Способ получения убитой синегнойнойпОлиВАлЕНТНОй КОРпуСКуляРНОй ВАКциНы Советский патент 1981 года по МПК C12K5/00 

t ..

Изобретение относится к областимедицинской промьшшенности, а именно, к прризводству вакцинных npenapa тов.

Известен способ получения убитой синегнойной поливалентной кс пускуляной вакцины путем раздельного вйращивания вакцинных штаммов Pseudompna lerugLnosa с последующим их смешением tlj

Однако вакцина, полученная известным способом, не обладает высоким протективным свойством и срок длительности создаваемого иммунитета не превьпиает 2-3 недель.

Цель изобретения - повысяение протейтивных свойств и длительности создаваемого иммунитета.

Это достигается тем, что выращивают штеиФИ Pseudomonas aferugtnosa R 1311, № 1312, 1313, 1314,. 1315, 1316 и № 1317.

Способ осуществляют следуквдим образом.

Вакцинные штаммы Ps.aeruginosa выращивают раздельно на различных .плотных питательных средах (мясопептонном агаре, агаре Хоттингера, синтетических средах с казеиновым пептоном и др.) в течение 13-24 ч.v

Из этих культур приготавливают суспензии, содержащие 1 млрд. микробных тел в 1 мл (по оптическому стандарту мутности ЦГНКИ или спектрофотометру СФ-40) в физиологическом растворе или бактерицидной жидкости Горгиева (эктерицид). Затем для приготовления поливалентной вакцины суспензии всех 7 штаммов .смадивают в рав0ных объемах. В,случае приготовления вакцины на физиологическом растворе в смесь добавляют консервант (0,05% мертиолята или 0,5% формалина). Полученную таким образом вакцину

5 вьщерживают в термостате, при 37С в течение 18-24-Ч,после чего произво-. дят контроль на стерильность, апироге1шость,апатогенность для экспериментальных животных (белых мышей) и им0 муногенность.

Полученная таким способом корпускулярная убитая поливалентная синегнойная вакцина должна обладать следующими медико- биологическими свой5 ствами: стерильностью)апирогенностью, атоксичностью для ., eлшeй при введении 0,5 мл подкойсно, иммуногенностью, которай выражается в 80100% выживаемости животных (зараженвходящих в состав

вых LO jjpштаммов.

0

вакцины/ через 5-7 суток после вакцинации.

Для проверки иммуногенных свойств вакцину вводят белым мышам весом 18-20 г подкожно однократно и двукратно с недельным интервалом в дозе 0,5 МП с последующеп проверкой ее протективной активности. Заражение животных Осуществляют через 7 суток после последней вакцинации: для этой цели каждый из штаммов синегнойной палочки, входящих в состав вакцины, а также штаммы серотипов| 011 и 09 вводятся животным внутрибркшинно в дозе 0,5-10 микробных тел/мл, вызывающей 100% гибель, { контрольных животных (без предварительной вакцинации ) ,Для проверки длительности защитного эффекта вакцины иммунизированных животных инфицируют культураг-м синегнойной палочки через различные сроки последней вакцинации: на 7, 21 и 56 сутки.

Эффект защитного действия вакцины оценива ют на основании вычисления процента выживших иммунизированных животных после заражения гомологичными штамглами синегнойной пгшочки.

Результаты эйспериментального изучения полученной поливалентной вакцины, приготовленной из 7 штаммов синегнойной палочки, показали, что при однократной иммунизации животных с последуюсдим заражением гомологичными штаммами синегнойной палочки ) наблюдается в отношении большинства культур достаточно высокий защитный эффект уже на седьмые сутки после иммунизации (табл. 1). Так, для штаммов PS . aerug i nosa 1314 и 1317 защита от гибели имеет место в 100% случаев, для штаммов B(J 1312 и 1315 от 80% до 100%, для штамма № 1316 80% и только в отношении штамма № 1311 наблкщается низкий защитный эффект (0-20%). Высокое защитное действие вакцины проявлялось в отношении большинства штагФ ов Рs.aerug 1nosa (f 1313, 1314, 1315, 1316 И . 1317) и через 21 день после иммунизации и через 8 недель. В отношении штс1мма PS. aerug i nosa № 1312 наблюдалось снижение защитного эффекта через 21 день и 8 недель после вакцина-i ций им животных.

