Способ разрушения клеточной оболочки хлореллы Советский патент 1980 года по МПК A01H13/00 

1

Изобретение относится к микроби.ологической промышленности и касается приготовления белково-витаминных обогатителей кормов, используемых в сельском хозяйстве.

Известен способ приготовления напитка из хлореллы, заключающийся в том, что свежую хлореллу суспендируют в воде, к суспензии добавляют жидкую протеазу, продуцируемую микроорганизмами Bacillus natto, которая вызывает автолиз хлореллы l .

Недостатком известного способа является невысокий выход белковых веществ.

Наиболее близким к изобретению решением является способ разрушения клеточной оболочки хлореллы, предусматривающий тепловую обработку суспензии хлореллы, охлаждение ее с последующим ферментативным гидролизом 2 .

По этому способу гидролиз хлореллы проводят путем воздействия на оболочку цитолитическим ферментным препаратом, полученным из гриба Trichotheeium roseura.

Ферментный препарат (5%) вносят и выдерживают в течение 17-48 ч с толуолом.

Перед введением ферментного препарата хлореллу стерилизуют (пропаривают) с 10 ч. воды в течение 1 ч и охлаждают до 40°С.

Недостатком этого способа являет-, ся длительность тепловой обработки (пропаривание до 1 ч я ферментативный гидролиз до 17-48 ч), недостаточно полное разрушение клеток хлорел10лы, что снижает усвояемость ее белков при включении в корма для животных, и низкий выход (11%) белковых веществ из клеток. Кроме того, недостатком способа является добавление

15 толуола в гидролизуемую смесь и последующее его отделение.

Целью изобретения является более полное разрушение клеточных оболочек хлореллы и увеличение тем самым

20 выхода белковых веществ.

Это достигается тем, что тепловую обработку суспензии осуществляют при 85-95с в течение 3-5 MHg с последующим охлаждением до 45-48 С, а фер25ментативный гидролиз проводят путем обработки водной суспензии хлореллы культурой гриба Trichoderma lignorum б с в течение 1-3 ч.

При этом культуру гриба Т.ligno30rum б с обычно вносят в количестве 1250-400 ед С-фермента на 100 г сухо го веса хлореллы и ферментативному гидролизу подвергают суспензию биомассы, предварительно высушенной пр 110-130°С без ее тепловой обработки Способ осуществляют следующим об разом. Суспензию хлореллы с влажностью биомассы не менее 80% нагревают, например, на водяной бане при 85-95 С в течение 3-5 мин с последующим охлаждением до 45-48 С. Затем проводят гидролиз в течение 1-3 ч в присутствии культурьа гриба T.Iignorum б с, взятой в количестве 250-400 ед. С-фермента на 100 г сухого веса хлореллы. После тепловой обработки фермент и хлореллу суспендируют в воде (1000 мл воды на 100 г сухого вещества) при рН 4,8 и инкубируют 1-3 ч при 48-50С. В случае разрущения клеточной оболочки высущенной хлореллы фермен тативному гидролизу подвергают суспензию биомассы, предварительно высушенной при 110-130 С без ее. тепло вой обработки при соотношении между водой и абсолютно сухим веществом хлореллы 10;1. П р и м е. р 1. Пастообразную . хлореллу {влажность биомассы не менее 80%) нагревают на водяной бане 3-5 мин при 85 и 95°С и проводят гидролиз, используя культуру гриба T.Iignorum б с в количестве 400 ед С-фермента на 100 г сухого веса хлореллы. После тепловой обработки хлореллу суспендируют в воде (1000 мл воды на 100 г сухого вещества добавляют фермент) при рН 4,8 и инку.бируют 1-3 ч при 48-50°С с периодичес ким перемешиванием. Для определения степени гидролиза клеток смесь центрифугируют 5 мин при бООО об/мин и в надосадоч ной жидкости определяют количество растворимого белка. Данные исследований приведены в таблице. Результаты показывают, что после гидролиза в течение 3 ч coдepжa п e белка в супернатанте составляет 17% от общего количества белка в пробе (в контроле 5,3%), т.е. все белки из клеток перешли в раствор. Проведение предварительной тепловой обработки хлореллы в течение 3 и 5 мин обеспечивает одинаковое количество растворимого белка. Пример 2. К 100 г хлореллы, высушенной при 110°С, добавляют 5 г культуры гриба T.Iignorum б с (400 ед С-фермента на 100 г сухого веса) и проводят гидролиз аналогично примеру 1, но без предварительной тепловой обработки суспензии клеток хлореллы, при соотношении между водой и абсолютно сухим веществом хлореллы 10:1. После гидролиза содержание белка в супернатанте составляет 17% от общего его количества в образце. Преимуществом предлагаемого способа разрушения клеточной оболочки хлореллы является сокращение времени проведения ферментативного гидролиза примерно в шесть раз, исключение добавления в гидролизуемую смесь толуола, являющегося токсичным, легко воспламеняющимся веществом, сокращение времени тепловой обработки до 5 мин со снижением температуры до 85-95°С, исключение тепловой обработки суспензии высушенной хлореллы, сокращение расхода электроэнергии в 5-16 раз и увеличение выхода белка в раствор до 17% от общего количества. Формула изобретения 1.Способ разрушения клеточной оболочки хлореллы, предусматривающий тепловую обработку суспензии хлореллы, охлаждение ее с последующим ферментативным гидролизом, отличающийся тем, что, с целью более полного разрушения клеточных оболочек и увеличения тем самым выхода белковых веществ, тепловую обработку суспензии осуществляют при 85-98 с.В течение 3-5 мин с последующим охлаждением до 45-48с, а ферментативный гидро 1из проводят путем обработки водной суспензии хлореллы культурой гриба Trichoderma lignorum б с в течение 1-3 ч. 2.Способ ПОП.1, отличающ и и с я тем, что культуру гриба Trichoderma lignorum б с вносят в количестве 250-400 ед С-фермента на 100 г сухого веса хлореллы. 3.Способ по П.1, отличающийся тем, что ферментативному

гч1дрог1изу подвергают суспензию биомассы, предварительно высушенной при 110-130 С без ее тепловой обработки.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1.Патент Японии № 17945, кл. 36 (2) D, опублик. 1971.

2.Авторское свидетельство СССР № 276886, кл. С 12 D 13/06, 1968 (прототип).