Способ определения активности полиеновых антибиотиков Советский патент 1980 года по МПК G01N33/16 

Изобретение относится к медицинской про мышленности и может быть использовано для определения активности полиеновых антибиотиков. Известны способы определения активности полиеновых антибиотиков, например биологический способ, заключающийся в измерении величины ЗОИ угнетения роста тест-микроба на питательном агаре 1 . Однако известный способ определения актив ности полиеновых антибиотиков является очень трудоемким и не обладает быстротой определения : требуется не менее 18 ч для выявления зон зтнетения роста тест-микроба, по которым судят об активности антибиотика. Наиболее близким к изобретению является способ определения активности антибиотиков по кинетике процесса их взаимодействия с дро жами с помощью микрокалориметра. Однако этот способ отличается малой чувствительностью. Целью изобретения является повышение чув ствительности определения активности антибиотиков. Для достижения указанной цели в качестве исходного одноклеточного организма испо.льзуют хлореллу, а активность антибиотиков устанавливают по изменению величины интенсивности начальной вспьпшсн послесвечения клеток хлореллы при их взаимодействии с антибиотиками. Кроме того, для достижения указанной цели интенсивность начальной вспьшжи послесвечения измеряют в интервале 10 Пример 1. Определение активности образцов нистатина. Хлореллу выращивали на среде Тамия 6 общепринятых условиях и сохраняли при +4°С. Строили стандартную кривую зависимости начальной вспышки индукционной кривой послесвечения хлореллы от концентрации нистатина. Для этого стандарт нистатина растворяли в диметклформамиде 1 мг/мл и готовили ряд разведений из этого раствора 10, 10 ...10 в фосфатном буффере рН 7,0. Далее растворы нистатина в фосфатном буффере в количестве 0,5 мл вносили в 1 мл (3 10 клеток хлореллы-подсчет вели с помощью камеры Горяева) суспензии клеток хлореллы в фосфатном буффере рН 7.0. 37 Одновременно готовили контроль - суспензию клеток хлореллы без внесения полиенового (анти биотика. Контрольные и опытные образцы выдерживали перед регистрацией послесвечения 5 мин при +20°С и освещении Ю эрг/см - с. Затем исследуемый образец помещали в установку и экспонировали его в темноте 3 мин для получения индукционной кривой послесвечения. Индукционная кривая послесвечения клеток хлореллы характеризуется следующими параметрами величиной начальной вспышки послесвечения (А) и устанавливающимся значением интенсивности послесвечения (С) (фиг. 1) Величину начальной вспьшжи контроля суспензи клеток хлореллы принимали за 100%. По величине снижения начальной вспышки послесвечения опытного образца хлореллы определяли содержание в пробе нистатина, пользуясь стайдарт ной кривой ( фиг. 2). Пример 2. Определение активности гептаенового неароматического антибиотика амфотерицина В. Применяли установку и взвесь хлореллы, как в примере 1. Строили стандартную кртаую зависимости начальной вспышки индукционной кривой послесвечения клеток хлореллы от кон центрации стандарта-амфотерицина В (фиг. 3). Концентрацию амфотерицина В в опытных растворах определяли по снижению интенсивное ти послесвечения их смеси (1:2) с суспензией хлореллы в фосфатном буфере рН 7,0. Пример 3. Определение активности леворица. Применяли установку и взвесь клеток хлореллы, как в примерах 1 и 2. Строили стандартную кривую и определяли содержание анзибиотика в опытных растворах, как в примерах 1 и 2 (фиг. 4). В таблице приведены сравнительные данные способов определения активности полиеновых антибиотиков. Антибиотик I Минимальная концентПроизворация, мкг/мл Биологический метод по угнете1шю роста тест-микроба 0,05 -- 0,08 Нистатин Леворин. 0,04 - 0,06 Амфотери0,03 - 0,05 цин В Метод послесвечения 0,01 - 0,05 Нистатин 0,01 - 0,02 Леворин Амфотерицин в 0,02 - 0,04 Трудоемкость высокая Трудоемкость низкая. Предлагаемый способ обеспечивает быстрое и точное определение активности полиеновых антибиотиков с низкой трудоемкостью. Формула изобретения 1.Способ определения активности полиеновых антибиотиков путем установления физико-химических характеристик взаимодействия антибиотиков с одноклеточными организмами, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, в качестве исходного одноклеточного оргашзма используют хлореллу, а активносп. антибиотиков устанавливают по изменению величины интенсивносш начальной вспьшжи послесвечения клеток хлореллы при их взаимодействии с антибиотиком. 2.Способ поп. 1,отлич ающийся тем, что интенсивность начальной вспышки послесвечения измеряют в интервале 10 - . Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1.Гров Д. С., Рендалл В. А. Руководство по лабораторным методам исследования антибиотиков. Пер. с англ. М., Медгиз, 1958. 2.Bull.Brit. Mycol Soc. ,1977, V. 11, № 2.

A-wj .

мм

I СЛт