связанного глюкана i качестве индуктора продуцирует фермент ,р-1,3/1,4-глюканглюканогидролаэу. Антагонистические .свойства. Подавляет рост Saccharomyces cerevislae, Torula utilise He подавляет Staphylococcus aure- us 209.P, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Mycobacterium sp. , As- pergillus niger, Fusarium solani. Источники информаци, принятые во внимание при экспертизе 1. Патент франции № 2173089, кл, С 12 D 13/00, опублик. 1972.
