Способ получения кальцитонина Советский патент 1980 года по МПК A61K35/26 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КАЛЬЦИТОНИНА

ацетона, смесь выдерлсивают при 2-8°С в течение 15-17 час.

Надосадочную жидкость декантируют, а осадок высушивают ацетоном.

280 г полученного сырца кальцитонина растворяют в 28 л смеси содержащей бутанол, воду, уксусную кислоту в соотношении 5:4:1. Через 4 час нижнюю фазу отделяют и отбрасывают, а к верхней фазе добавляют 10 объемов ацетона и оставляют при комнатной температуре на 4-6 час.

Надосадочную жидкость декантируют, а осадок высушивают ацетоном.

28 г полученного продукта (с активностью 6-8 ЕД/км) растворяют в 560 мл воды, подкисленной уксусной кислотой до рН 4,5 и добавляют этанол в концентрации 85%. Затем с помош,ью 12% раствора аммиака повышают рН до 6,5, выпавшие в осадок балластные вещества отделяют, а к раствору добавляют 10 объемов ацетона, смесь оставляют при комнатной температуре на 4 часа, Надосадочную жидкость декантируют, осадок высушивают ацетоном.

6 г полученного продукта (с активностью 25-30 ЕД/мг) растворяют в 60 мл 1 М уксусной кислоты, вносят в колонку ра: мером 4,3-134 см наполненную сефадексом Г-25 (тонкий) и элюируют этим же раствором со скоростью 150 мл/час. Объем фракции 15 мл. Фракции третьего пика, соответствуюшие пробиркам 110-130, объединяют и лиофилизируют.

Вес продукта 400 мг с активностью не ниже 200 ЕД/мг.

Пример 2. 250 г лиофилизированной шитовидной железы крупного рогатого скота измельчают, добавляют 1750 мл 76% ацетона, подкисленного соляной кислотой до рН 1,

перемешивают в течение 2 часов при комнатной температуре, по окончании экстракции жмых отделяют, а к прозрачному экстракту добавляют 4 объема ацетона, смесь выдерживают при 2-8°С в течение 15- 17 час, затем Надосадочную жидкость декантируют, осадок высушивают ацетоном.

Вес сырца кальцитонина 3-4 г, активность 0,6-0,8 ЕД/мг.

Далее сырец кальцитонина очищают, как описано в примере 1.

Предложенный способ получения высокоочищенного кальцитонина позволяет более чем в 10 раз повысить выход чистого кальцитонина до 2400 ЕД на 1 кг щитовидной железы с стандартной активностью не ниже 200 ЕД/мг.

Формула изобретения

Способ получения кальцитонина, путем экстракции щитовидной железы растворителем, обработки извлечения смесью бутанола, воды, уксусной кислоты, очистки на сефадексе и лиофилизации, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта и упрощения технологии производства, сырье экстрагируют ацетоном подкисленным соляной кислотой при температуре 4- 25°С, полученное извлечение обрабатывают ацетоном и перед очисткой на сефадексе остаток обрабатывают водой подкисленной уксусной кислотой, этанолом, затем осаждают целевой продукт из водноспиртового раствора избытком ацетона.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. J. Biochemistry 1970, 9, 1665.