Способ количественного определения тиолов Советский патент 1980 года по МПК G01N21/24 

Изобретение относится к области аналитической химии, а именно к споЬобу количественного определения сульфгидрильной группы, и моясет.быть использовано для экстракционно-фотометрического определения микрогра дмовых количеств тиолов. Известен способ количественного определения тиолов, заключающийся в обработке анализируемой пробы пхлормеркурбензоатом, с последующим фотометрированием полученного окрашенного раствора ., Недостатком способа является низкая точность определения. Наиболее близким- к изобретению по технической сущности и достигаемому результату является способ количественного определения тиолов, заключающийся в последовательной обработк анализируемой пробы дифенилкарбазоном, ацетатом натрия в смеси этанола и бензола с последующим титрованием полученного раствора п-диалкиламинофенилмеркурацетатЬм до появления устойчивой сиреневой окраски 2. Недостатком способа является низкая чувствительность,т.е.способ позволяет определять только милиграммовые количества тиолов в пробе. Целью изобретения является повышение чувствительности определения. ПосФавленная цель достигается способом количественного определения тиолов , заключающимся в обработке анализируемой пробы п-диалкиламинофенилмеркурацетатом при мольном соотношении между тиолом и п-диалкиламинофенилмеркурацетатом 1:1,5-2 с последующей обработкой полученного раствора дифенилкарбазоном в бензоле при рН среды 5,8-10,2 и спектрофотометрированием окрашенного бензольного слоя. . Отличительным признаком .способа является обработка анализируемой пробы п-диалкиламинофенилмеркурацетатом при мольном соотношении между тиолом и п-диалкиламинофенилмеркурацетатом 1:1,5-2, последующая обработка полученного раствора дифенилкарбазоном в бензоле при рН среды 5,8-10,2 и спектрофотометрирование окрашенного бензольного слоя. Пример 1. б экстракционную пробирку с .притер той пробкой вводят 10 МП водного 10 М раствора диэтилдитиофосфата, приливают 10 мл

vi

2 10 М водно-этанольного стандарт.ногораствора п-диметиламинофенилмеркурацетата, добавляют буферный раствор с рН 10,2, приливаю 10 мл 5-10 М раствора дифенилкарбазона в .бензоле, доводят объем водной фазы до 40 мл дистиллированной водой, стряхивают не менее 1,5 миН и измеряют оптическую плотность бензольного слоя при 540 мм на любом фотозлектроколориметре на фоне холостого опыта. КояичеЬтво непрореагировавшего п-диметиламинофе нилмеркурацеТата находят по калибровочному графику, построенному в тех же условиях в координатах oпти :ecкaя плотность количество 2 -Ю . М раствора п-диметиламйнофенилмеркурацетата. Количество диэтилдитофосфата вычисляют по формуле:

а T.V.r, где а - количество найденного тиола,

мкг; .

Т - концентрация п-диметиламинофенилмеркурацетата, мкг/мл; V - объем п-диМетиламинофенил- меркурацетата, пошедшего на связывание определяемого тиола, мл;

Г - отношение ЙоЙёкуляЁ)НогЬ определяемого тиола к молекулярному весу п--диметиламинофенилмёркурацетата. Объем V . находят как разность между введенным объемом п-дйметиламиноКосвенное экстракционнтиолов (п 5

фенилмеркурацетата (10 мл) и объемом найденным по калибровочному графику, т,е. по измеренной оптической плотности бензольного слоя.

Результаты определений приведены в таблице.

Примеры 2-4. Определение проводят с помощью стандартного раствора п-диметиламинофенилмеркурацетата с экстракцией при рН 6,5 или 8,0 в условиях примера 1.

Примеры 5и6 Определение проводят с помощью стандартного раствора п-диэтиламинофенилмеркурацетата при рН 8,5 или 7,0 в условиях примера 1.

К преимуществам предлагаемого способа относятся повышение чувствительности определения по сравнению с чувствительностью известного титриметрического сгособа на порядок; универсальность способа, который позволяет определять различные тиолы в одинаковых условиях; возможность определения микрограммовых количеств .тиолов, что необходимо для биологи- . ческих и других p6bekTOB; большая разница в спектрах поглощения исходных веществ и фотометрируемого комплекса; большой коэффициент молярного погашения фотометрируемого комплекса (0,) и степень однократного извлечения (95%). .

Таблица :

отометрическое определение х: 0,95)

Ди этилди тирфосфат

Цистеин Примечание. .R 2 - Формула изобретения Способ количественного определен тиолов с использованием п-диалкиламинофенилмеркурацетата и дифенилкарбазона, отличающийся тем, что, с целью повышения чувстви тельнос и определения, анализируему прибу обрабатывают п-диалкиламинофенилмеркурацетатом при мольном соотношении между тиолом п-диалкилами 41 енилмеркурацетатом. 1:1,5-2 с последующей обработкой получен-ного раствора дифенилкарбазоном в бензоПродолжение таблицы п-диметиламинофенилмеркурацетат, п-диэтиламинофенилмеркурацетат. ле при рНСреды 5,8-10,2 и спектрофотометрированием окрашенного бен.зольнего слоя. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе Г. Воуег Р. &. Фотометрическое определение SH-групп белков с п-хлормеркурбензой кислотой. - j. Amer. Chem. Soc.,1964, 76. 4331-4336. 2. Авторское свидетельство СССР № 295058, кл. G 01 N 3/40, 1971 (прототип).