Наряду с однократной приводилась и двукратная подкожнай иммунизация животных. После двукратной вакцинации мышей с последующим зараЖёШей теми же дозами тест-культур синегнойной палочки и по той же схеме защитный эффект вакцины бьол вцелом сходен с полученным riocuie однократной вакцинации животных. Имели меето незначительные колебанй:яГ процента выживших животных после заражения и только в отнсядении штамма PS. aeruginosa № 1312 процент

защиты животных от гибели сохранялся на достаточно высоком уровне, особенно через 8 недель после вакцина. ции. Если при однократной иммунизации через 8;недель выживаемость опыт ны животных составляла 0-20%, то , пбсле двукратной иммунизации с интервалом в 7 дней выживало 60-80% живот. ных (табл. 2)..-

Параллельно с экспериментами по

n выживаемости животных про-, водилось излучение срЬков образования агглютинирующих антител, определяемых по реакции агглютинации с формалинизированными штаммами Ps.aeruginosa вводящими в состав вакцины. Как при

5 двукратной, так и при однократной иммунизации агглютинины определялись у вакцинированных незараженных животных в различные сроки после иммунизации (1, 7, 14, 21, 56 сутки)

0 и у животных, выживших после заражения (1, 2,3 сутки)

При однократной подкожной иммунизации в сыворотках мьлшей наблюдается , увеличение титра агглютининов к сине5 гнойной папочке уже к 7 дню после введения -вакцины (в отноиении всех 7 штаммов). Иная картина наблюдается в отношении штамма Ps.aeruginosa № 1312, нарастание агглютинирующих антител к которому происходит уже ,

0 на первые сутки по сравнению суровнем естественных антител у чистых невакцинированных животных. На 14 день «после иммунизации наибольший титр агглютининов наблюдается к штамму

5 PS .aerug i nosa № 1313 (1:64П)титры антител к остальным шести штаммам колеблются к пределах 1:40-1:160. Самые высокие уровни титров специфических антител обнаруживаются на

0 21 сутки после иммунизации (титр антител к штдммам Ps .aeruginosa t 1313 и 1317 составлял 1:1280, к штамму 1311 - 1:640, к штаммам № 1315 и 1316 - 1:320, в отноиении штаммов №№ 1312 и 1314 - не превышал 1:160) В дальнейшем наблюдается снижение уровня специфических антител: к 8 неделям у штаммов № 1314, 1311, 1315, 1316 они сохранялись на доволь но высоком уровне (1:160 - 1:320),

тогда как для штаммов №№ 1312, 1313 и 1317 наблюдается их снижение почти до исходного уровня (1:40-1:20)

При двукратной подкожной иммунизации .нарастание титра агглютинирующих

5 антител было идентичным, с той лишь раэницез, что, начиная с первого дня после последней вакцинации, уровень, антител ко всем семи штаммам Рз,aeruginosa значительно-превышал уровень

0 после однократной вакцинации, т.е. титры агглютининов нарастали значительно быстрее и наблюдался более высокий уровень антител. Так, уже на первые сутки после последней иммунизации титр агглютининов к штаммам Ps . ае г ug i nosa (J№ 1313, 13127l 1311, 1317 и 1314, 1315и1316 составил Is 640, 1:320, 1:160 и 1:80 соответственно. В дальнейшемпроисходило увеличение титров антител и к 21 суткам наивысший уровень агглютининов к четырем штаммам - №№ 1311, 1312 1313 и 1314 - достигал 1:1280, к трем остальным 1:640. К восьмой неделе после вакцинации происходило незначительное снижение уровня антител у штаммов PS .aeruginosa №№ 1311 1314 1315 и 1316, тогда как в отношении штаммов (№ 1312, 1313 и 1317 наблюдалось снижение уровня специфических антител до 1:40. При изучении титров агглютининов иммунизированных животных после заражения на 1, 2, 3 сутки было обнаружеHOj что инфицирование вакцинированных мышей стимулирует увеличение титpa антител уже на первые сутки с последующим их нарастанием. Приготовленная таким образом синегнойная поливалетная корпускулярная вакцина обеспечивает хороший протек- тивный иммунитет и наблюдается длительное его сохра«ение в отношении гомологичных штаммов при подкожной ил1мунизации животных. Кратность вакцинации не имеет решающего значения для проявления протективного эффекта, но, оказывает влияние на уровень специфических антител. . Вакцина может быть использована для иммунопрофилактики раневых и ожоговых инфекций, ,а также в качестве иммунизирующего препарата для получения гипериммучной антисинегнойной плазмы, предназначенной для иммунотерапии болЬных с синегнойным сепсисом., - , Таблица 1

30 30 30 30 30

01 02 03 04

05

/Таблица 2

о

0. О

30

о о о

100

о о о

93,3

100

о

100

Формула изобретения

Способ получения убитой синегной- 20 ной поливалентной корпускулярной вакцины путем раздельного выращивания вакцинных штаммов Pseudortonais aeruginosa с последующим их сйёШёййе / от л йч а ющи и с я тем, что,

с целью повышения протективных свойств

,- Продолжение табл, Г

и длительности создаваемого имгАунитета, выращивают штаммы Pseudomonas seruginosa №W 1311, 1312, 1313, 1314, 1315, 1316, 1317.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Латёнт ФРГ № 1667908, ::.„ кл, 30 h 6, опублик. 1970.